Общий анализ крови – расшифровка показателей ОАК

Кровь – это наиважнейшая материя организма, выполняющая регуляторную, питательную, выделительную, дыхательную  и другие функции.

На 50% кровь состоит из плазм. Это многокомпонентная жидкость, включающая в свой состав микроэлементы, ферменты и гормоны. Другие 50% принадлежат клеткам крови, каждая из которых выполняет свою уникальную роль.

Любое заболевание, будь то воспалительного, онкологического, аутоиммунного  или метаболического характера, отражается на качественном и количественном составе крови. И поэтому диагностика болезней начинается именно с назначения общего анализа крови.

Определение и цели назначения

ОАК (общий анализ крови) – это способ лабораторной  диагностики для оценки состояния организма и поиска источника патологии. Этот анализ может назначить врач любой специальности. В каких случаях назначается ОАК:

1. Для профилактики на медицинских осмотрах. Состав крови относительно постоянен и крайне редко выходит за рамки границ нормы у здорового человека. А некоторые болезни могут долгое время не влиять на самочувствие, и тогда профилактическая сдача станет поводом для последующего обследования.
2. При появлении первых симптомов недомогания. Анализ в этом случае может позволить определить природу болезни, степень интенсивности воспаления или аллергической реакции.
3. ОАК могут назначить повторно, чтобы отследить течение болезни через определенное время. Также для оценки эффективности проводимой терапии.

Какие показатели входят в ОАК

В общий анализ крови входят следующие показатели: эритроциты, гемоглобин, лейкоциты, цветовой показатель, гематокрит, ретикулоциты, тромбоциты, СОЭ.

Лейкоцитарная формула в некоторых лабораториях расписывается по умолчанию, в некоторых необходима пометка врача. Она включает в себя следующие показатели: эозинофилы, базофилы, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, моноциты.

Ниже представлена таблица норм для общего анализа крови:

Показатель	Лабораторное обозначение	Норма (женщины)	Норма (мужчины)	Единица измерения
Эритроциты	RBC	3,8-4,5	4,4-5,0	1012/л
Гемоглобин	HGB	120-140	130-160	г/л
Лейкоциты	WBC	4,0-9,0	4,0-9,0	109/л
Цветовой показатель	ЦП	0,8-1,0	0,8-1,0
Гематокрит	HCT	35-45	39-49	%
Ретикулоциты	RET	0,2-1,2	0,2-1,2	%
Тромбоциты	PLT	170,0-320,0	180,0-320,0	109/л
СОЭ	ESR	2-15	1-10	мм/час
Лейкоцитарная формула:
Базофилы	BAS	0-1	0-1	%
Эозинофилы	EO	0,5-5	0,5-5	%
Миелоциты		0	0	%
Метамиелоциты		0	0	%
Нейтрофилы палочкоядерные	NEUT	1-6	1-6	%
Нейтрофилы сегментоядерные	NEUT	47-67	47-67	%
Лимфоциты	LYM	18-40	18-40	%
Моноциты	MON	3-11	3-11	%

В  некоторых пунктах норма общего анализа крови для взрослых отличается от детской.

Например, норма гемоглобина  у ребенка 110-145 г/л, лейкоцитов 5,0-12,0 10⁹/л, содержание лимфоцитов может быть в пределах 26-60%. Остальные показатели анализа крови соответствуют референсным значениям для взрослых.

По приказу Министерства Здравоохранения в первый год жизни у ребенка берут кровь на общий анализ 4 раза, затем в 1 год 6 месяцев, а после ежегодно, начиная с двух лет. Такие меры необходимы для раннего поиска заболеваний крови, анемий, инфекций.

Расшифровка общего анализа крови

Ниже расписаны самые основные показатели ОАК, их функции в организме, причины отклонения в сторону повышения или понижения.

Эритроциты

Это небольшие эластичные клетки, содержащие в своей цитоплазме гемоглобин. За счет эластичности они с легкостью проходят через сосуды любого калибра. Они производятся в костном мозге, жизнеспособность одной клетки около 3-4 месяцев.

Эритроциты выполняют следующую функцию: они несут кислород из легких во все ткани и органы человека, и по обратному пути от тканей к лёгким приносят углекислый газ. Всё это происходит путём присоединения газов к гемоглобину эритроцита.

Норма эритроцитов при расшифровке анализов в среднем от 3,8 до 5,0 10¹²/л

• повышение эритроцитов в общем анализе крови возможно при обезвоживании организма вследствие рвоты и диареи, болезнях системы крови (эритремия, болезнь Вакеза), сердечной и дыхательной недостаточности.
• их снижение может быть при кровопотерях, лейкозах и лимфомах, врожденных дефектах кроветворения, гемолитической анемии, онкологии, недостаточном употреблении белка, железа и витаминов.

Следует помнить, что норма эритроцитов, как и других показателей, может отличаться в разных лабораториях. В которых, к тому же, не исключены погрешности. Поэтому не всегда пограничный результат свидетельствует о серьезной болезни.

Гемоглобин

Гемоглобин – это железосодержащий белок, который находится в эритроцитах. Именно за счёт него выполняется функция газообмена между легочной тканью и всеми клетками организма.

Отклонение уровня гемоглобина от нормы может стать причиной плохого самочувствия человека, его слабости, быстрой утомляемости. Это связано с недостатком кислорода в органах, в том числе головном мозге.

Нормальное содержание гемоглобина в общем анализе крови в среднем  120-160 г/л, зависит от пола и возраста обследуемого.

• Повышение гемоглобина может произойти в связи с обезвоживанием вследствие сахарного диабета, рвоты и диареи, в связи с сердечной недостаточностью, передозировки мочегонными препаратами, легочной недостаточностью, пороками сердца, болезнями крови и мочевыделительной  системы.
• Снижение гемоглобина в общем анализе крови возможно  при анемиях различного генеза и других заболеваниях крови, кровопотерях, недостаточном употребление белка, витаминов, железа

Лейкоциты

Это белые клетки крови, синтезируемые в костном мозге. Выполняют важнейшую функцию защиты в организме, направленную на инородные предметы, инфекции, чужеродные молекулы белка. Также они способны растворять поврежденную ткань организма, что является одним из этапов воспаления. Жизнеспособность этих клеток разнится от нескольких часов до нескольких лет.

Норма лейкоцитов в общем анализе крови соответствует 4,0-9,0 10⁹/л.

• Повышение лейкоцитов в ОАК возможно из-за физиологических погрешностей (беременность, сдача крови после приема пищи, тяжелой физической нагрузки, после прививок), воспалительных процессов системного или местного характера, обширных травмах и ожогах, активных аутоиммунных заболеваний, в послеоперационном периоде, при онкологии, лейкозах и лейкемиях.
• Если при расшифровке анализа крови лейкоциты снижены, допустимо наличие вирусных инфекций, системных аутоиммунных заболеванияй, лейкозов, лучевой болезни, гиповитаминоза. Также может повлиять прием цитостатиков и стероидов.

Цветовой показатель

Цветовой показатель (ЦП) определяется расчетным методом по специальной формуле. Он показывает  среднюю концентрацию белка гемоглобина (Hb) в одном эритроците.

В норме ЦП равен 0,8-1,0, без единиц измерения.

• Его повышение может говорить о наличии гиперхромной анемия (дефицит витамина Д).
• Снижение возможно при железодефицитной анемии, постгеморрагической анемии, лейкозах и лимфомах, хронических болезнях органов.

Гематокрит

Это показатель отражающий отношение клеток крови (лейкоцитов,  эритроцитов, тромбоцитов) к общему объему крови. Анализ проводят путём центрифугирования или с помощью анализаторов.

В норме гематокрит в среднем равен 35-50%.

• Повышение может говорить об эритремии, дыхательной недостаточности, сердечной недостаточности, обезвоживании вследствие сахарного и несахарного диабета, диареи и рвоты.
• Снижение гематокрита может быть из-за анемии, эритроцитопении, почечной недостаточности, беременности (третий триместр).

Ретикулоциты

Это предшественники эритроцитов, их промежуточная форма. Они выполняют функцию газообмена, также как и эритроциты, но с меньшей эффективностью. У здорового человека ретикулоциты при расшифровке составляют 0,2-1,2 % от общего количества эритроцитов.

• Могут быть повышены при постгеморрагическом восстановлении кроветворения, при переезде в горную местность или при лечении анемии.
• Снижаются ретикулоциты в общем анализе крови при ретикулоцитопении (замедленное кроветворение в костном мозге, приводящая к анемии).

Тромбоциты

Это небольшие плоские клетки крови, не имеющие цвета. Они выполняют несколько важнейших функций – участвуют в свертывании крови, образуют тромбоцитарный тромб, регулируют тонус сосудистой стенки, питают капилляры.

В общем анализе крови норма тромбоцитов равна 180-320 10⁹/л.

• Повышение тромбоцитов при расшифровке анализа возможно при спленэктомии (удаление селезенки), обострении хронических аутоиммунных заболеваний, анемии различного генеза, воспалительных процессах, в послеоперационном периоде, третьем триместре беременности, при онкологии, эритремии.
• Снижаются тромбоциты в ОАК при гемофилии, лекарственной тромбоцитопении, системной красной волчанке, вирусных и бактериальных инфекциях, апластической анемии, синдроме Evans, аутоиммунной тромбоцитопенической пурпуре, тромбозе почечных вен.

СОЭ

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) – это показатель, вычисляемый в процессе лабораторной пробы. Под возжействием антикоагулянтов рассчитывается время оседания эритроцитов, которое зависит от белкового состава плазмы.

Это высокочувствительный показатель, он в норме в среднем равен от 1 до 15 мм в час.

• Повышается при физиологических состояниях повышение (беременность, менструация), при инфекционных заболеваниях, злокачественных новообразованиях, системных аутоиммунных болезнях, болезнях почек, в послеоперационном периоде, при травмах и ожогах.
• Снижается при астено-невротический синдроме, выздоровлении после инфекции, кахексии, длительном приеме глюкокортикоидов, нарушении свертываемости крови, высокой концентрации глюкозы в крови, при черепно-мозговые травмах, приеме НПВС, иммунодепрессантов, антибиотиков.

Нейтрофилы

Это крупнейший подвид лейкоцитов, который в зависимости от зрелости клеток делится на следующие группы – юные нейтрофилы, палочкоядерные и сегментоядерные.

Они выполняют антимикробную функцию, способны к фагоцитозу, участвуют в воспалительной реакции.

Норма нейтрофилов в анализе крови – палочкоядерных 1-6 %, сегментоядерных  47-67 %.

• Повышение нейтрофилов при расшифровке анализа крови возможно при физиологических состояниях (солнечное и температурное воздействие, стресс, болевой синдром и т.д.), при перенесенных инфекциях, болезнях костного мозга, онкологии, приеме некоторых медикаментов, кетоацидозе, отравлении ядами и алкоголем, при паразитозе, аллергии, гипергликемии.
• Снижаются в состоянии после химиотерапии, при ВИЧ/СПИД, апластической анемии, длительном инфекционныеом заболевании, воздействии радиации, дефиците витамина В12 и фолиевой кислоты.

Лимфоциты

Это также подвид лейкоцитов, представленный в виде Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, К- и NK-лимфоцитов.

Все они участвуют в приобретенном иммунитете, синтезируют антитела, разрушают не только чужеродные, но и собственные патологические клетки (онкологические).

Норма лимфоцитов при расшифровке в ОАК – 18-40%

• Повышение в общем анализе крови может быть при вирусных инфекциях (мононуклеоз, вирусный гепатит и другие), токсопламозе, болезнях крови (лимфолейкоз хронический и острый, лимфома, лейкоз), при отравлении мышьяком, свинцом, приеме леводопы, наркотических обезболивающих.
• Снижаются лимфоциты при туберкулезе, ВИЧ, болезнях крови (лимфогранулематоз, апластическая анемия), терминальной почечной недостаточности, онкологических болезнях в терминальной стадии и в процессе лечения радио- и химиотерапией, приеме глюкокортикоидов.

Моноциты

Это вид крупнейших лейкоцитов, синтезируемых также в костном мозге. Они способны фагоцитировать (поглощать) вирусы, бактерии, опухолевые и паразитарные клетки. Регулируют кроветворную функцию, участвуют в свертывании крови.

Норма анализа крови на содержание моноцитов – 3-11 %.

• повышение моноцитов при расшифровке свидетельствует о вирусных, бактериальных (туберкулез, сифилис, бруцеллез), грибковых и паразитарных инфекциях, воспалении в стадии регенерации, системных аутоиммунных болезнях (системная красная волчанка, ревматоидный артрит), лейкозе.
• снижение моноцитов в анализе крови возможно при гнойно-воспалительных процессах, апластической анемии, в послеоперационном или послеродовом периоде, при приеме стероидов.

Подготовка к сдаче крови

Перед сдачей общего анализа крови нельзя употреблять пищу, пить чай или кофе, курить. Накануне стоит исключить прием алкоголя, жирной пищи. Сдача крови производится чаще всего утром, кровь может быть взята из капилляра или из вены.

Общий анализ крови может отразить заболевание в самых начальных стадиях, но при этом исследование является высокочувствительным. Поэтому для адекватной диагностики стоит выполнять все рекомендации перед сдачей крови.

Общий анализ крови (ОАК) — расшифровка показателей

Для интересующихся подробно рассказываем про общий анализ крови (ОАК), расшифровываем основные показатели, приводим нормы для детей и взрослых, а также рассказываем о возможных причинах отклонений. Цены на анализы крови и на все другие виды анализов смотрите в разделе «Услуги» на нашем сайте.

Общий анализ крови – это самый распространенный анализ, который широко используется для обследования при большинстве заболеваний. Изменения, происходящие в крови чаще всего отражают процессы, происходящие в целом организме.

Самым лучшим биоматериалом для этого анализа является кровь, взятая из вены (венозная кровь). Именно при заборе крови из вены удается добиться минимальной травматизации и активации клеток, примеси тканевой жидкости и имеется возможность повторить и/или расширить анализ.

В некоторых случаях, однако, возникает необходимость использования капиллярной крови (например, у новорожденных, у пациентов с труднодоступными венами и т. д.).

Интерпретация результата анализа крови должна проводиться врачом с учетом состояния пациента, истории его заболевания и клинической картины.

Необходимо знать, что величины нормальных показателей разнятся у детей разного возраста и взрослых, у мужчин и женщин и могут различаться в различных лабораториях.

Расшифровка основных показателей общего анализа крови

Концентрация гемоглобина (HGB).  Нормальным содержанием гемоглобина в крови человека считается: у мужчин — 130—160 г/л (нижний предел — 120, верхний предел — 180 г/л), у женщин — 120—150 г/л; у детей нормальный уровень гемоглобина зависит от возраста и подвержен значительным колебаниям. Так, у детей через 1—3 дня после рождения нормальный уровень гемоглобина максимален и составляет 145—225 г/л, а к 3—6 месяцам снижается до минимального уровня — 95—135 г/л, затем с 1 года до 18 лет отмечается постепенное увеличение нормального уровня гемоглобина в крови.

Гемоглобин – это основной компонент эритроцитов, он является переносчиком кислорода от легких к тканям. Уровень гемоглобина может изменяться у клинически здоровых лиц, так как некоторые факторы, например, высота проживания над уровнем моря, курение, беременность, обезвоживание, или наоборот, повышенное потребление жидкости, физическая нагрузка могут влиять на величину этого показателя. Снижение концентрации гемоглобина может указывать на наличие анемии, что требует обязательного дообследования для выяснения причины заболевания и подбора правильного лечения.

Эритроциты (RBC). Среднее содержание гемоглобина для мужчин — 13,3—18 г% (или 4,0—5,0·1012 единиц), для женщин — 11,7—15,8 г% (или 3,9—4,7·1012 единиц). Единица измерения уровня гемоглобина представляет собой процент содержания гемоглобина в 1 грамме эритроцитарной массы.

Эритроциты – это красные клетки крови в форме двояковыгнутого диска, именно они содержат гемоглобин. Основной функцией эритроцитов является обеспечение газообмена, транспортировка кислорода к тканям и органам. Также эти клетки учавствуют в поддержание кислотно-основного состояния, влияют на реологические свойства (вязкость) крови, учавствуют в иммунных процессах путем взаимодействия с антителами, циркулирующими иммунными комплексами.

Количество эритроцитов в крови — один из наиболее важных показателей системы крови. Снижение количества эритроцитов в крови – один из основных диагностических критериев анемии. Также снижение уровня этих клеток может наблюдаться при беременности, кровопотере, гипергидратации и всегда требует дообследования для исключения жизнеугрожающих заболеваний. Повышение количества эритроцитов – эритроцитозы – могут наблюдаться при полицитемии, заболеваниях легких, при пороках сердца, повышенной физической нагрузке, при пребывании на больших высотах, синдроме Кушинга, феохромоцитоме, гиперальдостеронизме, дегидратации, алкоголизме, курении.

При наличии изменений показателя эритроцитов необходима консультация терапевта, который проведет осмотр и назначит необходимые дополнительные обследования для выявления точной причины и правильное лечение.

Гематокрит (HCT) — это соотношение объёмов форменных элементов и плазмы крови. В норме гематокрит мужчины равен 0,40—0,48, а женщины — 0,36—0,46. У новорождённых гематокрит примерно на 20 % выше, а у маленьких детей — примерно на 10 % ниже, чем у взрослого.

Повышение уровня:

• Эритроцитозы
• Полицитемия
• Ожоговая болезнь
• Шок
• Дегидратация
• Лекарственные препараты (андрогены, оральные контрацептивы)

Снижение уровня:

• Анемии
• Беременность (II триместр)
• Гипергидратация
• Лекарственные препараты (амфотерицин В, ибупрофен, пенициллин)

Лейкоциты (WBC) (белые кровяные клетки). В крови взрослого человека лейкоцитов содержится в 1000 раз меньше, чем эритроцитов, и в среднем их количество составляет 4—9·109/л. У новорождённых детей, особенно в первые дни жизни, количество лейкоцитов может сильно варьировать от 9 до 30·109/л. У детей в возрасте 1—3 года количество лейкоцитов в крови колеблется в пределах 6,0—17,0·109/л, а в 6—10 лет в пределах 6,0-11,0·109/л.

Содержание лейкоцитов в крови не является постоянным, а динамически изменяется в зависимости от времени суток и функционального состояния организма. Так, количество лейкоцитов обычно несколько повышается к вечеру, после приёма пищи, а также после физического и эмоционального напряжения.играют главную роль в специфической и неспецифической защите организма от внешних и внутренних патогенных агентов, а также в реализации типичных патологических процессов (например, воспаления).

Все виды лейкоцитов способны к активному движению и могут переходить через стенку капилляров и проникать в межклеточное пространство, где они поглощают и переваривают чужеродные частицы.

Если чужеродных тел проникло в организм очень много, то фагоциты, поглощая их, сильно увеличиваются в размерах и в конце концов разрушаются. При этом освобождаются вещества, вызывающие местную воспалительную реакцию, которая сопровождается отеком, повышением температуры и покраснением пораженного участка.

Вещества, вызывающие реакцию воспаления, привлекают новые лейкоциты к месту внедрения чужеродных тел. Уничтожая чужеродные тела и поврежденные клетки, лейкоциты гибнут в больших количествах. Гной, который образуется в тканях при воспалении, — это скопление погибших лейкоцитов.

Лейкоцитарная формула – это процентное соотношение различных видов лейкоцитов. Лейкоциты различаются по происхождению, функциям и внешнему виду.

Нейтрофилы (NEUT). Зрелые сегментоядерные нейтрофилы в норме являются основным видом лейкоцитов, циркулирующих в крови человека, составляя от 47% до 72% общего количества лейкоцитов крови. Ещё 1—5 % в норме составляют юные, функционально незрелые нейтрофилы, имеющие палочкообразное сплошное ядро и не имеющие характерной для зрелых нейтрофилов сегментации ядра — так называемые палочкоядерные нейтрофилы.

Основная функция нейтрофилов — защита организма от микроорганизмов . Эти клетки играют очень важную роль в защите организма от бактериальных и грибковых инфекций, и сравнительно меньшую — в защите от вирусных инфекций. В противоопухолевой или антигельминтной защите нейтрофилы практически не играют роли.

Увеличение нейтрофилов (нейтрофилёз) может быть признаком острого и (реже) хронического инфекционного заболевания, онкологического процесса, воспалительного процесса, аутоиммунных заболеваний, отмечается в послеоперационный период, при повышенных физических нагрузках.

Снижение уровня нейтрофилов (нейтропения) может свидетельствовать о наличии онкологического заболевания крови, метазстазах в костную ткань, лучевой болезни, апластической анемии, бывает при приеме некоторых лекарственных препаратов, при анафилактическом шоке, голодании, аутоиммунных заболеваниях.

Моноциты (MONO). В норме моноциты составляют от 3% до 11% общего количества лейкоцитов крови. Это самые крупные клетки периферической крови, они являются макрофагами, то есть могут поглощать относительно крупные частицы и клетки или большое количество мелких частиц и как правило не погибают после фагоцитирования (возможна гибель моноцитов при наличии у фагоцитированного материала каких-либо цитотоксических для моноцита свойств). Этим они отличаются от микрофагов— нейтрофилов и эозинофилов, способных поглощать лишь относительно небольшие частицы и как правило погибающих после фагоцитирования. По сравнению с нейтрофилами моноциты более активны в отношении вирусов, чем бактерий, и не разрушаются во время реакции с чужеродным антигеном, поэтому в очагах воспаления, вызванного вирусами, гной не формируется. Также моноциты накапливаются в очагах хронического воспаления.

Увеличение количества моноцитов может быть при инфекциях вирусной, паразитарной, бактериальной природы и вызванной простейшими, при аутоиммунных и онкологических заболеваниях, лейкозах.

Базофилы (BASO) составляют в норме: 0 — 1 %. Это очень крупные гранулоциты: они крупнее и нейтрофилов, и эозинофилов. Гранулы базофилов содержат большое количество гистамина, серотонина, лейкотриенов, простагландинов и других медиаторов аллергии и воспаления. Эти клетки участвуют в реакциях гиперчувствительности замедленного типа, воспалительных и аллергических реакциях, регуляции проницаемости сосудистой стенки.

Повышение уровня базофилов может наблюдаться при аллергических заболеваниях, ревматизме, лейкозе, миелофиброзе, полицитемии.

Эозинофилы (EO) составляют от 1 до 5 % лейкоцитов. Эти клетки, как и нейтрофилы, способны к фагоцитозу, причём являются микрофагами, то есть способны, в отличие от макрофагов, поглощать лишь относительно мелкие чужеродные частицы или клетки. Однако, эозинофил не является «классическим» фагоцитом, его главная роль не в фагоцитозе. Главнейшее их свойство — экспрессия Fc-рецепторов, специфичных для Ig E. Физиологически это проявляется в мощных цитотоксических, а не фагоцитарных, свойствах эозинофилов, и их активном участии в противопаразитарном иммунитете. Однако, повышенная продукция антител класса E может привести к аллергической реакции немедленного типа (анафилактический шок), что является главным механизмом всех аллергий такого типа.

Повышение уровня, эозинофилия, может быть признаком аллергических заболеваний: бронхиальная астма, поллиноз, аллергический дерматит, аллергический ринит, лекарственная аллергия.

Также повышение уроня этих клеток может свидетельствовать об нвазии паразитов: аскаридоз, токсокароз, трихинеллез, эхинококкоз, шистосомоз, филяриоз, стронгилоидоз, описторхоз, анкилостомоз, лямблиоз.

Эозинофилия может быть при различных онкологических процессах, иммунодефиците, болезнях соединительной ткани (узелковый периартериит, ревматоидный артрит).

Уменьшение количества эозинофилов, эозинопения, может быть на первых этапах воспалительного процесса, при тяжелых гнойных инфекциях, шоке, сепсисе, эклампсии в родах, при интоксикация химическими соединениями и тяжелыми металлами.

Изменения в лекоцитарной формуле должны быть интерпретированы врачом, так как только специалист (терапевт, педиатр, хирург, аллерголог, травматолог, отоларинголог, гинеколог, невролог и др.) может правильно оценить показатели анализа, назначить при необходимости дополнительные обследования (биохимический анализ крови, исследование на инфекции, аллергию, УЗИ) для установки правильного диагноза и назначения лечения.

Тромбоциты (PLT) – это небольшие (2—4 мкм) безъядерные плоские бесцветные форменные элементы крови. Физиологическая плазменная концентрация тромбоцитов — 180—360.109 тромбоцитов на литр. Основной функцией этих элементов является формирование тромбоцитного агрегата, первичной пробки, закрывающей место повреждения сосуда и предоставления своей поверхности для ускорения ключевых реакций плазменного свёртывания. Таким образом, тромбоциты обеспечивают нормальную проницаемость и резистентность стенок микрососудов.

Уменьшение количества тромбоцитов в крови может приводить к кровотечениям. Увеличение же их количества ведет к формированию сгустков крови (тромбоз), которые могут перекрывать кровеносные сосуды и приводить к таким патологическим состояниям, как инсульт, инфаркт миокарда, легочная эмболия или закупоривание кровеносных сосудов в других органах тела.

Неполноценность или болезнь тромбоцитов называется тромбоцитопатия, которая может быть либо уменьшением количества тромбоцитов (тромбоцитопения), либо нарушением функциональной активности тромбоцитов (тромбастения), либо увеличением количества тромбоцитов (тромбоцитоз). Существуют болезни, уменьшающие число тромбоцитов, такие как гепарин-индуцированная тромбоцитопения или тромботическая пурпура, которые обычно вызывают тромбозы вместо кровотечений.

Изменение количества тромбоцитов требует дополнительного исследования свертывающей системы крови (коагулограммы) по назначению лечащего врача.

СОЭ или скорость оседания эритроцитов — неспецифический лабораторный показатель крови, отражающий соотношение фракций белков плазмы. Изменение СОЭ может служить косвенным признаком текущего воспалительного или иного патологического процесса. Также этот показатель известен под названием «Реакция оседания эритроцитов», РОЭ. В норме величина СОЭ у женщин находится в пределах 2—15 мм/час, а у мужчин — 1—10 мм/час.

Чаще всего увеличение СОЭ связано с острой и хронической инфекцией, иммунопатологическими заболеваниями, инфарктами внутренних органов.

Хотя воспаление и является наиболее частой причиной ускорения оседания эритроцитов, увеличение СОЭ также может обусловливаться и другими, в том числе и не всегда патологическими, состояниями. СОЭ также может увеличиваться при злокачественных новообразованиях, при значительном уменьшении числа эритроцитов, в период беременности, при приёме некоторых лекарственных препаратов. Резкое повышение СОЭ (более 60 мм/час) обычно сопровождает такие состояния как септический процесс, аутоиммунные заболевания, злокачественные опухоли, сопровождающиеся распадом тканей, лейкозы. Уменьшение скорости оседания эритроцитов возможно при гиперпротеинемии, при изменении формы эритроцитов, эритроцитозах, лейкоцитозе, ДВС-синдроме, гепатитах.

Несмотря на свою неспецифичность определение СОЭ всё ещё является одним из наиболее популярных лабораторных тестов для установления факта и интенсивности воспалительного процесса.

Изменение показателя требует консультации специалиста, правильной интерпретации в соответствии с клинической картиной состояния пациента, другими изменениями в анализе крови. Чаще всего врач проводит дополнительные обследования (УЗИ, консультации специалистов) для выявления причины и возможного заболевания.

Лейкоцитарная формула (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Лейкоцитарная формула – процентное соотношение различных форм лейкоцитов в сыворотке крови и подсчет их числа в единице объема. При наличии атипичных форм клеток проводится исследование крови под микроскопом. В отличие от эритроцитов, популяция которых является однородной, лейкоциты делятся на 5 типов, отличающихся по внешнему виду и выполняемым функциям: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы, базофилы. 9/л (10 в ст. 9/л).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь за сутки перед сдачей крови.
• Не принимать пищу за 2-3 часа до исследования (можно пить чистую негазированную воду).
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение и не курить за 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Лейкоциты, как и другие клетки крови, образуются в костном мозге. Основная их функция – борьба с инфекцией, а также ответ на повреждение тканей.

В отличие от эритроцитов, популяция которых является однородной, лейкоциты делятся на 5 типов, отличающихся по внешнему виду и выполняемым функциям: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы, базофилы.

Лейкоциты образуются из стволовых клеток костного мозга. Они живут недолго, поэтому происходит их постоянное обновление. Продукция лейкоцитов в костном мозге возрастает в ответ на любое повреждение тканей, это часть нормального воспалительного ответа. Разные типы лейкоцитов имеют несколько разные функции, однако они способны к координированным взаимодействиям путем «общения» с использованием определенных веществ – цитокинов.

Долгое время лейкоцитарную формулу высчитывали вручную, однако современные анализаторы позволяют гораздо точнее проводить исследование в автоматическом режиме (врач смотрит 100-200 клеток, анализатор – несколько тысяч). Если анализатором определяются атипичные формы клеток либо выявляются значительные отклонения от референсных значений, то лейкоцитарная формула дополняется микроскопическим исследованием мазка крови, который позволяет диагностировать некоторые заболевания, такие как, например, инфекционный мононуклеоз, определить степень тяжести инфекционного процесса, описать тип выявленных атипичных клеток при лейкозе.

Нейтрофилы – наиболее многочисленные из лейкоцитов – первыми начинают бороться с инфекцией и первыми появляются в месте повреждения тканей. Нейтрофилы имеют ядро, разделенное на несколько сегментов, поэтому их еще называют сегментоядерными нейтрофилами или полиморфноядерными лейкоцитами. Эти названия, однако, относятся только к зрелым нейтрофилам. Созревающие формы (юные, палочкоядерные) содержат цельное ядро.

В очаге инфекции нейтрофилы окружают бактерии и ликвидируют их путем фагоцитоза.

Лимфоциты – одно из важнейших звеньев иммунной системы, они имеют большое значение в уничтожении вирусов и борьбе с хронической инфекцией. Существует два вида лимфоцитов – Т и В (в лейкоцитарной формуле подсчета видов лейкоцитов по отдельности нет). B-лимфоциты вырабатывают антитела – специальные белки, которые связываются с чужеродными белками (антигенами), находящимися на поверхности вирусов, бактерий, грибов, простейших. Окруженные антителами клетки, содержащие антигены, доступны для нейтрофилов и моноцитов, которые убивают их. Т-лимфоциты способны разрушать зараженные клетки и препятствовать распространению инфекции. Также они распознают и уничтожают раковые клетки.

Моноцитов в организме не очень много, однако они осуществляют крайне важную функцию. После непродолжительной циркуляции в кровяном русле (20-40 часов) они перемещаются в ткани, где превращаются в макрофаги. Макрофаги способны уничтожать клетки, так же как нейтрофилы, и держать на своей поверхности чужеродные белки, на которые  реагируют лимфоциты. Они играют роль в поддержании воспаления при некоторых хронических воспалительных заболеваниях, таких как ревматоидный артрит.

Эозинофилов в крови содержится небольшое количество, они тоже способны к фагоцитозу, однако в основном играют другую роль – борются с паразитами, а также принимают активное участие в аллергических реакциях.

Базофилов в крови также немного. Они перемещаются в ткани, где превращаются в тучные клетки. Когда они активируются, из них выделяется гистамин, обусловливающий симптомы аллергии (зуд, жжение, покраснение).

Для чего используется исследование?

• Для оценки способности организма противостоять инфекции.
• Для определения степени выраженности аллергии, а также наличия в организме паразитов.
• Для выявления неблагоприятного воздействия некоторых лекарственных препаратов.
• Для оценки иммунного ответа на вирусные инфекции.
• Для дифференциальной диагностики лейкозов и для оценки эффективности их лечения.
• Для контроля за воздействием на организм химиотерапии.

Когда назначается исследование?

• Совместно с общим анализом крови при плановых медицинских осмотрах, подготовке к хирургическому вмешательству.
• При инфекционном заболевании (или подозрении на него).
• Если есть подозрение на воспаление, аллергическое заболевание или заражение паразитами.
• При назначении некоторых лекарственных препаратов.
• При лейкозах.
• При контроле за различными заболеваниями.

Что означают результаты?

Лейкоцитарная формула обычно интерпретируется в зависимости от общего количества лейкоцитов. 9/л

Нейтрофилы, %

Возраст	Референсные значения
Меньше 1 года	16 — 45  %
1-2 года	28 — 48  %
2-4 года	32 — 55  %
4-6 лет	32 — 58  %
6-8 лет	38 — 60  %
8-10 лет	41 — 60  %
10-16 лет	43 — 60  %
Больше 16 лет	47 — 72  %

Чаще всего уровень нейтрофилов повышен при острых бактериальных и грибковых инфекциях. Иногда в ответ на инфекцию продукция нейтрофилов увеличивается столь значительно, что в кровяное русло выходят незрелые формы нейтрофилов, увеличивается количество палочкоядерных. Это называется сдвигом лейкоцитарной формулы влево и свидетельствует об активности ответа костного мозга на инфекцию.
Встречается и сдвиг лейкоцитарной формулы вправо, когда количество палочкоядерных форм уменьшается и увеличивается количество сегментоядерных. Так бывает при мегалобластных анемиях, заболеваниях печени и почек.

Другие причины повышения уровня нейтрофилов:

• системные воспалительные заболевания, панкреатит, инфаркт миокарда, ожоги (как реакция на повреждение тканей),
• онкологические заболевания костного мозга. 

Количество нейтрофилов может уменьшаться при:

• массивных бактериальных инфекциях и сепсисе, в случаях когда костный мозг не успевает воспроизводить достаточно нейтрофилов,
• вирусных инфекциях (гриппе, кори, гепатите В),
• апластической анемии (состоянии, при котором угнетена работа костного мозга), B₁₂-дефицитной анемии,
• онкологических заболеваниях костного мозга и метастазах других опухолей в костный мозг. 9/л

  Лимфоциты, %

  Возраст	Референсные значения
  Меньше 1 года	45 — 75 %
  1-2 года	37 — 60  %
  2-4 года	33 — 55  %
  4-6 лет	33 — 50  %
  6-8 лет	30 — 50  %
  8-10 лет	30 — 46  %
  10-16 лет	30 — 45  %
  Больше 16 лет	19 — 37  %

  Причины повышенного уровня лимфоцитов:

  • инфекционный мононуклеоз и другие вирусные инфекции (цитомегаловирус, краснуха, ветряная оспа, токсоплазмоз),
  • некоторые бактериальные инфекции (туберкулез, коклюш),
  • онкологические заболевания костного мозга (хронический лимфолейкоз) и лимфоузлов (неходжкинская лимфома). 9/л

    Моноциты, %

    Возраст	Референсные значения
    Меньше 1 года	4 — 10  %
    1 — 2 года	3 — 10  %
    Больше 2 лет	3 — 12 %

    Причины повышения уровня моноцитов:

    • острые бактериальные инфекции,
    • туберкулез,
    • подострый бактериальный эндокардит,
    • сифилис,
    • онкологические заболевания костного мозга и лимфоузлов,
    • рак желудка, молочных желез, яичников,
    • заболевания соединительной ткани,
    • саркоидоз. 9/л

      Эозинофилы, %

      Возраст	Референсные значения
      Меньше 1 года	1 — 6 %
      1 — 2 года	1 — 7 %
      2 — 4 года	1 — 6 %
      Больше 4 лет	1 — 5 %

      Наиболее распространенные причины повышения уровня эозинофилов:

      • аллергические заболевания (бронхиальная астма, сенная лихорадка, пищевая аллергия, экзема),
      • заражение паразитическими червями,
      • аллергическая реакция на лекарственные препараты (антибиотики, аллопуринол, гепарин, пропранолол и др. 9/л.

        Базофилы, %: 0 — 1,2 %.

        Увеличение содержания базофилов встречается редко: при онкологических заболеваниях костного мозга и лимфоузлов, истинной полицитемии, аллергических заболеваниях.

        Уменьшаться количество базофилов может при острой фазе инфекции, гипертиреозе, длительной терапии кортикостероидами (преднизолоном).

         Скачать пример результата

        Также рекомендуется

        Кто назначает исследование?

        Врач общей практики, терапевт, педиатр, хирург, инфекционист, гематолог, гинеколог, уролог.

        Расшифровка общего анализа крови

        Уважаемые пациенты! Когда Вы получаете бланк общего анализа крови, у Вас возникает вопрос: «Что означают эти показатели?» В данной статье Вы найдете объяснение основных показателей общего анализа крови. Предупреждение: для объяснения показателей анализа крови и постановки диагноза необходима консультация специалиста (врача)!

        Нормальные показатели:

        WBC – лейкоциты – от 4,0 до 10,0 млрд/литр,

        Lymph –лимфоциты — от 0,8 до 4,0 млрд/литр,

        Mid- (содержание смеси моноцитов, эозинофилов, базофилов и незрелых клеток) —

        от 0,1 до 1,5 млрд/литр,

        Gran – гранулоциты — от 2,0 до 7,0 млрд/литр,

        Lymph% – лимфоциты — от 20 до 40%,

        Mid%-  (содержание смеси моноцитов, эозинофилов, базофилов и незрелых клеток) -от 3 до 15%,

        Gran% — гранулоциты — от 50 до 70%,

        HGB -гемоглобин — 20-160 гр/литр

        RBC – эритроциты — от 3,5 до 5,5 трлн/литр,

        HCT – гематокрит – от 37,0 до 54,0,

        MCV —  средний объем эритроцита- от 80,0 до 100,0 фемтолитров,

        MCH – среднее содержание гемоглобина в эритроците — от 27,0 до 34,0 пикограммов,

        MCHC – средняя концентрация гемоглобина в эритроците — от 320 до 360,

        RDW – CV – ширина распределения эритроцитов — от 11,0 до 16,0,

        RDW – SD — ширина распределения эритроцитов (стандартное отклонение) –

        от 35,0 до 56,0,

        PLT – тромбоциты — от 180 до 320 млрд/литр,

        MPV – средний объем эритроцита — от 6,5 до 12,0,

        PDW – относительная ширина распределения тромбоцитов по объему — от 9,0 до 17,0,

        PCT – тромбокрит (доля тромбоцитов в общем объеме цельной крови) от 0,108 до 0,282

        ESR — СОЭ —  менее 12, но показатели нормы могут сильно изменяться в зависимости от возраста и пола.

        Значение показателей:
        

        WBC – лейкоциты . Лейкоциты (белые кровяные тельца) защищают организм от инфекций (бактерий, вирусов, паразитов. Высокий уровень лейкоцитов говорит о наличии бактериальной инфекции, а снижение числа лейкоцитов встречается при приеме некоторых лекарств, заболеваниях крови.

        Lymph –лимфоциты — от 0,8 до 4,0 млрд/литр.  Лимфоцит – это вид лейкоцита, который отвечает за выработку иммунитета и борьбу с микробами и вирусами. Увеличение числа лимфоцитов (лимфоцитоз) встречается при вирусных инфекционных заболеваниях , а также при заболеваниях крови (хронический лимфолейкоз и др). Уменьшение числа лимфоцитов (лимфопения) встречается при тяжелых хронических заболеваниях, приеме некоторых лекарств, подавляющих иммунитет (кортикостероиды и др.).

        Mid. Моноциты, эозинофилы, базофилы и их предшественники циркулируют в крови в небольших количествах, поэтому нередко эти клетки объединяют в одну группу, которая обозначается как MID. Эти виды клеток крови также относятся к лейкоцитам и выполняют важные функции (борьбу с паразитами, бактериями, развитие аллергических реакций  и др.)

        Gran – гранулоциты. Это лейкоциты, которые содержат гранулы (зернистые лейкоциты). Гранулоциты представлены 3 типами клеток: нейтрофилы, эозинофилы  и базофилы. Эти клетки участвуют в борьбе с инфекциями, в воспалительных и аллергических реакциях.

        Lymph% – лимфоциты — от 20 до 40%,

        Mid%-  (содержание смеси моноцитов, эозинофилов, базофилов и незрелых клеток) -от 3 до 15%,

        Gran% — гранулоциты — от 50 до 70%,

        HGB –гемоглобин. Особый белок, который содержится в эритроцитах и отвечает за перенос кислорода к органам. Снижение уровня гемоглобина (анемия) приводит к кислородному голоданию организма. Повышение уровня гемоглобина, как правило, говорит о высоком количестве эритроцитов, либо об обезвоживании организма.

        RBC – эритроциты. Эритроциты выполняют важную функцию питания тканей организма кислородом, а также удаления из тканей углекислого газа, который затем выделяется через легкие. Если уровень эритроцитов ниже нормы (анемия) организм получает недостаточные количества кислорода. Если уровень эритроцитов выше нормы (полицитемия, или эритроцитоз) имеется риск того, что красные кровные клетки склеятся между собой и заблокируют движение крови по сосудам (тромбоз).

        HCT – гематокрит. Показатель, который отражает, какой объем крови занимают эритроциты. Повышенный гематокрит встречается при эритроцитозах (повышенное количество эритроцитов в крови), а также при обезвоживании организма. Снижение гематокрита указывает на анемию (снижение уровня эритроцитов в крови), либо на увеличение количества жидкой части крови.

        MCV —  средний объем эритроцита. Эритроциты с малым средним объемом встречаются при микроцитарной анемии, железодефицитной анемии и пр. Эритроциты с повышенным средним объемом встречаются при мегалобластной анемии (анемия, которая развивается при дефиците в организме витамина В12, либо фолиевой кислоты).

        MCH – среднее содержание гемоглобина в эритроците. Снижение этого показателя встречается при железодефицитной анемии, увеличение – при  мегалобластной анемии (при дефиците витамина В12 или фолиевой кислоты).

        MCHC – средняя концентрация (насыщенность) гемоглобина в эритроците. Снижение этого показателя встречается при железодефицитных анемиях, а также при талассемии (врожденное заболевание крови). Повышение этого показателя практически не встречается.

        RDW – CV – ширина распределения эритроцитов. Показатель используется при лабораторной оценке анемий, воспаления, онкопатологии, заболеваний сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта.
        RDW – SD — ширина распределения эритроцитов (стандартное отклонение).

        PLT – тромбоциты. Небольшие пластинки крови, которые участвуют в образовании тромба и препятствуют потере крови при повреждениях сосудов. Повышение уровня тромбоцитов в крови встречается при некоторых заболеваниях крови, а также после операций, после удаления селезенки. Снижение уровня тромбоцитов встречается при некоторых врожденных заболеваниях крови, апластической анемии (нарушение работы костного мозга, который вырабатывает кровяные клетки), идиопатической тромбоцитопенической пурпуре (разрушение тромбоцитов из-за повышенной активности иммунной системы), циррозе печени

        MPV – средний объем эритроцита. Повышение MPV могут спровоцировать сахарный диабет, тромбоцитодистрофия, патологии крови (системная волчанка), спленэктомия, алкоголизм, миелоидный лейкоз, атеросклероз сосудов, талассемия (генетическое нарушение строения гемоглобина), синдром Мея-Хегглина, постгеморрагическое малокровие. Ниже нормы данный показатель опускается вследствие лучевой терапии, при циррозе печени, анемии (пластическая и мегалобластной), синдроме Вискота-Олдрича.

        PDW – относительная ширина распределения тромбоцитов по объему. Этот показатель косвенный, учитывающийся в комплексе других показателей.

        PCT – тромбокрит (доля тромбоцитов в общем объеме цельной крови). Главным назначением этого исследования является оценка риска развития тромбоза или, наоборот, кровотечения, что и в обоих случаях может нести угрозу для жизни больного.

        ESR — СОЭ. Неспецифический индикатор, повышающийся при многих патологических состояниях абсолютно разного происхождения т(инфекционные заболевания, болезни крови, опухоли, воспалительные процессы, аутоиммунные заболевания).  
        

        На общий анализ крови записываться не надо! Забор крови производится с 7.30 до 12.00.

        Моноциты (MONO — monocytes)

        Самые крупные клетки периферической крови. Моноциты обладают выраженной фагоцитарной функцией (являются макрофагами), участвуют в защитных реакциях организма путем продукции цитокинов, в процессах обмена веществ.

        Референсные значения (вариант нормы)

        Моноциты (MONO — monocytes) — %

        Возраст	Мужчины	Женщины
        <2 нед	5,0–15,0
        2 нед – 1 год	4,0–10,0
        1–2 года	3,0–10,0
        2 года – 15 лет	3,0–9,0
        >15 лет	3,0–11,0

        Моноциты (MONO — monocytes) -абсолютное содержание, 10⁹ клеток /л

        Возраст	Мужчины	Женщины
        3 мес – 17 лет	0,37 – 1,26
        > 17 лет	0,29 – 0,95	0,25 – 0,84

        Увеличение значений (моноцитоз)	Уменьшение значений (моноцитопения)
        Реактивный: вирусные, паразитарные, бактериальные и вызванные простейшими инфекции; воспалительные заболевания; аутоиммунные заболевания; гранулематозные процессы; злокачественные новообразования Опухолевой: острый монобластный и миеломонобластный лейкоз хронический моноцитарный миеломоноцитарный лейкоз	Гипоплазия и аплазия костного мозга Волосатоклеточный лейкоз Острый лейкоз Острые инфекции Прием некоторых лекарственных препаратов

        Общий анализ крови на лимфоциты: показания, подготовка, норма

        Лимфоциты — что это, какие они бывают

        Лимфоциты – это один из компонентов белых кровяных телец, для их обнаружения используют общий анализ крови на лимфоциты. Они играют важную роль в формировании иммунных реакций. Их функция состоит в распознавании возбудителей болезней и мутировавших собственных клеток. После идентификации чужеродного объекта лимфоциты уничтожают его тем или иным путем: фагоцитоз, выработка специальных антигенов. Для уничтожения собственных клеток, переродившихся в раковые либо подвергшиеся другим изменениям лимфоциты подают особый химический сигнал, который заставляет такую клетку запустить процесс самоуничтожения. Помимо общего анализа крови на лимфоциты, в медицинском центре МедАрт проводят биохимический анализ крови.

        Существует три разновидности этих клеток:

        1. Т-лимфоциты. Они созревают в тимусе. Играют важную роль в борьбе с инородными телами, инфекциями. Часть Т-лимфоцитов выполняет регуляторные функции, отвечает за длительность и силу иммунной реакции. Именно эти клетки поражаются при заражении ВИЧ.
        2. В-лимфоциты. Их основная задача – выработка антител против вирусов, других возбудителей инфекции. Кроме того, они способны сохранять информацию о перенесенных заболеваниях создавая тем самым постоянный иммунитет.
        3. NK – клетки. Их главная функция – обнаружение и устранение клеток организма переродившихся в злокачественные.

        Образуются лимфоциты в красном костном мозге, их молодые, незрелые формы называются лимфобластами. Созревание идет в несколько стадий, происходит не только в костном мозге, но и в лимфоидных узлах, других органах лимфатической системы.

        Страсти в Little Big ❗️

        Вокалистка Софья Таюрская в интервью призналась, что у нее отношения с Ильичем. 

        Правда это или нет ❓ Мы проверили инстаграм профиль Софьи в сервисе lovereport.ru

        Оказывается больше всего она взаимодействует с Ильичем. Значит это не очередной пиар ход.

        _______________

        ✅ Если хочешь проверить своего парня/девушку, то лови ссылку — lovereport.ru

        Появление повышенного количества лимфоцитов может служить маркером патологий костного мозга, развития опухолевых процессов в нем. Увеличение уровня лимфобластов также фиксируется при длительных инфекционных процессах. В этом случае это служит признаком истощения защитных сил организма. Иммунная система не успевает подготовить достаточное количество лимфоцитов к борьбе с возбудителем, это и становится причиной появления в крови большого количества лимфобластов.

        Показания для проведения анализа

        Общий анализ крови на лимфоциты назначают если есть подозрение на повышение либо уменьшение их количества. Анализ может назначаться по другим причинам, он позволяет получить много ценных данных о состоянии крови и всего организма. К основным показаниям относятся:

        • Выявление реакции иммунитета на присутствие патогенных микроорганизмов.
        • Состояние иммунитета человека.
        • Физический и химический состав крови.
        • Профилактический анализ – для обнаружения скрытых изменений в формуле крови, которые не проявляют себя конкретными симптомами.

        Подготовка к анализу

        Анализ на лимфоциты входит в общий анализ крови, правила их проведения совпадают. То есть особой подготовки такое обследование не требует. Есть всего два условия которые нужно соблюдать:

        • Кровь берется в утренние часы.
        • За 8-12 часов до забора крови нужно воздержаться от пищи.

        Также не следует курить за 2-3 часа до проведения процедуры. Компоненты табачного дыма могут вызывать серьезные временные изменения в уровне белых кровяных клеток. Стоит избегать употребления алкоголя за 2-3 дня до взятия анализа так как алкоголь также может повлиять на достоверность полученных результатов.

        Если не соблюсти эти требования, возможно ухудшение точности исследования, что приведет к получению врачом недостоверной информации и возможным ошибкам в диагностике либо повторному назначению обследования.

        Метод исследования

        Забор материала для анализа на лимфоциты осуществляется из вены при помощи обычного шприца либо специальной вакуумной системы. Традиционная техника взятия анализа при помощи обычного шприца на данный момент устарела и может приводить к следующим сложностям:

        • Свертывание крови в игле.
        • Разрушение части клеток крови.
        • Длительное время проведения манипуляции.
        • Контакт крови с окружающей средой
        • Сложность с соблюдением правильного соотношения крови и реагентов.Кроме того, традиционная техника не исключает контакта медперсонала с биоматериалом пациента, что может представлять опасность для здоровья. Поэтому во многих клиниках для забора крови применяют современные вакуумные контейнеры.

        Кровь в него поступает за счет вакуума в пробирке, все параметры вакутейнера подбираются на этапе производства с целью сократить время для забора крови и обеспечить правильное соотношение количества реагента и крови.

        Преимущества вакуумных систем:

        • Стандартизированный процесс забора крови, занимающий минимальное время.
        • Полностью исключен контакт медперсонала с кровью пациента.
        • Простая маркировка и идентификация проб, что исключает путаницу с пробирками.
        • Почти безболезненное проведение процедуры.

        Взять кровь для общего анализа можно из пальца, но в настоящий момент эта процедура используется значительно реже.

        Нормы

        Нормальный уровень лимфоцитов в крови зависит от возраста пациента. У детей количество лимфоцитов выше, со временем этот показатель постепенно снижается. На количество этих клеток влияет пол пациента, у женщин показатель относительно выше. Это связано с большей активностью и адаптивной способностью лимфатической системы женского организма.

        
        

        Возраст человека	Абсолютный содержание	Соотношение в %
        У ребёнка младше года	2-12	45-71
        У годовалого ребенка	4-10	38-61
        2-4 года	3-9	34-50
        4-10 лет	1,6-6,7	31-51
        10-18 лет	1,3-5,3	31-43
        Старже 18 лет, взрослые люди	1-4,9	20-40
        Онкориск женский:	265	368

        Лимфоциты повышены

        Причиной того, что лимфоциты повышены часто выступают разнообразные вирусные инфекции. Такое повышение называется лимфоцитозом, чаще всего его регистрируют при заболеваниях, вызванных вирусами:

        • Эпштейн-Барр.
        • Аденовирус.
        • Герпес.
        • Детские инфекции (краснуха, корь, паротит).

        Количество лимфоцитов может расти при некоторых бактериальных инфекциях, например, сифилисе, коклюше или туберкулезе. К лимфоцитозу могут приводить заболевания, вызванные простейшими, например, малярия и токсоплазмоз. Нередко повышение лимфоцитов вызвано глистными инвазиями.

        Лимфоциты могут быть повышаться по причинам, не связанным с инфекциями. К ним относятся:

        1. Реакции гиперчувствительности.
        2. Стрессовый лимфоцитоз.
        3. Аутоиммунные заболевания.
        4. Нарушения эндокринных органов, особенно щитовидной железы.
        5. Развитии опухолей и предопухолевых процессов.

        К наиболее ярким признакам повышения числа лимфоцитов относятся:

        • Увеличенные печени, селезенки и лимфатических узлов.
        • Общее недомогание, проявления инфекций органов дыхания, покраснения и отек слизистых оболочек.
        • Резкое повышение либо снижение температуры, сопровождающееся ознобом.
        • Диспепсические явления – рвота, нарушения стула, тошнота.
        • Расстройства нервной системы на фоне повышенной температуры.

        Нужно учитывать, что лимфоцитоз не всегда проявляется через выраженные симптомы. Зачастую повышения уровня этих клеток обнаруживается случайно. Точно определить причину по которой произошло изменение формулы крови сможет только врач, для этого часто требуется проведение дополнительных тестов.

        Чтобы устранить лимфоцитоз, нужно вылечить заболевание, которое привело к повышенной реакции иммунитета. Важно понимать, что кроветворная система отвечает на выздоровление с определенной задержкой. Даже после полного излечения лимфоцитоз может сохраняться до нескольких месяцев.

        Лимфоциты понижены

        Понижение лимфоцитов называется лимфопенией. Такое состояние характерно для следующих заболеваний:

        • СПИД.
        • Длительные, тяжело протекающие инфекции.
        • Патологии костного мозга.
        • Опухоли лимфатических тканей.
        • Облучение радиацией.
        • Прием некоторых групп препаратов, таких как цитостатики.
        • Беременность.

        В большинстве случаев снижение уровня лимфоцитов свидетельствует об истощении иммунной системы, когда организм по различным причинам не в состоянии поддерживать нужный уровень этих клеток в крови.

        Лимфопения редко проявляется характерными симптомами. К наиболее частым признакам этого состояния относятся:

        • Уменьшение либо полное отсутствие миндали и других периферических лимфоузлов.
        • Заболевания кожи – экзема, пиодермия.
        • Общие признаки болезней крови – язвы слизистой оболочки рта, петехии, бледность, желтуха.
        • Увеличение печени и селезенки.

        Как и в случае с лимфоцитозом, для нормализации уровня этих клеток нужно устранить причину, которая привела к патологическому состоянию. Нужно обратиться к врачу, который сможет установить точный диагноз и назначить правильную схему лечения.

        В случае лимфопении беременных, при умеренном снижении уровня лимфоцитов особых мер принимать нет необходимости. Достаточно усиленного контроля за состоянием здоровья и регулярного прохождения всех нужных обследований. Если произошло резкое падение лимфоцитов – стоит обратиться за медицинской помощью для дополнительной диагностики.

        Лимфоцитоз у детей

        Особенностью детского возраста являются достаточно значительные изменения в формуле крови. Выделяют два так называемых перекреста, когда происходят резкие изменения соотношения клеток крови. Первый происходит в возрасте около недели после рождения, когда количество лимфоцитов начинает превышать количество остальных клеток крови. Второй перекрест происходит в 5-6 лет, когда количество лейкоцитов начинает преобладать над лимфоцитами.

        Эти явления носят физиологический характер и являются проявлениями нормального развития иммунной, кроветворной систем. Но встречаются и патологические лимфоцитозы, которые свидетельствуют о развитии разнообразных болезней (в основном инфекционной природы).

        Основной причиной повышения лимфоцитов в детском организме выше нормы являются инфекционные болезни, вызываемые различными вирусами. Чаще всего это заболевания, характерные для детского возраста – корь, краснуха, простудные инфекции. Может расти уровень лимфоцитов и по другим причинам:

        • Аллергические реакции.
        • Авитаминоз, систематическое недоедание.
        • Бронхиальная астма.
        • Отравления химическими веществами.

        Несмотря на то, что повышение лимфоцитов в детском организме далеко не всегда сопровождается характерными симптомами, существует ряд признаков свидетельствующих об этом. К ним относятся:

        • Повышение температуры тела.
        • Сыпь.
        • Увеличение миндалин и других региональных лимфоузлов.
        • Нарушения пищеварения.
        • Симптомы общего недомогания – слабость, быстрая утомляемость.

        При проявлении таких симптомов нужно обратиться к педиатру и пройти рекомендуемые обследования. После постановки диагноза врач назначит соответствующее лечение, которое устранит причину активизации иммунной системы.

        Нужно учитывать, что нормальный уровень лимфоцитов восстанавливается с запозданием. Даже после полного восстановления после инфекции либо других заболеваний пройдет от нескольких недель до 1-2 месяцев до нормализации уровня белых кровяных клеток. Это физиологический процесс, который не требует дополнительного лечения и не должен вызывать беспокойства.

        Моноциты — Анализ крови — Расшифровка анализов онлайн

        Что такое моноциты?

        Моноциты (от греческих слов, означающих «один» и «вместилище», «клетка») – самые крупные виды лейкоцитов, не содержат гранул, имеют бобовидную форму. Среди общего числа лейкоцитов они составляют от 2 до 10%. Основная работа моноцитов – обеспечение иммунной защиты организма.

        Все клетки крови происходят из общих родительских клеток – стволовых клеток костного мозга (миелопоэз). Из костного мозга моноциты попадают в кровь еще не окончательно созревшими клетками. Эти незрелые клетки обладают самой большой способностью к фагоцитозу. Из кровеносного русла моноциты перемещаются в ткани, где они превращаются в макрофаги. Макрофаги встречаются практически во всех тканях организма. Макрофаги – основные «очистители» человеческого организма, так как их работа заключается в поглощении антигенов и обработке их так, чтобы они могли распознаваться лимфоцитами как чужеродные вещества. Больше всего зрелых моноцитных макрофагов находится в печени (56,4 %), в легких (14,9 %), селезёнке (15 %), перитонеальной полости (7,6 %).

        Функции

        Расшифровать «Биохимический анализ крови»
        Расшифровать «Общий анализ мочи»
        

        Моноциты – главные клетки иммунной системы, которые имеют выраженные фагоцитарные способности. Они могут поглощать как относительно крупные элементы, так и большое количество мелких, и, как правило, не погибают после этого.

        Макрофаги значительно больше по размерам, чем другие формы лейкоцитов, живут дольше, способны функционировать в кислой среде, что отличает их от эозинофилов и нейтрофилов, которые поглощают только небольшие элементы и после этого сразу гибнут.

        Моноциты, поглощая микробы, очищают воспаленный участок, готовят место для восстановления (регенерации). Также эти клетки способны создавать своеобразную защиту возле крупных веществ, которые не удается уничтожить. Таким образом они защищают от вирусного поражения, бактерий, грибков и протозойных инфекций.

        Моноциты являются важными типами клеток врожденной иммунной системы. Научные данные свидетельствуют о том, что моноциты не только играют решающую роль в нашей врожденной иммунной системе, защищая организм от микробных патогенов, но также могут способствовать развитию заболеваний, таких как фиброз печени, атеросклероз, рассеянный склероз и метастазирование опухоли [1].

        Моноциты во время беременности

        Здоровая беременность связана с активацией и созреванием моноцитов. Моноциты оказывают влияние на другие клетки формируя иммунный ответ во время беременности. Плохая плацентация приводит к выработке большего количества различных факторов из пораженной плаценты. Это может вызывать дальнейшую активацию и созревание моноцитов, что приводит к генерализированному воспалительному ответу, характерному для преэклампсии и, следовательно, к гипертонии и протеинурии (белок в моче). Предполагается, что вызванная беременностью активация моноцитов необходима для компенсации изменений адаптивных иммунных ответов во время беременности [2].

        Моноциты у детей

        Система защиты организма состоит из врожденной и адаптивной (приобретенной) иммунных систем. Врожденная иммунная система является первой линией защиты от патогенов и состоит из физических барьеров (кожа, эпителий, слюна и т. д.), а также иммунологических барьеров в виде различных иммунных клеток (моноцитов, макрофагов, нейтрофилов и т. д.) [3]. Уровень моноцитов у детей обычно выше, чем у взрослых.

        Единицы измерения

        Относительное содержание моноцитов (MON%, MO%) определяется в процентах (%).

        Абсолютное содержание моноцитов в крови (MON#, MO#) может выражаться в единицах СИ (международная система единиц):

        • 10⁹ клеток/л
        • Г/л – Гигаклеток на литр (Гига означает 1 миллиард, то есть, 10⁹ клеток/л)
        • клеток/л

        Также моноциты могут выражаться в условных единицах:

        • 10³ клеток/мкл (1000/мкл),
        • 10³/мм³ (1000/мм³)
        • К/мкл (тысяч клеток на микролитр)
        • К/мм³ (тысяч клеток на кубический миллиметр)
        • клеток/мкл
        • клеток/мм³

        Коэффициент пересчета разных единиц:

        10⁹ клеток/л = Г/л = 10³ клеток/мкл = 10³/мм³ = К/мкл = К/мм³

        Норма моноцитов

        Нормальный уровень моноцитов в крови взрослого человека составляет от 2 до 8 % (относительный показатель). Абсолютное число составляет от 100 до 700 клеток/мм³ (0,1-0,7 х 10⁹ клеток/л) [4].

        Норма моноцитов во время беременности

        Количество моноцитов в крови во время беременности может быть немного увеличено, особенно в третьем триместре:

        • Первый триместр: 0.1-1,1 х 10⁹ /л
        • Второй триместр: 0.1-1,1 х 10⁹ /л
        • Третий триместр: 0.1-1,4 х 10⁹ /л

        Норма моноцитов у детей

        Количество моноцитов у новорожденных значительно выше по сравнению со взрослыми. Уровень моноцитов постепенно увеличивается в течение первых 2 недель жизни.

        Нормальным относительным показателем моноцитов у детей считается 3-8 %, абсолютные значения незначительно меняются в зависимости от возраста ребенка:

        Моноциты
        Возраст	Референтный интервал (109 клеток/л)
        При рождении	0-1.9
        2-4 недели	0.1-1.7
        2 месяца – 6 лет	0.2-1.2
        6-12 лет	0.2-1.0
        12-18 лет	0.2-0.8

        Моноциты выше нормы

        Состояние, при котором количество моноцитов в крови увеличивается называется моноцитоз. Чаще всего возникает до и после хронического воспаления или инфекции. Однако с моноцитозом могут быть связаны и другие состояния, такие как сердечные заболевания, депрессия, стресс, диабет и ожирение. Моноцитоз – не болезнь, а состояние клеток крови, поэтому сам по себе моноцитоз не вызывает симптомов. Однако симптомы могут наблюдаться из-за состояния/заболевания, вызвавшего изменение количества моноцитов.

        Относительное увеличение моноцитов в лейкоцитарной формуле называется относительным моноцитозом (MON%, MO%). При относительном моноцитозе увеличение происходит на фоне снижения других лейкоцитарных групп (нейтрофилов, лимфоцитов, эозинофилов, базофилов). При этом их суммарное количество может быть нормальным. Обычно такое можно наблюдать после недавних перенесенных болезней. Иногда увеличение может быть постоянным и являться индивидуальной особенностью человека.

        При развитии абсолютного моноцитоза (MON# (MO#) – абсолютного увеличения моноцитов – норма моноцитной фракции увеличивается на фоне увеличения других показателей. По абсолютным значениям судят об иммунитете на фоне текущего заболевания. Если сдвиг от нормы в сторону увеличения не очень заметный, то обычно не стоит переживать. Незначительный моноцитоз может наблюдаться при стрессе или быть наследственным фактором.

        Абсолютный моноцитоз обычно вызывается следующими состояниями [5]:

        • Бактериальные инфекции (туберкулез, подострый бактериальный эндокардит, бруцеллез).
        • Другие инфекции (сифилис, вирусные инфекции (например, инфекционный мононуклеоз), многие протозойные и риккетсиозные инфекции).
        • Злокачественные новообразования (хронический миеломоноцитарный лейкоз, моноцитарный лейкоз, болезнь Ходжкина, миелопролиферативные нарушения).
        • Фаза восстановления после нейтропении или острой инфекции.
        • Аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, язвенный колит, воспалительные заболевания кишечника).
        • Другие причины (саркоидоз и болезни накопления).

        Моноциты выше нормы у ребенка

        У детей уровень лейкоцитов (в том числе и моноциты) изначально немного выше, так как они находятся в стадии активного формирования иммунной системы. Это нормальная ситуация, не требующая лечения. На показатель моноцитов в детском возрасте влияют также временные воспалительные состояния, которые могут наблюдаться в организме. При абсолютном моноцитозе необходимо выяснить истинную причину повышения моноцитов.

        Моноциты ниже нормы

        Относительное уменьшение доли моноцитов называется относительной моноцитопенией, а абсолютное уменьшение их числа – абсолютной моноцитопенией.

        Моноцитопения сама по себе не вызывает симптомов. Возникающие симптомы связаны с сопутствующим заболеванием/состоянием.

        Низкое количество моноцитов в крови может быть вызвано чем-угодно, что уменьшает общее количество лейкоцитов, например, инфекцией кровотока, химиотерапией или нарушением работы костного мозга. У пациентов с ревматоидным артритом, системной красной волчанкой и СПИДом также сообщалось о снижении количества моноцитов в крови.

        С уменьшением общего количества моноцитов связан тяжелый аортальный стеноз [6].

        Моноцитопения является характерной особенностью волосатоклеточного лейкоза и считается диагностическим признаком этого заболевания.

        Моноциты: нормальный, высокий и низкий уровни

        Моноциты являются самыми крупными из всех лейкоцитов и играют важную роль в защите от микробов и воспалении. Читайте дальше, чтобы узнать о нормальном диапазоне этих клеток и о последствиях для здоровья аномальных уровней.

        Что такое моноциты?

        Передние линии вашего иммунитета

        Моноциты — это самый крупный тип лейкоцитов. Примерно от 2 до 10% лейкоцитов — моноциты [1].

        Эти иммунные клетки циркулируют в крови в течение нескольких дней, прежде чем попадут в ткани, где они станут макрофагами или дендритными клетками [1, 2].

        Моноциты защищают от вирусных, бактериальных, грибковых и протозойных инфекций. Они убивают микроорганизмы, заглатывают инородные частицы, удаляют мертвые клетки и усиливают иммунный ответ [3, 1, 4, 2].

        Однако они также могут быть вовлечены в развитие воспалительных заболеваний, таких как артрит и атеросклероз. В этом посте мы более подробно рассмотрим, как работают моноциты и как они могут быть вовлечены в заболевание [5, 6, 7].

        Моноциты могут убивать микробы, повышать иммунитет и удалять мертвые клетки.Попадая в ткани, они становятся макрофагами.

        Производство

        Все клетки крови происходят из общих родительских клеток, называемых гемопоэтическими стволовыми клетками. У взрослых клетки крови вырабатываются в основном в костном мозге; этот процесс называется кроветворением. В частности, процесс образования моноцитов называется миелопоэзом [8, 9].

        Миелопоэз подчиняется сложной регуляторной системе, включающей такие факторы, как:

        • Фактор транскрипции SPI1 [10, 11, 12, 13].
        • Цитокины: SCF (фактор стволовых клеток), GM-CSF (фактор, стимулирующий колонии гранулоцитов, макрофагов), M-CSF (фактор, стимулирующий колонии макрофагов, CSF1), IL-3, IL-6 и IFN-гамма. [14, 15, 16, 17].

        Стволовые клетки в костном мозге производят моноциты и другие клетки крови. Этот процесс контролируют различные факторы транскрипции и цитокины.

        Что произойдет после того, как моноциты выполнят свою работу?

        Моноциты живут в среднем три дня до апоптоза (запрограммированной гибели клеток).9 / л

      • 200 — 800 / мкл
      • 1 — 10%

      Количество моноцитов в этих пределах связано со снижением показателей:

      • Вирусные, бактериальные и грибковые инфекции [20]
      • Болезни сердца [21 ]
      • Ожирение [22]
      • Диабет [22]
      • Смерть (смертность) [23]

      Опять же, важно поговорить со своим врачом, если вы считаете, что что-то не так. Другие предлагаемые маркерные тесты, о которых вы, возможно, захотите спросить, находятся ли ваши моноциты вне оптимального диапазона, включают:

      Оптимальное количество моноцитов связано со снижением частоты инфекций и хронических заболеваний.Если у вас высокий или низкий уровень моноцитов, вы можете попросить своего врача проверить уровень других белых кровяных телец.

      Высокий уровень моноцитов (моноцитоз)

      Моноцитоз — это состояние, при котором количество моноцитов, циркулирующих в крови, увеличивается до более чем 0,8 × 109 / л у взрослых.

      Заболевания, связанные с моноцитозом

      • Заболевания крови (миелодиспластическое заболевание, острый моноцитарный, хронический миеломоноцитарный лейкоз, ходжкинская и неходжкинская лимфома) [24, 25, 26]
      • Инфекции (туберкулез, вирусные инфекции, бактериальный эндокардит, бактериальный эндокардит) малярия, сифилис) [27, 28, 29, 30, 31, 32]
      • Аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника) [33, 34, 35]
      • Саркоидоз [36]
      • Рак ( яичник, грудь, прямая кишка) [27, 37]
      • Сердечный приступ [27, 38]
      • Аппендицит [39]
      • ВИЧ-инфекция [27, 40]
      • Депрессия [41]
      • Роды [42, 43]
      • Ожирение [44]
      • Тяжелая пневмония [45]
      • Алкогольная болезнь печени [46]

      Приведенные здесь причины обычно связаны с этим симптомом.Проконсультируйтесь с врачом или другим специалистом в области здравоохранения, чтобы поставить точный диагноз.

      Симптомы и причины

      Моноцитоз чаще всего возникает во время и после хронического воспаления или инфекции [23].

      Однако с моноцитозом могут быть связаны и некоторые другие состояния, такие как болезни сердца, депрессия, диабет и ожирение [21, 22, 47].

      Состояниями, наиболее часто связанными с высоким уровнем моноцитов, являются:

      • Хроническое (длительное) воспаление [23]
      • Инфекции, такие как туберкулез, малярия и сифилис [48, 49, 50]

      Высокий уровень моноцитов уровни также могут быть связаны с:

      • Аутоиммунными заболеваниями, такими как волчанка, ревматоидный артрит и ВЗК [35, 33, 34]
      • Лейкемии, такие как хронический миеломоноцитарный лейкоз и ювенильный миеломоноцитарный лейкоз [51, 52]
      • Рак [53]
      • Депрессия [41]
      • Ожирение [54]

      Считается, что некоторые симптомы вызваны самим моноцитозом.Вместо этого, по мнению многих исследователей, симптомы возникают в результате заболеваний, связанных с моноцитозом [22]. Эти симптомы включают:

      • Лихорадка [55]
      • Боль [56]
      • Отек [55]

      Основными причинами высоких моноцитов (моноцитоза) являются хроническое воспаление и инфекции. Симптомы зависят от причины и могут включать жар, боль и отек.

      Низкий уровень моноцитов (моноцитопения)

      При моноцитопении количество моноцитов, циркулирующих в крови, снижается до менее 0.2 × 109 / л у взрослых. Сама по себе моноцитопения не вызывает симптомов, и у пациентов обычно проявляются только симптомы, связанные с сопутствующим состоянием. Такие симптомы могут включать усталость и жар [20, 57].

      Состояния, связанные с моноцитопенией

      • Апластическая анемия [58]
      • Лейкоз (волосисто-клеточный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз) [59]
      • Химиотерапия [60]
      • Синдром MonoMAC (моноцитопения и синдром микобактерий Avium 61) ]
      • Тяжелые ожоговые травмы [62]
      • Ревматоидный артрит [63]
      • Системная красная волчанка [64]
      • ВИЧ-инфекция [65]
      • Дефицит витамина B12 [66]
      • Кортикостероидная терапия (преходящая моноцитопения) [67]
      • Введение INF-альфа и TNF-альфа [68]
      • Лучевая терапия [69]

      Аутоиммунные заболевания, ВИЧ, ожоги и многие другие состояния и методы лечения связаны со снижением количества моноцитов; симптомы зависят от первопричины.9 / л) имеют тенденцию к развитию меньшего количества инфекций и хронических заболеваний. Наиболее частыми причинами высоких моноцитов (моноцитоза) являются хронические инфекции и воспаления. В свою очередь, высокие моноциты могут усугубить воспаление и закупорить кровеносные сосуды. Многие состояния здоровья также могут вызывать низкий уровень моноцитов (моноцитопению), включая аутоиммунные заболевания и дефицит питательных веществ. Низкий уровень моноцитов может снизить риск сердечных заболеваний, но повышает предрасположенность к инфекциям и заболеваниям крови.

      Дополнительная литература

      Проходили ли вы недавно анализ количества моноцитов? Хотите узнать, что означают ваши результаты? Ознакомьтесь с этими сообщениями:

      Определение, абсолютные диапазоны и причины

      1. Определение моноцитов
      2. Что такое абсолютное количество моноцитов и как оно измеряется?
      3. Каков нормальный диапазон для моноцитов?
      4. Что вызывает высокое количество моноцитов?
      5. Различия между моноцитами и макрофагами

      Определение моноцитов

      Моноциты

      Моноциты — один из крупнейших типов лейкоцитов.У каждого типа белых кровяных телец уникальная роль . Моноциты отвечают за нападение и разрушение микробов и бактерий , попадающих в организм.

      Моноциты — это фагоцитарные клетки . Это означает, что они уничтожают инфекции, «поедая» их. Они используют свою плазматическую мембрану, чтобы поглощать и разрушать мертвые клетки или вредные инородные частицы и бактерии.

      По достижении возраста нескольких часов моноцитов попадают с кровотоком в органы и ткани, такие как печень, легкие, селезенка и костный мозг.Попадая туда, они прилипают к ткани и превращаются в клетки другого типа: макрофаги.

      Эти клетки ведут себя так же, как моноциты, но остаются на органах или тканях. Они удаляют мертвые ткани, могут убивать раковые клетки и регулировать иммунитет организма против посторонних веществ.

      Некоторые моноциты не превращаются в макрофаги, а вместо этого становятся дендритными клетками. Они отвечают за работу с Т-лимфоцитами, часто называемыми Т-клетками. Дендритные клетки представляют Т-клеткам остатки разрушенных клеток, вирусов, бактерий и других чужеродных веществ.Эта информация помогает Т-клеткам сформировать план борьбы с захватчиком.

      Что такое абсолютный подсчет моноцитов и как его измерять?

      Абсолютное количество клеток крови является частью результатов анализа крови. Это когда количество ячеек выражается как абсолютное число, а не в процентах.

      Абсолютное количество моноцитов можно вычислить, умножив общее количество лейкоцитов в организме на процент белых кровяных телец, которые являются моноцитами.Например, если количество лейкоцитов составляет 8000, и 5% этих лейкоцитов являются моноцитами, то абсолютное количество моноцитов будет 400 (8000 x 0,05).

      Каков нормальный диапазон для моноцитов?

      Моноциты составляют от 1 до 10% циркулирующих белых кровяных телец, хотя для большинства людей эта цифра составляет от 2 до 8%. У мужчин обычно немного больше моноцитов, чем у женщин.

      Диапазон нормальных абсолютных моноцитов составляет от 1 до 10% лейкоцитов в организме.Если в организме 8000 лейкоцитов, то нормальный абсолютный диапазон моноцитов составляет от 80 до 800.

      Наличие абсолютного количества моноцитов , которое выше или ниже типичного, само по себе не опасно, но может указывать на то, что человека необходимо обследовать дополнительно. Абсолютное количество моноцитов может быть ценным способом оценки общего состояния иммунной системы организма.

      Что вызывает высокое количество моноцитов?

      Высокое количество моноцитов может указывать на другие заболевания.Инфекция, вызванная бактериями, вирусом или грибком, может вызвать повышение уровня моноцитов. Это потому, что организм создает больше моноцитов для борьбы с захватчиком. Абсолютный высокий уровень моноцитов также может быть реакцией на стресс, хронические инфекции или аутоиммунные нарушения.

      Иногда подсчет за пределами нормального диапазона абсолютных моноцитов может указывать на то, что существует проблема с тем, как организм производит новые клетки крови. Это может указывать на определенные типы состояний крови. В редких случаях высокое количество может быть связано со злокачественным новообразованием, например, лейкозом.

      Различия между моноцитами и макрофагами

      Макрофаги — это моноциты, которые завершили свою работу в кровотоке, переместились в другие органы или ткани тела и созрели.

      Эти два типа клеток схожи: и моноциты, и макрофаги отвечают за уничтожение вредных веществ. Ключевые отличия заключаются в том, что размер макрофагов примерно в два раза больше моноцитов. Макрофаги остаются неподвижными во внеклеточной жидкости, но моноциты перемещаются по кровотоку.

      Автоматический анализатор CBC Discover Sight

      Подсчет моноцитов — обзор

      2.4.2 Моноциты новорожденных

      Моноциты — это самые крупные лейкоциты в кровотоке. Они могут дифференцироваться на ДК и макрофаги. Высокое количество моноцитов указывает на хроническую инфекцию или воспаление. При рождении количество моноцитов у новорожденных значительно выше, чем у взрослых. В зависимости от срока беременности (от 22 недель до 42 недель) среднее значение количества моноцитов линейно увеличивалось, а референсный диапазон на 40 неделе составлял 300–3300 мкл ^–1 (Christensen et al., 2010). Количество моноцитов постепенно увеличивалось в течение первых 2 недель жизни. В крови человека имеется несколько популяций моноцитов, классифицированных в соответствии с их экспрессией антигенов, например: CD14 _⁺⁺ CD16 _^— классические моноциты, CD14 _⁺ CD16 _⁺ провоспалительные клетки. и моноциты, экспрессирующие лейкоцитарный антиген человека (HLA-DR). У недоношенных и доношенных новорожденных уровень моноцитов CD14 ++ CD16- и CD14 + CD16 + был значительно повышен, но у недоношенных была снижена экспрессия HLA-DR (Schefold et al., 2015). Уровень экспрессии CD16 (Fc gamma R III) в моноцитах пуповинной крови был снижен, а процент CD14-тусклых моноцитов, экспрессирующих HLA-DR, также был меньше среди моноцитов пуповинной крови (Murphy and Reen, 1996). Экспрессия Toll-подобного рецептора 4 (TLR4) (основной рецептор для передачи сигналов врожденного иммунитета) и экспрессия HLA-DR в неонатальных моноцитах показали увеличение в зависимости от гестационного возраста (Wisgrill et al., 2016). У инфицированных младенцев процент моноцитов HLA-DR + был ниже, чем у неинфицированных младенцев (Juskewitch et al., 2015). Экспрессия HLA-DR в неонатальных моноцитах варьирует в зависимости от аллерген-специфических иммунных ответов (Upham et al., 2004). В стимулированных LPS и IFN-γ неонатальных моноцитах доношенных и недоношенных детей экспрессия костимулирующих молекул CD80 увеличивалась, тогда как CD86 снижалась (Pérez et al., 2010). Неонатальные моноциты экспрессировали дефектную презентацию антигена MHC II, снижали поверхностную экспрессию MHC II и Т-клеточные ответы, но снижение экспрессии MHC II на неонатальных моноцитах не коррелировало с дефектной презентацией антигена (Canaday et al., 2006). Экспрессия бета-хемокинового рецептора CCR5 снижена в неонатальных моноцитах и ​​постепенно увеличивается во время дифференцировки моноцитов в макрофаги.

      Способность моноцитов к фагоцитозу у новорожденных не отличается от способности взрослых при рождении, хотя у недоношенных было меньше фагоцитов (Filias et al., 2011). Интересно, что экспрессия CD64 и фагоцитарная способность новорожденных с очень низкой массой тела при рождении были выше, чем у недоношенных или доношенных детей (Hallwirth et al., 2004).Предварительная обработка неонатальных моноцитов GM-CSF значительно увеличивала продукцию супероксид-аниона O2 в ответ на PMA, но M-CSF не мог усилить противогрибковую активность неонатальных моноцитов против Candida albicans (Gioulekas et al., 2001). Обработка неонатальных моноцитов полиненасыщенными жирными кислотами (ПНЖК) индуцировала активацию каспаз 3, 8 и 9 и усиление апоптоза моноцитов (Sweeney et al., 2007). ПНЖК оказывали дозозависимый эффект на выживаемость моноцитов пуповинной крови, а при более высоких концентрациях (> 100 мкМ) они вызывали глубокую гибель клеток (Sweeney et al., 2001). Это говорит о том, что питание матери, включая ПНЖК, может влиять на иммунный ответ у новорожденных. Удаление иммунных эффекторных клеток после устранения патогенов имеет решающее значение для предотвращения устойчивого воспаления и связанных с ним нарушений. Гибель клеток, индуцированная фагоцитами (PICD), объясняет это эффективное удаление иммунных эффекторов. При инфицировании E. coli в моноцитах пуповинной крови наблюдалось снижение PICD, которое характеризовалось пониженной экспрессией каспазы 8, каспазы 9 и CD95L после фагоцитоза (Gille et al., 2008). В моноцитах пуповинной крови новорожденных была обнаружена повышенная регуляция антиапоптотических белков Bcl-XL, что уменьшало PICD и поддерживало воспаление у новорожденных (Leiber et al., 2014).

      Воспалительный ответ, опосредованный TLR, по-разному регулируется разными патогенами. Дифференциальная экспрессия TLR2 и TLR4 наблюдалась в стимулированной пуповинной крови и периферической крови с различными патогенами (Sugitharini et al., 2014). После стимуляции TLR-лигандами, такими как LPS и бактериальные липопротеины, неонатальные моноциты вырабатывали более низкий уровень TNF-α по сравнению со взрослыми, но в ответ на TLR7 / 8-лиганд R-848 (резиквимод) высвобождение TNF-α было одинаковым из новорожденных и взрослых моноцитов (Levy и другие., 2004). Продукция IL-10 мононуклеарными лейкоцитами крови новорожденных человека была снижена после стимуляции LPS / TNF-α, и это может быть связано со снижением рецепторов TNF-α и продукции TNF-α неонатальными моноцитами (Chheda et al., 1996). Напротив, стимулированные LPS / IFN-γ клетки линии моноцитов от новорожденных жеребят продуцируют больше IL-10, чем взрослые особи, и не было значительной разницы в уровнях IL12p35 и IL12p40 (Sponseller et al., 2009). Экзогенный IL-10, добавленный к LPS-стимулированным моноцитам, ингибировал высвобождение провоспалительных цитокинов и активность связывания ДНК активаторного белка-1, одновременно увеличивая ядерное фосфорилирование STAT-3 (Chusid et al., 2010). Другое исследование показало, что мононуклеарные клетки пуповинной крови новорожденных продуцируют сопоставимые уровни IL-6, IL-1β, IL-10, IL-13, меньшего количества IL-23, MCP-1 и более высокого уровня IL-8, чем взрослые клетки (Sugitharini et al. ., 2014). Агонисты TLR8, имидазохинолины, индуцировали активацию транскриптома пути TLR и продукцию цитокинов TNF-α и IL-1β Th2-типа из неонатальных моноцитов и MoDC через резистентные к аденозину и зависимые от каспазы 1 пути (Philbin et al., 2012). Активация ERK1 / 2 и NF-κβ была нарушена в субпопуляциях неонатальных моноцитов после стимуляции агонистами TLR.Внутриклеточный TNF в неклассических моноцитах недоношенных новорожденных был подавлен, и это функциональное подавление неклассических моноцитов способствует повышенной восприимчивости к бактериальным инфекциям (Wisgrill et al., 2016). Фосфорилирование STAT-6 с помощью IL-4 было сопоставимым в моноцитах новорожденных и взрослых (Nupponen et al., 2013). В ответ на R-848 фосфорилирование киназы p38 MAP также было сходным между новорожденными и взрослыми моноцитами (Levy et al., 2004). В ответ на TNF-α или бактериальную стимуляцию фосфорилирование NF-κβ было выше у недоношенных новорожденных, чем у доношенных.Фосфорилирование p38 было выше у всех новорожденных, тогда как фосфорилирование STAT-1 с помощью IFN-γ или IL-6, STAT-3 с помощью IL-6 и STAT-5 с помощью GM-CSF было снижено у всех новорожденных по сравнению со взрослыми (Nupponen et al. ., 2013). Это показывает глубокую активацию воспалительных путей у недоношенных и доношенных новорожденных, что может способствовать неоправданному воспалению и повреждению тканей.

      Экспрессия генов, регулируемых регуляторным фактором-3 интерферона (IRF-3) или IFN типа I, в моноцитах пуповинной крови, стимулированных LPS или Listeria monocytogenes , была подавлена ​​по сравнению с взрослыми моноцитами (Lissner et al., 2015). Дефицит активности IRF-3 у новорожденных приводит к снижению экспрессии IFN-зависимых генов и ослабляет врожденный иммунный ответ против инфекций. Инфекция неонатальных моноцитов респираторным синцитиальным вирусом (RSV) стимулирует синтез IRF-1 и усиливает транскрипцию и трансляцию IL-1β, секретируя больше растворимого белка (Takeuchi et al., 1998). В ответ на различные типы вируса денге неонатальные моноциты производили меньшие уровни цитокинов TNF-α, IL-6 и IL-1β по сравнению со взрослыми (Valero et al., 2014). Параметры окислительного стресса, такие как NO, MDA и SOD, также были снижены в неонатальных моноцитах, что свидетельствует о снижении антиоксидантного ответа неонатальных моноцитов (Valero et al., 2013). Экспрессия рецептора CCR5 соответствовала повышенной восприимчивости неонатальных моноцитов / макрофагов к ВИЧ-инфекции (Zylla et al., 2003). Вакцинация БЦЖ улучшила жизнеспособность моноцитов и способствовала поглощению Mycobacterium tuberculosis , но не смогла повысить уничтожение проглоченного патогена (Sepulveda et al., 1997). Анализ экспрессии генов в первые 45 мин стимулирования LPS пуповинной крови и взрослых моноцитов показал дифференциальную экспрессию 168 генов, из которых 95% были сверхэкспрессированы у взрослых (Lawrence et al., 2007). Эта картина изменилась через два часа, поскольку несколько дифференциально экспрессируемых генов были более активными в моноцитах пуповинной крови, чем у взрослых. Это говорит о том, что экспрессия нескольких генов в неонатальных моноцитах задерживается, но быстро улучшается в течение короткого времени, достигая уровня взрослых (Lawrence et al., 2007).

      Моноциты CD14 + подавляют экспрессию гамма-глобина на ранних стадиях эритропоэза

      Эритробласты, полученные из CD34 +, экспрессируют значительно более высокие уровни HbF по сравнению с эритробластами, полученными из PBMC

      У большинства взрослых гемоглобин плода (HbF) составляет менее 1% от общее содержание гемоглобина в эритроцитах. Однако эритроциты людей с наследственной персистенцией фетального гемоглобина (HPFH), а также взрослые эритроидные клетки, культивируемые in vitro, могут экспрессировать HbF на уровнях выше 5%, как определено с помощью ВЭЖХ ⁶ .ВЭЖХ измеряет общий объем гемоглобина и не может различить повышенное количество клеток, экспрессирующих гамма-глобин, или повышенную экспрессию гамма во фракции клеток, которые уже экспрессируют HbF. С этой целью мы проанализировали экспрессию гемоглобина в ex vivo и культивируемых эритроидных клетках с помощью проточной цитометрии. При внутриклеточном окрашивании на бета-глобин и гамма-глобин, компоненты HbA и HbF соответственно, взрослые эритроциты показали в основном HbA, а часть клеток была положительной на HbF (рис.1А). Эритробласты из печени плода человека преимущественно демонстрировали экспрессию HbF, что указывает на то, что анализ специфичен для двух типов глобина (рис. 1B). В отличие от взрослых и эмбриональных эритроидных клеток ex vivo , культивированные взрослые эритроидные клетки показали две различные популяции; один экспрессирует HbA, а другой — HbF и HbA (фиг. 1C). Клеток, экспрессирующих только HbF, не обнаружено. Следует отметить, что эритроидные клетки, культивируемые из пуповинной крови, значительно обогащены клетками, экспрессирующими HbF / HbA, что отражает продолжающееся переключение глобина, происходящее на этой стадии развития (дополнительный рис.1А). Увеличение экспрессии HbF во взрослых культурах зависело от исходного источника эритроидных культур. Эритроидные культуры, инициированные из всех взрослых мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC), показали значительно более низкую экспрессию HbF и более высокую экспрессию HbA по сравнению с культурами, которые были начаты с очищенных клеток CD34 + из PBMC (рис. 1C, D). Увеличение HbF и связанное с этим снижение HbA предполагает активную регуляцию экспрессии глобиновой цепи. Измерения ВЭЖХ подтвердили, что культуры из PBMC содержат 1–3% HbF по сравнению с> 5% HbF в культурах, начатых из выбранных клеток CD34 + (дополнительный рис.1B. Клетки CD34 + представляют собой гетерогенную популяцию гематопоэтических предшественников на различных стадиях, которые при культивировании могут приводить к образованию двух разных популяций клеток, экспрессирующих HbA и HbA / HbF. Таким образом, мы проверили, могут ли две популяции (HbA или HbA / HbF) возникать из одной единственной клетки CD34 + или способность экспрессировать HbF сегрегирована на уровне предшественников. Сортированные по одной клетке взрослые CD34 + клетки дифференцировали в эритроидные клетки. В культурах единичных клеток по-прежнему обнаружены две популяции, одна из которых экспрессирует высокий HbF, а другая — низкий или нулевой HbF, что противоречит присутствию двух разных родительских гематопоэтических предшественников.Культуры из различных клонов показали от 56 до 63% клеток в популяции с высоким содержанием HbF (рис. 1E), что было значительно выше по сравнению с культурами CD34 +, полученными не из одной клетки. Присутствие двух популяций во всех клонах показывает, что эритроидные клетки, полученные из одной клетки CD34 +, могут экспрессировать разные профили экспрессии гемоглобина. Данные также показали, что в отобранных клетках HBG1 / 2 молчит. Следует отметить, что для получения достаточного количества клеток для проведения проточной цитометрии HbA и HbF отдельные клетки CD34 + культивировали в течение минимум 25 дней.

      Рисунок 1

      Экспрессия HbF и HbA зависит от исходного материала культуры эритробластов. Эритроциты периферической крови взрослого человека ( A ; n = 6) или печени плода человека ( B ; n = 4) были окрашены анти-HBB1 (ось y) и анти-HBG1 / 2 (ось x) . Показаны характерные точечные графики, а гистограммы указывают среднюю интенсивность флуоресценции всей популяции, экспрессирующей глобин. ( C ) эритробласты культивировали из PBMC или из клеток CD34 +, выделенных из PBMC.Экспрессию HBB1 и HBG1 / 2 измеряли, как указано в (A). Показаны характерные точечные графики. ( D ) Гистограммы показывают среднюю интенсивность флуоресценции всей популяции, экспрессирующей глобин (PBMC, n = 3 и CD34 + клетки, n = 4; * p <0,05 T-критерий Стьюдента). ( E ) Клетки CD34 + сортировали по отдельности и культивировали, как указано в материалах и методах. Точечные графики представляют антитела к HBB1 (ось y) и анти-HBG1 / 2 (ось x) четырех различных клональных популяций одноклеточных CD34 + эритробластов.

      Моноциты / макрофаги CD14 + из PBMC снижают экспрессию HbF в эритроидных культурах

      Дифференцировка эритроидов в костном мозге происходит на островках эритробластов, структурах предшественников эритроидов, окружающих центральный макрофаг ^8,9 . Сообщалось, что нарушения взаимодействия между макрофагами и эритроидными клетками приводят к дефектам эритропоэза ^14,19 . Культуры PBMC содержат значительные количества клеток, способных обеспечивать поддержку и / или взаимодействовать с CD34 +, эритроидными предшественниками и эритробластами.Фактически, 14% PBMC представляют собой моноциты CD14 +, которые могут дифференцироваться в эритропоэз, поддерживая макрофаги в нашей культуральной среде ^15,20 . CD14 + -производные макрофаги из PBMC взаимодействуют и поддерживают HSPC ^15,21,22 . Чтобы проверить, является ли подобное взаимодействие ответственным за репрессию HbF, PBMC были истощены по CD14 + клеткам. Дифференциация эритробластов от PBMC, истощенных по CD14 +, показала значительно повышенную частоту клеток, экспрессирующих HbA / HbF, и более высокую среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) HbF по сравнению с эритроидными культурами, полученными из полных PBMC (рис.2A – C). Повышенная экспрессия эмбрионального гемоглобина не была результатом общей более низкой гемоглобинизации (дополнительный рис. 2). Следует отметить, что культуры, которые получали субоптимальные уровни голо-трансферрина, действительно демонстрировали снижение гемоглобинизации (дополнительный рис. 2). Затем мы спросили, достаточно ли одного CD14 + для снижения HbF в культурах CD34 +. Фракцию CD34 + и фракцию CD14 + выделяли из лейкоцитов и культивировали совместно. Совместное культивирование клеток CD34 + с клетками CD14 + приводит к снижению экспрессии HbF по сравнению с одним только CD34 + (рис.2D и дополнительная фиг. 3A), что происходило в зависимости от дозы (фиг. 2E, дополнительная фиг. 3B). Чтобы проверить, требуется ли для снижения экспрессии HbF прямой контакт или это результат секретируемого фактора, CD34 + дифференцировали в эритроидные клетки в установке для совместного культивирования через лунки. Хотя совместное культивирование в прямом контакте с CD14 + положительными клетками снова снижает экспрессию HbF в эритроидных культурах, эритробласты, совместно культивируемые с CD14 + клетками в условиях трансвелл, не снижают экспрессию HbF (фиг. 2F, G).Это предполагает, что репрессия HbF в культуре требует межклеточной близости CD14 + и эритроидных клеток-предшественников.

      Рисунок 2

      Моноциты CD14 + способствуют подавлению экспрессии HbF в эритробластах. ( A ) PBMC и PBMC, истощенные по CD14 + клеткам, культивировали для получения гемоглобинизированных эритробластов, как указано в материалах и методах. Экспрессию HBB1 и HBG1 / 2 оценивали с помощью проточной цитометрии. Точечные диаграммы показывают репрезентативные эритробласты, культивируемые из PBMC (слева) или PBMC, истощенных по CD14 + клеткам (справа; анти-HBB1, ось y; анти-HBG1 / 2, ось x).( B ) Гистограмма показывает процент событий в Q1 (клетки HbA) и Q2 (клетки HbA / HbF) из ( A ) для эритробластов, полученных из PBMC (серые столбцы) или из PBMC, истощенных по CD14 + (черный; n = 3). ( C ) Средняя интенсивность флуоресценции HBG1 / 2 из данных, представленных в; N = 4; парный студенческий ТТЕСТ; *** = p <0,01 ( A ). ( D ) Клетки CD34 + и клетки CD14 + очищали от РВМС и культивировали совместно или не культивировали, как показано на графике. График отображает процентное содержание HbF в различных условиях культивирования, а линии указывают на парные образцы (N = 4 донора в двух экземплярах; парный T-тест, *** = p <0.01). ( E ) Клетки CD34 + и CD14 + очищали от PBMC и совместно культивировали с использованием определенных соотношений клеток CD14 + к клеткам CD34 +, как указано на оси x (CD14 +: CD34 +). Гистограммы представляют процент клеток, которые являются HBB1-положительными (черный, HbA) или HBB1 / HBG1 / 2 дважды положительными (серый, HbA / HbF), как определено с помощью проточной цитометрии (дополнительный рисунок 3; n = 3; TTEST студента p < 0,01). ( F , G ) Клетки CD34 + и CD14 + очищали из PBMC, как указано в материалах и методах.Клетки совместно культивировали с использованием соотношения CD14 + к CD34 + 100: 1 при полном контакте (серые столбцы), разделенных трансвеллерами (белые столбцы). Черные столбцы представляют CD34 +, культивируемые без CD14 + клеток в качестве контроля. Гистограммы в ( F ) представляют процент клеток, которые являются HBB1-положительными (HbA) или HBB1 / HBG1 / 2 дважды положительными (HbA / HbF), как определено с помощью проточной цитометрии (n = 3). Гистограмма в ( G ) отображает среднее геометрическое значение флуоресценции экспрессии HBG1 / 2 (HBF), измеренное с помощью проточной цитометрии (n = 3, *** p <0.01; Т-тест Стьюдента).

      Рисунок 3

      Профиль экспрессии РНК между отсортированными HbA и эритробластами, экспрессирующими HbA / HbF, очень похож. Эритробласты, культивированные от трех независимых доноров, окрашивали на HBB1 и HBG1 / 2, а эритробласты, экспрессирующие HBB1 и HBB1 / HBG1 / 2, отсортировывали с помощью FACS, после чего выделяли РНК и подвергали РНК-секвенированию, как указано в материалах и методах. ( A ) RT-qPCR с использованием праймеров для бета-глобина (HBB1) и гамма-глобина (HBG1 / 2) на мРНК, выделенной из HbA (синий) и HbA / HbF (красный) отсортированных популяций, несортированных (черный) и воды контроль (черные кружки), как указано.Изображено выражение относительного кратного изменения для контроля воды. ( B ) анализ основных компонентов, показывающий различия между отсортированными популяциями в трех первых компонентах. ( C ) Анализ экспрессии с помощью секвенирования РНК изображен как log2-кратное изменение (ось y) по сравнению со средним числом считываний на миллион считываний на ген (CPM, ось x). Дифференциально экспрессируемые гены, пересекающие порог p <0,01, показаны красным для положительной и синей для отрицательной (темные точки представляют неизмененные РНК).Синие линии указывают пороговое значение log2-кратного изменения (CPM), -1 <ген> 1, а красная линия указывает пороговое значение CPM (> 2). ( D ) Тепловая карта, изображающая z-баллы 25 дифференциально экспрессируемых РНК, сгруппированных (строки и столбцы) с использованием корреляции один минус Пирсона со средним сцеплением.

      Транскриптомы коэкспрессии HbA / HbF по сравнению с клетками, экспрессирующими только HbA, очень похожи

      Присутствие коэкспрессирующих клеток HbF / HbA и единичных экспрессирующих HbA клеток в культуре в сочетании с наблюдением, что баланс между этими популяциями может регулироваться посредством специфических взаимодействий с популяциями моноцитов / макрофагов, предполагает, что потенциальные регуляторы глобина могут по-разному регулироваться при сравнении этих двух популяций эритроидов.Чтобы найти такие потенциальные мишени, транскриптом популяций, коэкспрессирующих HbF / HbA, и экспрессирующих HbA популяций, культивируемых из взрослых PBMC, оценивали путем секвенирования РНК на стадии эритробласта (CD71 + / CD235 +; дополнительный рисунок 4A). ОТ-ПЦР на РНК, выделенной из этой популяции, показала экспрессию бета-глобина в клетках HbA или HbF / HbA, однако уровни бета-глобина были примерно в четыре раза ниже в клетках HbF / HbA (рис. 3A). Как и ожидалось, уровни гамма-глобина были нулевыми только в HbA и высокими в клетках HbF / HbF. Анализ основных компонентов соответствующих нормализованных данных транскриптома показал, что первые два компонента (45% вариации) разделяли образцы по донору, в то время как третий компонент (15% вариации) отделял отсортированную популяцию HbF / HbA от HbA. население (рис.3B. Интересно, что из более чем 16000 различных видов РНК, обнаруженных только удивительно небольшое количество из 25 генов (8 вверх и 17 вниз в HbF / HbA по сравнению с клетками, экспрессирующими HbA), по-разному экспрессировались с как минимум двукратной разницей между двумя отсортированными популяциями ( коэффициент ложного обнаружения (FDR) <0,01; кратное изменение: - 2 2; логарифм на миллион CPM> 2; Рис. 3B – D; Таблица 1). HBG1 и HBG2 были наиболее дифференцированно экспрессированы между двумя популяциями, что соответствовало результатам сортировки с помощью ВЭЖХ и проточной цитометрии на рис.1 (дополнительный рис. 4A). Среди 8 РНК, активированных в клетках HbF / HbA, 5 были расположены в локусе бета-глобина. Помимо HBG1 / 2 , это были эмбриональные эпсилон-глобиновые цепи ( HBE1 ) и некодирующие РНК BGLT3 и HBBP1 , обе некодирующие РНК были экспрессированы значительно выше. Кроме того, были активированы две митохондриальные РНК и один трансмембранный белок TMEM233 (таблица 1). Анализ GO показывает перенос / связывание кислорода (повышенная регуляция РНК) и связывание трансформирующего фактора роста (пониженная регуляция РНК) в виде терминов, обогащенных GO (данные не показаны).Среди генов, которые экспрессируются на более низких уровнях в клетках HbF / HbA по сравнению с клетками только HbA, находятся Endoglin ( ENG ), Thrombosondin ( THBS1 ), Pleckstrin ( PLEK ),

    5 PLEK ). ( PLXND1 ), Rap1-взаимодействующая адаптерная молекула ( RIAM / APBB1IP ) и AHNAK, , кодирующий большой внутриклеточный каркасный белок, который все может изменять ответ на факторы окружающей среды, например, передачу сигнала TGFβ трансформирующий фактор роста бета) членов семьи.Точно так же сниженная экспрессия сфингозин-1-фосфатного рецептора 4 ( S1PR4 ) может изменять реакцию на окружающую среду. Известно несколько регуляторов транскрипции, которые контролируют или влияют на экспрессию субъединиц глобина. Однако не было обнаружено, что известные регуляторы глобина, BCL11A, KLF1, ZBTB7A и SOX6 дифференциально экспрессируются (дополнительный рисунок 4C). Кроме того, мы не наблюдаем снижения количества генов-мишеней KLF1 (например, CD44, BCAM, CARM1, BCL11A; дополнительный рис.4С). Более того, среди дерегулированных РНК не было выявлено никаких других регуляторов транскрипции.
    Фиг. 4

    Ингибирование экспрессии HbF клетками CD14 + происходит на ранней стадии гемопоэза / эритропоэза. ( A ) Эритробласты (CD71 + / CD235low) культивировали с выделенными из PBMC клетками CD14 + и без них, как указано в материалах и методах. Гистограмма показывает среднюю интенсивность флуоресценции экспрессии гамма-глобина, измеренную с помощью проточной цитометрии. ( B ) Гематопоэтические предшественники сортировали на основе их экспрессии CD34 и экспрессии CD36.Короче говоря, CD34 + CD36- представляют собой гематопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники, CD34 + CD36 + клетки преданы мегакариоидной / эритроидной судьбе, но не миелоидной судьбы, а CD34-CD36 + клетки являются проэритробластами ¹⁵ . Клетки культивировали в присутствии (сплошные столбцы) или в отсутствие выделенных из РВМС клеток CD14 + (полосатые столбцы). Процент клеток HbA и HbA / HbF измеряли с помощью проточной цитометрии и указывали на оси ординат. Обратите внимание, что уменьшение популяций HbF / HbA клетками CD14 + пропорционально незрелости предшественников (N = 3).

    Таблица 1 Повышающая и понижающая регуляция генов в клетках, экспрессирующих HbF / HbA, по сравнению с клетками, экспрессирующими только HbA.

    Репрессия HbF клетками CD14 + происходит до стадии эритробластов

    Поскольку количество дифференциально экспрессируемых генов в популяциях, отсортированных по HbA / HbF и HbA, удивительно низкое и не может быть отнесено к уровням экспрессии РНК известных или новых регуляторов транскрипции, мы предположили, что посттранскрипционные механизмы контроля регулируют частоту клеток HbF / HbA и / или ( ii ) регуляция субъединицы глобина происходила до того, как была проанализирована стадия гемоглобинизированного эритробласта CD71 + / CD235 +, и что молекулярный механизм, управляющий этой дифференциальной экспрессией глобина, может уже быть подавлен в гемоглобинизированной стадии эритробласта.Альтернативное объяснение соответствовало бы высокому HbF в культурах из одиночных клеток CD34 + на рис. 1E, если бы это было результатом длительного размножения на самой ранней стадии предшественников. В самом деле, CD34 + гемопоэтические стволовые и предшественники (HSPC) представляют собой смесь гемопоэтических клеток на разных стадиях дифференцировки от гемопоэтических стволовых клеток до предшественников более коммитированных клонов ¹⁵ . Спецификация клонов прогрессирует от CD34 + CD36- гематопоэтических стволовых и клеток-предшественников к общим предшественникам CD34 + CD36 + мегакариоид / эритроид к эритробластам CD34-CD36 + ^15,23 .Совместные культуры с этими фракциями и клетками CD14 + оценивали для определения стадии, на которой происходит репрессия. Совместное культивирование эритробластов CD34-CD36 + с моноцитами CD14 + не снижает экспрессию HBG1 / 2. Это подтверждает результаты РНК-секвенирования, согласно которым регуляция HBG1 / 2 в эритроидных культурах с помощью CD14 + -клеток не происходит на стадии эритробластов с ограниченным клонированием (про) (рис. 4A). Напротив, клетки CD14 + были способны подавлять экспрессию HBG1 / 2 в предшественниках CD34 + CD36 — / +, причем наибольшая репрессия наблюдается в ранних совместных культурах CD34 + CD36− с клетками CD14 + (рис.4Б). Следует отметить, что подавление HbF приводит к сопутствующему увеличению HbA. Данные указывают на то, что регуляция глобиновых генов клетками CD14 + может происходить на ранних стадиях гематопоэза, до перехода к ограниченным эритроидом предшественникам.

    Границы | Роль моноцитов / макрофагов во время инфицирования ВИЧ / SIV у взрослых и детей с синдромом приобретенного иммунодефицита

    Введение

    Лекарство от ВИЧ-инфекции по-прежнему невозможно, несмотря на использование антиретровирусной терапии (АРТ).Исследования с использованием моделей вируса иммунодефицита обезьян (SIV), не относящихся к приматам (NHP), оказались неоценимыми для лучшего понимания патогенеза этой инфекции. Снижение количества CD4 + Т-клеток во время инфекций ВИЧ / SIV долгое время считалось основной причиной иммунодефицита, прогрессирования синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) и локализации резервуаров вируса во время АРТ. Хотя вполне вероятно, что различные другие иммунные клетки влияют на прогрессирование заболевания и вирусный посев, цель этого обзора — сосредоточить внимание на вкладе моноцитов и макрофагов в инфекцию ВИЧ / SIV.Хотя у взрослых макак уровни моноцитов в крови остаются постоянными во время инфекции, скорость оборота моноцитов увеличивается во время начала обезьяньего СПИДа (SAIDS) и отражает повреждение короткоживущих тканевых макрофагов. Интересно, что физиологическая скорость оборота моноцитов у новорожденных (<1 месяца) выше, чем у взрослых, и, по-видимому, связана с более быстрым прогрессированием заболевания, которое происходит при педиатрических инфекциях ВИЧ / SIV. По мере того, как младенцы становились старше (<1 года), они демонстрировали двухфазный паттерн оборота моноцитов и прогрессирования заболевания, при этом у некоторых животных болезнь развивалась быстро, как у новорожденных, в то время как другие развивались так же, как и взрослые макаки.Мы предполагаем, что количество инфицированных макрофагов влияет на исход заболевания, а восприимчивость макрофагов к инфекции зависит от возраста. Наши данные показывают, что более короткоживущие макрофаги легче разрушаются вирусом, в то время как более долгоживущие макрофаги кажутся более устойчивыми к разрушению и могут вносить вклад в вирусный резервуар. В этом обзоре обсуждается возможный вклад макрофагов в инфекцию ВИЧ / ВИП и патогенез. Важно учитывать, что для излечения также может потребоваться нацеливание на макрофаги.

    Макрофаги в здоровье и болезнях

    Иммунная система необходима для поддержания здоровья и борьбы с инфекционными заболеваниями (1). Врожденные иммунные ответы обычно действуют немедленно, вызывая воспаление, и осуществляются непосредственно иммунным надзором с помощью эффекторных клеток, таких как нейтрофилы, естественные клетки-киллеры (NK) и макрофаги. Клетки врожденного иммунитета работают в массовом порядке, чтобы обнаружить и устранить патогены, и считается, что это ограничивает начальную инфекцию и, таким образом, выигрывает время для роста адаптивных иммунных реакций.Для развития адаптивного иммунного ответа обычно требуются недели или месяцы, и они в значительной степени зависят от антигенпрезентирующих клеток (например, дендритных клеток, макрофагов, В-клеток) и Т-клеток для устранения инфекции и установления иммунологической памяти.

    Макрофаги — это разнообразная группа клеток, которые играют важную роль как в врожденных, так и в адаптивных иммунных ответах. Во время врожденного иммунного ответа макрофаги улавливают и стимулируют воспаление, а также привлекают эффекторные клетки для очистки от патогенов. В адаптивных иммунных ответах они участвуют в презентации антигена и секреции иммуномодуляторов для рекрутирования лимфоцитов (1).Кроме того, макрофаги необходимы для моделирования тканей во время развития плода, поддержания гомеостаза и заживления ран (2–4). И наоборот, дисфункциональные макрофаги и нерегулируемое воспаление разрушительны для гомеостаза и вместо этого могут способствовать патогенезу при определенных условиях заболевания, таких как повреждение легочной ткани во время астмы (5), разрушение островковых клеток при диабете (6) и неврологические повреждения, лимфома и сердечно-сосудистые заболевания. во время инфицирования вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) [см.(7)].

    Макрофаги происходят из множества источников во время развития, причем самые ранние поколения образуются из желточного мешка во время эмбриогенеза, а более поздние поколения — из печени и костного мозга плода. У взрослых людей и макак-резус восполнение тканевых макрофагов, утраченных в результате смерти из-за инфекции или травмы, происходит в основном за счет моноцитов, генерируемых кроветворными стволовыми клетками в костном мозге, которые затем циркулируют через кровоток, откладываются в тканях и дифференцируются в различные типы макрофагов (8–10).Макрофаги на мышиной модели, как было показано, самообновляются, а не замещаются эмигрирующими моноцитами с периферии (11-13). Основываясь на опубликованных отчетах на мышиных моделях, резидентные в ткани макрофаги могут происходить из двух источников: самообновляющаяся подгруппа, происходящая из печени плода во время эмбрионального развития и из костного мозга после рождения [см. (10, 14)]. Исследования еще не выявили самообновляющихся макрофагов у приматов, за исключением, возможно, мозга (15).Как показано на Рисунке 1, в тканях существуют по крайней мере два типа макрофагов; короткоживущие макрофаги, которые постоянно пополняются циркулирующими классическими моноцитами, происходящими из костного мозга и долгоживущих макрофагов. Эти два типа макрофагов, по-видимому, различаются по своим фенотипам и функциям, поэтому очень важно лучше понять их уникальную роль во время развития, иммунных ответов, патогенеза болезни и поддержания гомеостаза.

    Рисунок 1 .Резюме дифференцировки моноцитов и дендритных клеток (ДК) крови у макак-резусов. Миелоидные клетки-предшественники в костном мозге мигрируют в кровь и дают CD14 ⁺ CD16 ^— классические моноциты. Большая часть этих классических моноцитов быстро исчезает из кровотока, превращаясь в тканевые макрофаги. Фракция классических моноцитов дифференцируется в CD14 ⁺ CD16 ⁺ промежуточных моноцитов, а затем в CD14 ^— CD16 ⁺ неклассических моноцитов в кровотоке.Популяции mDC, pDC и, возможно, другие неидентифицированные DC, по-видимому, дифференцируются от различных предшественников DC непосредственно в костном мозге перед тем, как попасть в кровоток. Рисунок изменен из работы. (8). Авторские права 2015. Американская ассоциация иммунологов, Inc.

    Исторически подмножества макрофагов в основном классифицируются как провоспалительные (M1) или противовоспалительные (M2) на основе экспрессии различных маркеров, секретирования цитокинов, а также фагоцитарных и антигенпредставляющих функций.Результаты более поздних исследований показали, что поляризация фенотипов макрофагов более подвижна и менее дихотомична, чем первоначально предполагалось, основываясь на способности макрофагов изменять фенотипы в ответ на изменения окружающей среды в тканях и сосудистой сети (16). Как правило, резидентные в ткани макрофаги кажутся более похожими на M2 с функциями, поддерживающими противовоспалительную среду, такими как фагоцитозирование дебриса и содействие заживлению и росту. Эти резидентные в ткани макрофаги считаются более долгоживущими, как показано на примере легких с альвеолярными макрофагами (17).Макрофаги, набранные из циркулирующих моноцитов, напротив, в основном составляют интерстициальные макрофаги (IM) в легких и субпопуляции периваскулярных макрофагов в головном мозге и считаются более короткоживущими. Они были классифицированы как M1-подобные и M2-подобные в зависимости от иммунного гомеостаза, инфекционных событий и экспрессии маркеров дифференцировки MAC387 и CD163 соответственно (16). CD163, рецептор-поглотитель гемоглобина / гаптоглобина, связанный с противовоспалительными реакциями, экспрессируется на подмножествах тканевых макрофагов, а также на популяциях моноцитов, которые, как считается, происходят из моноцитов CD14 + CD16- (18).Растворимый CD163, выделяемый из популяций моноцитов, обладает противовоспалительными функциями, и исследования показали, что повышенные уровни связаны с инфекционными и аутоиммунными заболеваниями [см. (19)]. MAC387 распознает молекулу L1 или кальпротектина и используется для идентификации недавно инфильтрированных макрофагов, связанных с острым воспалением (20, 21). Во время инфекций, особенно в случае прогрессирования заболевания ВИЧ / SIV, происходит усиление оборота моноцитов в связи с накоплением этих различных короткоживущих подмножеств макрофагов в тканях.Такое отложение макрофагов, по-видимому, в первую очередь происходит в классических участках патологии СПИДа, включая ткани мозга, сердца, легких и кишечника (15, 22–24). Одно исследование предполагает, что во время острой инфекции M1-подобные макрофаги рекрутируются в ткани, чтобы помочь бороться с инфекцией, в то время как M2-подобные макрофаги накапливаются позже во время хронического заболевания, чтобы ослабить воспаление и восстановить ткани. Накопление обоих подгрупп макрофагов, по-видимому, способствует сердечно-сосудистым заболеваниям (16). Таким образом, характеристика подмножеств моноцитов и макрофагов в зависимости от их количества, фенотипа и функции становится все более важной для прогнозирования исходов заболевания и последующих попыток улучшить или обратить вспять патогенез.

    ВИЧ-инфекция

    Вирус иммунодефицита человека является этиологическим агентом СПИДа и с начала этой пандемии в начале 1980-х годов унес жизни более 40 миллионов человек (25). ВИЧ-инфекция у людей протекает по определенной схеме (26), начиная с фазы затмения в течение первых 1-2 недель инфекции, что представляет собой время, когда вирус реплицируется и распространяется, пока развивается иммунный ответ и еще не эффективен для удаления вируса. . ВИЧ предпочтительно нацелен на Т-клетки для заражения, используя рецептор CD4 в сочетании с хемокиновым рецептором CCR5 для проникновения.Эффекторные CD4 + Т-клетки экспрессируют наивысший уровень CCR5 и резко истощаются сразу после инфицирования (27) в так называемой острой фазе. Эта конкретная фаза следует через 2–4 недели после инфицирования (pi) и проявляется в высокой нагрузке вирусной РНК в плазме и снижении периферических CD4 + Т-клеток. Во время острой фазы наблюдается резкое усиление обнаруживаемых иммунных ответов, в первую очередь с более высокими уровнями вирус-специфических эффекторных CD8 + Т-клеток и антител. Окончание острой фазы и переход к хронической стадии инфекции характеризуется заметным снижением вирусной нагрузки в плазме (ВН) и установлением вирусной «контрольной точки», которая, по-видимому, является результатом неполного контроля репликации вируса с помощью адаптивных иммунных ответов. с одновременной потерей целевых CD4 + Т-клеток, доступных для новой инфекции.Хроническая фаза ВИЧ-инфекции сопровождается латентным клиническим периодом, который у нелеченных лиц может длиться от 1 до 20 лет. В конечном итоге количество CD4 + Т-клеток в крови снижается до уровня ниже 200 клеток / мкл, и инфицированные люди становятся восприимчивыми к условно-патогенным инфекциям, таким как Pneumocystis jiroveci (ранее называлось P. carinii ), цитомегаловирус, Cryptosporidium spp. И Mycobacterium tucobacterium. , и рака, такого как саркома Капоши [см.(28, 29)]. Эти поздние стадии инфекций и рака, связанные с потерей CD4 + Т-клеток, определяют начало СПИДа, которое в конечном итоге приводит к смерти (30). С развитием и применением комбинированной АРТ (КАРТ) выживаемость ВИЧ-инфицированных взрослых была увеличена за счет подавления вируса до неопределяемого уровня и восстановления количества CD4 + Т-клеток до нормального уровня, что предотвратило возникновение СПИДа (31). Вместо этого у более длительно живущих ВИЧ-инфицированных, которым вводили КАРТ, могут возникнуть хронические заболевания, связанные с воспалением, которые называются ВИЧ-ассоциированными не связанными со СПИДом (HANA) состояниями (32).

    Несмотря на большой успех лечения АРТ в отношении продолжительности жизни и клинических симптомов, оно не устраняет полностью вирус, который сохраняется в резервуарах. В общих чертах резервуар вируса определяется как инфицированная вирусом клетка, которая сохраняется, несмотря на лечение. Резервуар можно охарактеризовать как активный или скрытый. Активные резервуары продолжают продуцировать вирус, такой как ВИЧ или SIV, и в этом случае вирус активно продуцирует вироны, используя клеточный аппарат для транскрипции и трансляции. Это может быть результатом того, что инфицированная клетка не поддается лечению АРТ, потому что лекарства могут не проникать через клеточную мембрану, или внутриклеточные лекарства могут быть неэффективными при ингибировании ферментов обратной транскриптазы или интегразы.В таких случаях вирусная РНК или белок должны быть обнаружены, если экспрессия превышает пороговые значения используемого анализа. Альтернативно, латентные резервуары вируса развиваются после встраивания вирусной ДНК в геном клетки-хозяина. Здесь вирус активно не транскрибируется и фактически остается бездействующим. В этом случае вирусная ДНК должна быть обнаружена с помощью чувствительных анализов. Клеточная активация и некоторые химические соединения (агенты, обращающие латентный период) могут стимулировать активную транскрипцию и трансляцию спящего вируса, при этом будут продуцироваться вирусные РНК и белок.Считается, что покоящиеся CD4 + Т-клетки служат латентными резервуарами ВИЧ и SIV во время лечения АРТ, и некоторые агенты, обращающие латентный период, успешно активируют эти резервуары в попытке устранить инфекцию при продолжении длительного лечения АРТ. Это увлекательная и растущая область исследований, которую мы не будем здесь рассматривать, но подробно описывается в других обзорах (33, 34).

    Интересно, что у человека и макак макрофаги и дендритные клетки (DC) также способны экспрессировать рецепторы CD4 и CCR5, необходимые для инфекции ВИЧ / SIV (35–39), и более ранние работы показывают, что макрофаги могут быть нацелены на ВИЧ (40, 41) и SIV in vivo (42).Первоначально вирусный тропизм к рецептору CCR5 Т-клеток и макрофагов был использован для определения конкретных штаммов этих лентивирусов (43). В целом было признано, что, хотя макрофаги способны инфицироваться ВИЧ, они уступают место инфицированию CD4 + Т-клеток и, возможно, становятся мишенью только после значительной потери CD4 + Т-клеток в организме хозяина (44). Это вызвало некоторые постоянные споры относительно инфицирования макрофагами ВИЧ / SIV. Исследования in vitro показали, что макрофаги могут быть инфицированы продуктивно (45–47), и несколько штаммов вируса считались макрофаготропными, но in vivo , эти же штаммы преимущественно инфицировали CD4 + Т-клетки. Данные in vivo показали, что альвеолярные макрофаги, собранные из бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) у пациентов, получавших АРТ, были положительными на ДНК ВИЧ, что указывает на то, что они, вероятно, являются важным резервуаром макрофагов (48). Противоречивые сообщения показали, что, хотя ДНК ВИЧ может быть обнаружена в альвеолярных макрофагах человека, получавших АРТ, последующие анализы роста не смогли выявить какой-либо репликационно-способный вирус, приписывая положительные результаты ДНК поглощению макрофагами инфицированных CD4 + Т-клеток (42).Работа, выполненная с быстро прогрессирующими взрослыми макаками (прогрессирование SAIDS происходит за месяцы по сравнению с годами), сообщила об обнаруживаемой РНК SIV в макрофагах легких и лимфатических узлов (LN) (49). Например, Авалос и его коллеги недавно обнаружили, что у макак, получавших АРТ с подавленным вирусом, макрофаги, выделенные из мозга, содержали репликационно-способный вирус. Эти макрофаги были обозначены как латентно инфицированные, учитывая, что вирусная ДНК могла быть обнаружена, в то время как in situ, гибридизация и количественная ПЦР ткани мозга не показали обнаруживаемой вирусной РНК.Эти инфицированные макрофаги были обнаружены после 2 лет лечения АРТ, что подтверждает мнение о том, что они представляют собой долгоживущий резервуар макрофагов (50). В качестве альтернативы, Динаполи и другие обнаружили ДНК SIV и репликационно-способный вирус в лимфоидных макрофагах, выделенных из не получавших АРТ макак, но они не смогли обнаружить вирусный рост из аналогичных популяций макрофагов у животных, получавших АРТ. Они предположили, что инфицированные макрофаги были недолговечными и исчезли после более длительных периодов лечения (42).В модели гуманизированных мышей результаты показали продуктивную инфекцию макрофагов, а также вирусный отскок после успешного лечения АРТ у мышей, содержащих только миелоид (MoM), у которых отсутствовали Т-клетки человека (51). Вирусный отскок в исследовании MoM подтверждает инфицирование популяций долгоживущих тканевых макрофагов, поскольку у короткоживущих макрофагов период полураспада составляет 1 день, а вирусный отскок происходит через 7 недель после отмены АРТ (52). Дополнительные исследования на макаках также сообщили об инфицировании долгоживущих тканевых макрофагов, и вместе эти результаты подтверждают теорию о том, что макрофаги могут вносить вклад в вирусный резервуар (53, 54).

    Все большее внимание уделяется характеристике фенотипов и функций макрофагов во время активных инфекций ВИЧ / SIV, чтобы лучше понять их роль в иммунных ответах и ​​патогенезе тканей. Например, Бурдо и его коллеги обнаружили, что увеличение макрофагов MAC387 + в центральной нервной системе (ЦНС) было связано с большим повреждением ганглиев задних корешков, что связано с неврологическими осложнениями при ВИЧ-инфекции (55). Они также обнаружили, что в то время как макрофаги MAC387 + находились в пределах поражений головного мозга во время острого энцефалита SIV (SIVE), более высокое количество макрофагов CD163 + было связано с тяжелыми поражениями энцефалита SIV во время хронической инфекции.Кроме того, у ВИЧ-инфицированных пациентов с обнаруживаемой вирусной нагрузкой, несмотря на лечение АРТ, было обнаружено увеличение количества моноцитов CD163 + CD16 +. Количество этих клеток обратно коррелировало с количеством CD4 + Т-клеток среди пациентов с <450 Т-лимфоцитов CD4 / мкл, что позволяет предположить, что моноциты CD163 + CD16 + вносят вклад в репликацию вируса (18). В другом исследовании сообщалось об увеличении экспрессии CD163 на моноцитах у ВИЧ-инфицированных пациентов, получавших АРТ, что обратно коррелировало с числом Т-лимфоцитов CD4, однако это не коррелировало с вирусной нагрузкой (ВН), и использование ингибиторов протеазы во время лечения приводило к снижению выделения. CD163 на популяции моноцитов (56).Кроме того, повышенный оборот моноцитов на периферии был связан с повышенным переносом макрофагов CD16 + в ткань кишечника прогрессирующих макак-резусов с хронической SIV-инфекцией (24). Эти макрофаги кишечника были функционально искажены из-за противовоспалительных реакций и демонстрировали нарушенную фагоцитарную способность, что, в свою очередь, было связано с повышенным заболеванием кишечника. В исследованиях ex vivo моноциты, экспрессирующие CD16, были преимущественно инфицированы ВИЧ, а не CD16-отрицательными популяциями, и ДНК ВИЧ была обнаружена в этой клеточной подгруппе, взятой у пациентов, получавших АРТ, что также предполагает, что эти моноциты могут служить резервуаром вируса (57 ).

    Важно отметить, что в отличие от Т-клеток, макрофаги и ДК описываются как более устойчивые к цитопатическим эффектам вирусной инфекции (47, 58, 59) и не выводятся антиген-специфическими цитотоксическими CD8 + Т-клетками (60). Таким образом, теоретически инфицирование долгоживущих макрофагов позволило бы вирусу быстро уклониться от иммунитета CD8 + Т-клеток и реплицироваться, чтобы произвести мутации «ускользания», которые затем предпочтительно инфицировали бы Т-клетки CD4 +. По мере истощения CD4 + Т-клеток ответы В-клеток на продукцию антител могут стать менее эффективными.Эти события затем будут способствовать повсеместной активации и инфицированию макрофагов, которые выживают, и обеспечивают непрерывную репликацию и высвобождение вируса в течение длительных периодов времени. Макрофаги явно способны способствовать прогрессированию заболевания, неэффективности лечения и восстановлению вируса. Таким образом, наши исследования в настоящее время посвящены истощению макрофагов на различных стадиях инфекции SIV, чтобы получить более четкое представление об их роли в заболевании, с сопутствующим истощением Т-клеток и без него.

    Несмотря на недавние достижения в области антиретровирусной терапии для лечения ВИЧ, вопрос о резервуаре ВИЧ-инфицированных макрофагов приобрел большое значение, поскольку усилия направлены на разработку лекарства.Было показано, что нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы и / или ингибиторы протеаз были менее эффективны в отношении инфицированных макрофагов, но более эффективны против инфицированных вирусом Т-лимфоцитов у макак-резусов, инфицированных вирусом SIV (61, 62). Кроме того, макрофаги могут быть продуктивно инфицированы с помощью механизмов, отличных от CD4 + Т-клеток, таких как фагоцитоз инфицированных клеток (63) или прямое распространение инфекции между макрофагами, происходящими из моноцитов, с использованием нанотрубок (64). Макрофаги также могут содержать внеклеточный вирус и распространять инфекцию на лимфоциты в транс-, используя рецепторы лектина (например,g., CD169) (65). Кроме того, было обнаружено, что средний период полужизни ДНК ВИЧ больше в популяциях моноцитов по сравнению с CD4 + Т-клетками (66). Вместе эти результаты подчеркивают необходимость характеристики макрофагов в связи с патогенезом заболевания и разработки эффективных методов лечения для устранения этой популяции как вирусного резервуара.

    Модель макаки-резуса для ВИЧ

    Приматы, не являющиеся человеком, экспериментально инфицированные ВИО, в первую очередь индийские и китайские макаки-резус, использовались для изучения патогенеза, иммунологии и терапевтических вмешательств.Они демонстрируют такое же течение инфекции и модель прогрессирования заболевания, как и у людей, инфицированных ВИЧ, но с большей скоростью. Макаки-резус, инокулированные SIV, обычно демонстрируют высокую начальную вирусную нагрузку, значительное истощение CCR5 + CD4 + T-клеток в кишечнике и быстрое высевание вируса в ткани с последующим установлением вирусной точки и постепенной потерей CD4 + T-клеток в тканях. периферия. Через несколько лет у макак, инфицированных вирусом иммунодефицита человека, развивается SAIDS, и они умирают от оппортунистических инфекций и истощения (67, 68).

    По сравнению с ВИЧ у людей, ВИО у макак-резусов использует те же клеточные мишени и анатомические участки, демонстрирует аналогичную стойкость, латентность и вирусную нагрузку и одинаково реагирует, хотя и в меньшей степени, на схему АРТ, используемую для пациентов-людей (69 ). Модель макак, инфицированных вирусом иммунодефицита человека, позволила провести более подробные исследования терапии CART, вирусного посева резервуарных клеток, эффектов истощения иммунных клеток, введения или генерации нейтрализующих антител, вирусного отскока, вакцинной терапии и агентов, обращающих латентный период [см.(69)], многие из которых не могли быть исследованы в той же степени на людях. Наиболее важно то, что исследования на животных помогли разработать эффективные лекарственные препараты, способствовавшие созданию неопределяемой вирусной нагрузки и продолжительному поддержанию нормального уровня CD4 + Т-клеток, чтобы тем самым продлить бессимптомную продолжительность жизни ВИЧ-инфицированным людям. Однако даже при строгом соблюдении АРТ-терапии медикаментозное лечение не устраняет полностью латентный вирус или продукцию вируса долгоживущими клетками-хозяевами, а прерывание лечения постоянно приводит к отскоку вируса ВИЧ из клеточного резервуара [см.(70)]. Исследования вирусного посева на макаках показали, что даже после начала АРТ за 3 дня после начала лечения, до обнаруживаемых ВН или антигенспецифических иммунных ответов, вирусный отскок происходил после прекращения лечения. Хотя этот наблюдаемый вирусный отскок был отсрочен, заданные значения после отскока были аналогичны тем, которые наблюдались у животных, начавших АРТ через 2 недели пи (71). Примечательно, что исследования, проведенные в NHP, показали, что посев вирусного резервуара может быть выполнен в течение 24 часов после заражения, а АРТ, начатая через 4 часа после начала инфицирования, хотя и способствует снижению вирусной нагрузки, диссеминации и посеву резервуара, все еще не излечивает (72 , 73).Взятые вместе, эти исследования подчеркивают сложность и необходимость определения вирусного резервуара и устранения долгоживущих или размножающихся резервуаров для достижения излечения. Много работ было посвящено исследованию роли популяций CD4 + Т-клеток памяти как резервуара, но другие клетки-хозяева, особенно долгоживущие макрофаги, также требуют внимания из-за их невосприимчивости к АРТ и их способности в течение многих лет укрывать вирус.

    Инфекция SIV и прогрессирование заболевания у взрослых макак резус

    Типичное течение инфекции SIV у макак-резусов зависит от возраста хозяина, как показано на Рисунке 2.Рано после заражения взрослые макаки производят высокую начальную вирусную нагрузку на уровне ~ 10 ⁸ копий РНК на мл, за которым следует контрольная точка на уровне ~ 10 ⁵ копий вируса на мл, что соответствует потере числа CD4 + Т-клеток в крови. , все из которых напоминают кинетику ВИЧ-инфекции у взрослых людей (74, 75). Прогрессирование заболевания и начало СПИДа / SAIDS обычно описывают с использованием таких параметров, как количество CD4 + Т-клеток <200 / мкл со значительным увеличением вирусной нагрузки и проявлением оппортунистических инфекций, потерей веса, анемии, пневмонии, усталости, диареи, атрофии тимуса, лимфоидная атрофия, гиперплазия костного мозга, энцефалит и колит.Общие сообщаемые оппортунистические инфекции с SAIDS включают цитомегаловирус, аденовирус, Cryptosporidium, Pneumocystis, Mycobacterium, Shigella и Campylobacter (76, 77).

    Рисунок 2 . Наблюдаемые закономерности оборота моноцитов, количества лимфоцитов CD4 и инфицирования вирусом обезьяньего иммунодефицита (SIV) различаются в зависимости от возраста на момент инфицирования. Результаты Курода и его коллег, показывающие оборот моноцитов, определяемый количественной оценкой включения бромдезоксиуридина (BrdU) с помощью проточной цитометрии в моноциты через 24 часа после внутривенной инъекции BrdU, количество CD4 Т-лимфоцитов, полученное с помощью иммунофенотипирования клеток периферической крови с помощью проточной цитометрии в сочетании с полной анализ крови (CBC) и виремия плазмы с РНК SIV, как определено с помощью количественной ПЦР.Выявлены отчетливые закономерности клинического прогрессирования ВИО у макак-резус, проиллюстрированных у (A) взрослых, (B) новорожденных и (C) как того, что мы называем «промежуточным» фенотипом у младенцев старшего возраста, инфицированных в ~ 3–4-месячного возраста.

    Одним из многих фокусов исследований ВИЧ / ВИО было определение физиологических «горячих точек» и надежных прогностических маркеров, определяющих начало СПИДа. Истощение CD4 + Т-клеток было описано как основная причина терминального прогрессирования СПИДа.Интересно, однако, что количество CD4 + Т-клеток может истощаться или оставаться на стабильно низком уровне в течение многих лет до того, как у макак-резусов произойдет начало SAIDS (78–80). Кроме того, истощение или обмен CD4 + Т-клеток оказались не лучшим прогностическим значением для начала терминального прогрессирования заболевания (80, 81). Недавняя рабочая теория состоит в том, что истощение CD4 + Т-клеток происходит в три стадии во время хронических стадий инфекции до начала СПИДа, так что исходные эффекторные Т-клетки памяти (ЭМ) с высокой экспрессией CCR5 истощаются.За этим следует иммунное восстановление этой популяции CCR5-негативными клетками центральной памяти (CM), что в конечном итоге приводит к прогрессирующей потере пулов эффекторных и CM Т-клеток с течением времени с повторяющимися циклами восстановления и истощения (27). Считается, что потеря CM T-клеток приводит к нарушению регуляции иммунной сети в целом и иммунодефициту, что приводит к оппортунистическим инфекциям, которые определяют начало СПИДа (27).

    В ходе исследований по дальнейшему определению биомаркеров начала SAIDS мы сообщили, что увеличение оборота моноцитов с соответствующим разрушением тканевых макрофагов было значительно лучшим предиктором, чем снижение количества CD4 + Т-клеток или увеличение вирусной нагрузки в плазме (81), как показано на рисунке 2A. .Это свидетельствует о том, что у нелеченных взрослых макак-резусов макрофаги играют важную роль в патогенезе и персистенции ВИЧ / SIV. Дополнительные исследования показывают, что они делают это тканеспецифичным образом, как будет подробнее описано в следующем разделе.

    Роль макрофагов у взрослых SAIDS

    Увеличение субпопуляций периферических моноцитов CD16 + было связано с воспалительными заболеваниями, такими как сердечные заболевания (82), поражения сосудистой сети почек при системной красной волчанке (83), ревматоидный артрит (84) и патология кишечника (85).Подмножество макрофагов CD14 + связано с большим воспалительным повреждением тканей кишечника, вызванным болезнью Крона (86, 87). Чтобы также охарактеризовать взаимосвязь между макрофагами и патогенезом ВИО, мы измерили скорость оборота моноцитов во время стационарного гомеостаза у неинфицированных макак по сравнению с инфицированными ВИО макаками-резус. За оборотом моноцитов следили путем измерения поглощения аналога тимидина, бромдезоксиуридина (BrdU) делящимися клетками, с последующим окрашиванием иммунофлуоресцентными антителами и проточной цитометрией.Гомеостатический базовый обмен моноцитов в крови неинфицированных взрослых макак-резус составлял ~ 5% в нескольких исследовательских группах, в то время как обмен моноцитов увеличивался до 50% до начала терминальной SAIDS (81). Это согласуется с данными исследования, в котором повышенный оборот популяций моноцитов в крови был предиктором более тяжелого прогрессирования заболевания, в частности, развития SIVE (88). Это также было связано с увеличением популяций макрофагов, откладываемых в ткани мозга, что приводило к локальной патологии.Наше исследование показало, что увеличение кинетики оборота моноцитов было связано с потерей тканевых макрофагов из-за инфекции SIV в LN, и что это не сопровождалось изменением абсолютного количества моноцитов в периферической крови (23, 54, 81). Интересно, что изменение оборота моноцитов также не было связано с количеством CD4 + Т-клеток или активацией лимфоцитов, аналогично результатам, полученным Burdo et al. (88), предполагая независимый механизм патогенеза заболевания, связанный конкретно с инфекцией моноцитов / макрофагов (81).Дальнейшие исследования показали, что увеличение трафика моноцитов из костного мозга во время инфекции SIV действительно происходило с последовательным привлечением в ЛУ, ЦНС и легкие (23, 54, 88). Фактически, повышенная скорость оборота моноцитов и их рекрутирования в тканевые макрофаги были связаны со скоростью прогрессирования SAIDS, тяжестью патологии легочной ткани и энцефалитом SIV.

    Легкое, а за ним и мозг, по-видимому, относятся к числу органов, наиболее пострадавших от ВИЧ в эпоху после АРТ (89, 90), при этом считается, что макрофаги играют важную роль в хронической иммунной активации, необходимой для связанных с поражениями легких и головного мозга. с хронической инфекцией ВИЧ / ВИП.Накопление макрофагов CD163 + также наблюдалось в сердцах макак-резусов, инфицированных SIV, что положительно связано с сердечными заболеваниями (22). Учитывая, что респираторные инфекции, такие как пневмония Pneumocystis, и туберкулез, являются одними из наиболее распространенных СПИД-определяющих заболеваний и включают прямые бактериальные инфекции макрофагов, мы сосредоточились на характеристике макрофагов легких. По крайней мере, две разные популяции макрофагов были идентифицированы в легочной ткани макак-резус; а именно IM (23) и макрофаги, расположенные в альвеолярных пространствах (AM) (91).Макрофаги БАЛ не полностью представляли опосредованные макрофагами врожденные иммунные реакции легких, поэтому мы исследовали макрофаги в цельных легочных тканях и наблюдали, что IM и альвеолярные макрофаги (AM) демонстрируют различную кинетику и фенотип оборота в ткани легких взрослого макака-резус. ИМ были меньше по размеру, располагались исключительно в интерстиции и фенотипически напоминали моноциты крови. In vivo включение BrdU делящимися клетками продемонстрировало более высокую скорость обмена для моноцитов крови и IM легких по сравнению с AM в стабильном состоянии (91).Относительно более высокий уровень окрашивания TUNEL IM также свидетельствует о непрерывном переходе моноцитов крови, замещающих апоптотический IM, с целью поддержания гомеостаза в легких. Эти данные заставили нас поверить, что IM представляют собой недолговечную популяцию макрофагов в легких. С другой стороны, AM были больше, экспрессировали CD206 (не экспрессировались на IM) и располагались в альвеолярных пространствах. Оборот AM был незначительным во время устойчивого состояния, что указывает на то, что это долгоживущие клетки. Кроме того, метка in vivo BrdU предполагает, что IM может дифференцироваться в AM при истощении AM (91).Эти данные свидетельствуют о том, что AM и IM обладают разными функциями.

    Исследования БАЛ, собранных у ВИЧ-инфицированных пациентов, дали некоторые противоречивые данные и позволили задать несколько интересных вопросов о том, являются ли AMS продуктивными инфицированными и вносят ли вклад в резервуар вируса. Результаты нескольких исследований обнаружили вирусную ДНК и РНК в AM (92–95), а некоторые работы даже определили конкретную подгруппу ВИЧ-специфических CD8 + T-клеток, функция которых, как считается, направлена ​​на ВИЧ-инфицированные альвеолярные макрофаги (92, 96).Однако остается устойчивый аргумент, что эти результаты отражают поглощение инфицированных CD4 + Т-клеток макрофагами, а не истинную инфекцию и репликацию внутри макрофагов. В одном исследовании вирусная ДНК была обнаружена в AMS, собранном у пациента после 3 лет лечения АРТ, но уровни перестроенной ДНК TCR подтверждали их интерпретацию, согласно которой вирусная ДНК присутствовала из-за фагоцитоза инфицированных CD4 T-клеток, а не из-за инфекции макрофагов (42 ). Таким образом, мы исследовали влияние инфекции SIV на популяции макрофагов легких у макак, не получавших АРТ.Были применены методы конфокальной визуализации, и были идентифицированы легочные макрофаги, содержащие РНК SIV. Рисунок 3A. Это убедительно подтверждает перспективу того, что репликация вируса может происходить в тканевых макрофагах. Кроме того, данные показали, что увеличение оборота моноцитов в крови значительно коррелирует с обновлением и апоптозом IM, но не с обменом AM у SIV-инфицированных макак во время терминального прогрессирования заболевания, как показано на Рисунке 3B (54, 91). Интересно, что количество копий вирусной ДНК увеличивалось в IM и AM после увеличения оборота моноцитов у SIV-инфицированных макак, но оставалось на том же уровне в CD4 + T-клетках независимо от оборота моноцитов (рис. 3B).Низкая скорость обновления AM, несмотря на то, что они инфицированы SIV, убедительно свидетельствует о том, что при заражении репликационно-компетентным вирусом эта подгруппа макрофагов может составлять важный долгоживущий резервуар вируса (23, 91). Наша интерпретация заключается в том, что увеличение оборота моноцитов было связано с компенсаторным механизмом замещения короткоживущих макрофагов (IM), которые были разрушены SIV в тканях. Это увеличение оборота как моноцитов, так и IM соответствует большей инфекции долгоживущих AM, однако механизмы этой связи неясны.Основываясь на этих исследованиях, мы предложили рабочую модель, показанную на рисунке 4, которая показывает, что (а) в легких существует по крайней мере два типа макрофагов, включая более короткоживущие IM, демонстрирующие относительно более высокий оборот во время гомеостаза, что предполагает критическую роль для повседневной защиты, более долгоживущие AM, которые демонстрируют более низкую текучесть кадров; (b) повышенное инфицирование вирусом SIV как IM, так и AM коррелирует с прогрессированием заболевания СПИДом; (c) Индуцированный SIV апоптоз IM способствует дальнейшему увеличению скорости обновления IM (и моноцитов) в отличие от AM, которые инфицируются SIV, но демонстрируют гораздо более низкие скорости апоптоза и обмена.Это также предполагает, что аналогичные более долгоживущие популяции макрофагов в других тканях / органах также могут инфицироваться и, поскольку они кажутся устойчивыми к апоптозу, вероятно, также будут поддерживать вирусную инфекцию в течение длительных периодов времени, чтобы служить резервуаром и источником вируса хронического воспаления. Вместе эти исследования иллюстрируют обоснование предлагаемых нами стратегий истощения макрофагов.

    Рисунок 3 . Инфекция и репликация вируса иммунодефицита обезьян (SIV) в интерстициальных макрофагах (IM) и AM вносят вклад в вирусную нагрузку в тканях легких, и более высокая смертность IM легких коррелирует с увеличением скорости оборота моноцитов в крови у взрослых инфицированных SIV макак-резус. (A) Конфокальную микроскопию проводили на тканях легких, полученных от инфицированных SIV обезьян с более высокими (> 30%) уровнями оборота моноцитов крови ( n = 6). Антитело против CD163 (зеленое) использовали для идентификации макрофагов, а РНК SIV (красный цвет) выявляли с помощью антисмысловых рибозондов. (B) IM, AM и CD4 + Т-клетки были отсортированы с помощью FACS из одноклеточных суспензий легочных тканей от SIV-инфицированных обезьян с низким ( n = 5) и высоким ( n = 4) кровью. оборот моноцитов и уровни ДНК SIV были количественно определены и стандартизованы по уровням РНКазы P.Рисунок изменен из работы. (54). Авторские права 2015. Американская ассоциация иммунологов, Inc.

    Рисунок 4 . Предлагаемый механизм создания резервуара вируса иммунодефицита обезьян (SIV) в легких у макак, инфицированных вирусом SIV. Легкое содержит по крайней мере два типа макрофагов: короткоживущие интерстициальные макрофаги (IM) и долгоживущие альвеолярные макрофаги (AM). IM становятся массово инфицированными SIV и подвергаются высокому уровню апоптоза, который коррелирует с увеличением оборота моноцитов в крови у новорожденных макак, инфицированных вирусом SIV, с самого начала инфекции (острый).Это отличается от взрослых, инфицированных вирусом иммунодефицита человека, у которых массивное инфицирование макрофагов происходит позже, во время прогрессирования заболевания. Напротив, инфицирование долгоживущим AM вирусом SIV не приводит к высокому уровню апоптоза по сравнению с таковым у IM. Устранение инфицированных SIV долгоживущих AM и CD4 + Т-клеток имеет решающее значение для уменьшения резервуаров SIV / ВИЧ и, следовательно, уменьшения повреждения ткани легких.

    Макрофаги, инфицированные вирусом иммунодефицита обезьян, способствуют патогенезу в различных тканях, что приводит к сердечно-сосудистым, метаболическим и неврологическим заболеваниям.Исследования ЦНС показали, что инфекция ВИЧ / SIV в головном мозге была связана с накоплением периваскулярных макрофагов и микроглии, связанных с поражениями и энцефалитом (15, 97–99). Внимание также уделяется жировым тканям, которые способны влиять на системные иммунные реакции и, как считается, способствуют хроническому воспалению, наблюдаемому при старении и при некоторых инфекциях (100–102). Было обнаружено, что макрофаги жировой ткани связаны с усилением воспаления и липодистрофий во время ВИЧ / SIV-инфекции (103).Инфекция SIV привела к фенотипическим и функциональным изменениям в резидентных клетках жировой ткани с общим усилением иммунной активации. SIV-инфицированные макрофаги и CD4 + Т-клетки памяти наблюдались в стромальной сосудистой фракции исследуемой жировой ткани и были предложены в качестве потенциальных резервуаров во время лечения АРТ, особенно потому, что жировая ткань может быть местом, не полностью допускающим АРТ (104, 105) . Кроме того, инфицированные вирусом макрофаги, выявленные в костном мозге, также коррелируют с гематологическими аномалиями, анемией и гиперплазией костного мозга у макак, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (106), и могут мигрировать в ЦНС, вызывая у людей деменцию, связанную с ВИЧ-1 (107).Другие исследования слизистой оболочки кишечника у людей показали, что инфицированные макрофаги, накапливающиеся в подвздошной кишке, проявляют повышенный воспалительный профиль и, таким образом, вероятно, способствуют нарушению регуляции кишечника, связанному с началом СПИДа (108). Кроме того, инфекция ВИЧ / SIV вызывает изменения в архитектуре селезенки, связанные со значительными сдвигами в популяциях макрофагов, экспрессирующих CD68, CD163 и Mac387 в этом органе (109). Недавнее исследование на гуманизированных мышах показало, что долгоживущие макрофаги селезенки могут содержать латентный ВИЧ во время лечения АРТ (110), что не только объясняет персистентность вируса, но также предположительно способствует дисфункции макрофагов и хронической иммунной активации.Таким образом, лучшее понимание различных исходов инфекций ВИЧ / ВИП в короткоживущих и долгоживущих макрофагах будет иметь решающее значение для полной характеристики механизмов патогенеза ВИЧ и создания резервуара вируса для достижения в конечном итоге излечения от СПИДа. Хотя молекулярные механизмы еще не ясны, данные нашей модели макак-резус продемонстрировали, что инфекция SIV и снижение периода полужизни короткоживущих макрофагов, по-видимому, вносят вклад в патогенез и прогрессирование СПИДа. Напротив, долгоживущие макрофаги, которые также восприимчивы к инфекции SIV, не демонстрируют сокращения периода полужизни, поскольку они выживают после инфекции.Следовательно, долгоживущие макрофаги могут быть идеальным местом для долгосрочного резервуара вируса и источником хронического воспаления, наблюдаемого у ВИЧ-инфицированных.

    Инфекция SIV и прогрессирование заболевания у педиатрических макак-резус

    ВИЧ / SIV-инфекции вызывают более высокие темпы заболеваемости у младенцев по сравнению со взрослыми, и у младенцев также проявляется иммунная система, которая в подавляющем большинстве случаев склонна к подавлению иммунитета или противовоспалительным ответам [см. (111)]. Педиатрический иммунитет часто называют «нарушенным» из-за минимальных или отсутствующих ответов Th2, которые еще не полностью сформировались. In utero младенцы защищены в полустерильной среде и должны оставаться иммунологически толерантными к материнским антигенам (112). После рождения новорожденные подвергаются бомбардировке новыми чужеродными веществами и организмами, многие из которых считаются безвредными или даже полезными. До и во время созревания иммунной системы новорожденные частично защищены материнским иммунитетом за счет трансплацентарной передачи антител и грудного вскармливания, что позволяет осуществлять пассивную передачу антител, лимфоцитов, иммунных факторов, а также за счет засеивания кишечника новорожденного комменсальными бактериями. которые в конечном итоге помогают регулировать реакцию на инфекции и избегать пагубных воспалительных реакций [см.(113)]. Толерантность ко многим доброкачественным антигенам в раннем возрасте будет полезна для выживания младенцев в сочетании с постепенным распознаванием и способностью иммунологически отличать себя от чужеродных антигенов. Переход от толерантности к проявлению зрелых эффекторных иммунных ответов происходит в течение нескольких лет и происходит асинхронно между иммунными компартментами, при этом полная иммунная компетентность достигается в подростковом возрасте (114). Однако важно учитывать, что первоначальное отсутствие воспаления у новорожденного и медленное созревание по мере развития также могут способствовать свободному распространению инфекции и экспоненциальному размножению, подчеркивая важный баланс между начальными механизмами толерантности и возможным созреванием Th2-способного иммунные ответы.Это также подчеркивает влияние возраста на момент инфицирования, который может определять тяжесть заболевания в зависимости от патогена и иммунной компетентности ребенка во время заражения. Исследования с использованием детенышей макак оказались жизненно важными для изучения иммунного онтогенеза во время эмбрионального и постнатального развития из-за их физиологического сходства с людьми, а также потому, что у них наблюдаются аналогичные инфекции и исходы заболеваний после инфицирования SIV по сравнению с педиатрическими инфекциями ВИЧ (115). Однако остаются без ответа вопросы, касающиеся развития у детей компетентных иммунных ответов в контексте инфекции и временного течения болезни.

    Быстрые темпы заболеваемости и более высокие показатели смертности, которые наблюдаются в педиатрических случаях, предполагают, что ВИЧ и SIV могут использовать незрелую иммунную систему у младенцев. Как показано на рисунке 5, общее количество CD4 + Т-клеток у младенцев значительно выше, чем у взрослых (116, 117). Первичные клетки-мишени вируса — это CCR5 + фракция CD4 + Т-клеток, но эти клетки отсутствуют в крови и LN младенцев (118). У людей двухфазный характер прогрессирования заболевания наблюдается у нелеченных, ВИЧ-инфицированных детей, при этом половина из них достигает терминальной стадии СПИДа к двум годам (119, 120), в то время как другая половина имеет более медленное начало заболевания и выживает в подростковом возрасте ( 121).Однако в обеих группах ВИЧ-инфицированных детей острая плазменная виремия обычно увеличивается в 10 раз по сравнению с уровнями, наблюдаемыми у взрослых, и уровни РНК не снижаются до установленного уровня вируса до ~ 5 лет (122) (рис. 5). Это говорит о том, что истощение CD4 + Т-клеток и / или степень иммунной активации не коррелируют с постоянной корреляцией и не способствуют прогрессированию заболевания до СПИДа, как это было показано с инфекциями у взрослых (123, 124). Основываясь на наших более ранних результатах о том, что более высокий оборот моноцитов и разрушение макрофагов предсказывают начало SAIDS у взрослых макак (23, 54, 81), мы предположили, что аналогичным образом разрушение и увеличение обмена моноцитов / макрофагов будет тем более проиллюстрировано на постановка тяжелой детской инфекции.У младенцев-резусов, как и у детей-людей, системно повышенное количество CD4 + Т-клеток по сравнению со взрослыми. Предыдущая работа на педиатрических макаках показала, что кишечные CCR5 + CD4 + Т-клетки преимущественно инфицированы SIV и впоследствии истощаются (118, 125, 126). Однако, хотя эти подмножества CCR5 + CD4 + Т-клеток наблюдались в детской кишечной ткани, подавляющее большинство CD4 + Т-клеток, обнаруженных у новорожденных, известно, что они экспрессируют наивный фенотип и функционально подвержены иммунной толерантности (125, 127–130).

    Рисунок 5 . Относительные уровни РНК вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) (красный) и клеток CD4 (синий) у взрослых (пунктирные линии) и детей (сплошные линии) в годы после заражения ВИЧ-1. Серыми прямоугольниками выделено среднее время до СПИДа / смерти для младенцев по регионам и путям заражения по сравнению со взрослыми. США, США. Рисунок из Ref. (114) © 2013 John Wiley & Sons A / S. Опубликовано John Wiley & Sons Ltd. Иммунологические обзоры 254/2013.

    Эти фенотипические и функциональные различия CD4 + Т-клеток у детей, в дополнение к зарегистрированному возрастному снижению количества CD4 + Т-клеток (131–133), еще больше усложняют интерпретацию влияния инфекции CD4 + Т-лимфоцитами в педиатрических случаях, которые быстрее прогрессируют до СПИД.Учитывая, что у новорожденных меньше Т-клеток-мишеней CCR5 + и в значительной степени отсутствует характерное для взрослых инфекций истощение CD4 + Т-клеток (114, 117, 134), наше внимание было обращено на исследования макрофагов, чтобы лучше понять их вклад в обострение прогрессирования заболевания, обнаруживаемого в педиатрии случаи.

    Макрофаги в детской SAIDS

    Поскольку увеличение оборота моноцитов и разрушение тканевых макрофагов под действием SIV предсказывало начало СПИДа у инфицированных взрослых макак, мы стремились определить, влияют ли моноциты / макрофаги на более быстрое и тяжелое заболевание, наблюдаемое у младенцев, инфицированных вирусом SIV.В настоящее время явно не хватает опубликованных исследований роли макрофагов в педиатрических инфекциях ВИЧ / ВИП. Недавно опубликованные базовые исследования показали, что у наивных, неинфицированных новорожденных и детенышей макак в возрасте 4 месяцев или менее по своей природе наблюдается более высокая скорость оборота моноцитов (в среднем 15,9%), чем наблюдаемая у неинфицированных взрослых макак-резус (в среднем 2,9%) (135) (рис. 6A). ). Примерно к 4-6 месяцам скорость оборота моноцитов снизилась до уровней, наблюдаемых у взрослых (рис. 6B).Это наблюдение свидетельствует о том, что моноциты подвергались созреванию по функциям или физиологии в течение первых нескольких месяцев жизни у макак-резусов. Это могло повлиять на выводы о том, что у животных, инфицированных SIV при рождении, скорость оборота моноцитов увеличивалась еще больше и оставалась высокой по мере их перехода в SAIDS, без промежуточной хронической стадии, как это наблюдается при инфекции у взрослых (Рисунки 2A, B и 6C).

    Рисунок 6 . Высокий оборот моноцитов у неинфицированных детенышей макак-резус дополнительно увеличивается при инфицировании вирусом иммунодефицита обезьян (SIV).Включение бромдезоксиуридина (BrdU) анализировали через 24 часа с помощью многоцветной проточной цитометрии для определения процента моноцитов BrdU + (HLA-DR + CD3- CD8- CD20- CD14 +). Скорость оборота моноцитов составила (A), по сравнению с молодыми макаками-резус и взрослыми макаками-резус, и (B) , исследованными на 20 неинфицированных макаках в возрасте от 3 до 190 дней. (C) Статистическая значимость сравнений скорости оборота моноцитов у новорожденных и взрослых макак-резус до инфекций (UN = неинфицированные) и во время острой, хронической и SAIDS стадии у SIV-инфицированных макак определялась с помощью теста Краскала-Уоллиса с поправкой на множественные сравнения с помощью пост-теста Данна; P <0.05 *, P <0,01 **, P <0,001 ***. Рисунок изменен из работы. (135).

    Физиологически более высокая скорость оборота моноцитов у новорожденных, по-видимому, отражает развивающуюся незрелую иммунную систему, которая может представлять более высокий риск заражения макрофагами ВИЧ / SIV. Чтобы проверить это, мы применили окраску терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы dUTP nick-end label (TUNEL) и наблюдали апоптотические TUNEL-положительные макрофаги в LN и кишечнике у SIV-инфицированных новорожденных, что соответствовало увеличению трафика макрофагов, недавно полученных из циркулирующих моноцитов (BrdU + CD163 + ).Это было похоже на наблюдения за инфицированными взрослыми макаками, прогрессирующими до SAIDS, и предполагало, что повышенная скорость оборота моноцитов была необходима для пересева тканевых макрофагов, которые были разрушены вирусной инфекцией (135). Кроме того, иммунофлуоресцентный анализ ЛУ, ткани кишечника и легких показал, что большая часть вирус-продуцирующих клеток на самом деле была макрофагами (135). Взятые вместе, более высокий оборот моноцитов у младенцев в соответствии с повреждением макрофагов инфекцией SIV может пролить свет на причины более быстрого прогрессирования заболевания у младенцев с SIV, как показано на рисунке 2B.

    Несмотря на одинаковые уровни CD4 + Т-лимфоцитов и плазменную виремию у инфицированных детей, возраст пациента значительно влияет на скорость прогрессирования терминальной стадии болезни, при этом самые молодые пациенты обычно демонстрируют самые высокие показатели смертности, как показано на Рисунке 5, с более коротким средним временем до смерть установлена ​​для внутриутробных случаев и перинатальных случаев ВИЧ-инфекции. Быстрое прогрессирование ВИЧ-инфекции у детей начинает приближаться к темпам, более близким к тем, которые наблюдаются у взрослых, примерно в 5-летнем возрасте.Это соответствует наблюдениям, что у людей старше 5 лет прогностические биомаркеры уровней CD4 + Т-клеток и плазменной виремии также переходят к уровням, наблюдаемым у взрослых (114), что, вероятно, означает созревание иммунной системы. В педиатрических исследованиях сообщалось о возрастных различиях в ответах врожденного иммунитета (136, 137), а также в популяциях лимфоцитов, включающих иммунные ответы крови и слизистых оболочек, включая CD4 + T-клетки, CD8 + T-клетки, B-клетки и NK-клетки [обзор в исх.(111, 138–140)]. Кроме того, молекулы плазмы различаются по концентрации в зависимости от возраста (141–143).

    Для дальнейшей оценки перехода от педиатрической модели к взрослой модели прогрессирования заболевания мы экспериментально инфицировали детей несколько старшего возраста в возрасте 3–4 месяцев, когда скорость физиологического обмена моноцитов переходила к темпам, сравнимым со здоровыми взрослыми. Из четырех животных, инфицированных в этой возрастной группе, у двух была обнаружена динамика вирусной нагрузки, аналогичная динамике вирусной нагрузки у животных, инфицированных в новорожденном, и они быстро прогрессировали с диагнозом SAIDS к 20 неделям pi.Вирусная нагрузка SIV в плазме крови у оставшихся двух младенцев была более сопоставима с уровнями, наблюдаемыми у взрослых, и они демонстрировали типичное течение инфекции, с острой или хронической фазой, аналогичной взрослым инфекциям, вместо того, чтобы прогрессировать непосредственно до явных SAIDS, как это происходит у инфицированных новорожденных ( 135). У этих животных, инфицированных в возрасте 3–4 месяцев, обмен моноцитов резко увеличился во время острой фазы, что было аналогично тому, что наблюдалось у инфицированных новорожденных (рис. 7A). Однако вместо того, чтобы продолжать увеличиваться на протяжении всей инфекции, скорость оборота моноцитов у младенцев старшего возраста снизилась до тех же уровней, что и у взрослых (рис. 7B) через 8 недель после инфицирования (хотя и немного выше), и не изменилась в абсолютном количестве моноцитов на периферии.Хроническая фаза была не только заметна у инфицированных младенцев старшего возраста, но и демонстрировала скорость оборота моноцитов, более похожую на взрослую до прогрессирования до SAIDS. По мере того, как начали наблюдаться клинические признаки, связанные с SAIDS, у младенцев более старшего возраста оборот моноцитов снова увеличился, демонстрируя, таким образом, то, что мы считаем «промежуточным» фенотипом в отношении обмена моноцитов, вирусной нагрузки в плазме и риска начала прогрессирования терминального SAIDS по отношению к дивергентным. темпы прогрессирования течения заболевания при инфекциях у новорожденных и взрослых (135) (рис. 2С).Этот промежуточный фенотип помогает объяснить двухфазные паттерны заболевания, наблюдаемые у ВИЧ-инфицированных детей, так что различные иммунные параметры на разных стадиях созревания во время инфекции, по-видимому, влияют на скорость эффективных иммунных ответов, прогрессирование заболевания и результаты выживания.

    Рисунок 7 . Продольный ход изменений, наблюдаемых во время прогрессирования обезьяньего СПИДа (SAIDS) у детенышей макак, инфицированных SIVmac251, в возрасте 3-4 месяцев. (A) Включение бромдезоксиуридина (BrdU) оценивали по обновлению моноцитов через 24 часа.Скорость обновления моноцитов крови измерялась каждые 4–6 недель в течение инфекции до прогрессирования в SAIDS или в указанные моменты времени (†). Средние скорости оборота моноцитов (т.е.% BrdU + CD14 + моноцитов) четырех инфицированных взрослых показаны для сравнения (пунктирная линия). (B) Статистический анализ скорости оборота моноцитов у детенышей макак проводили с помощью теста Краскела-Уоллиса с поправкой на множественные сравнения с использованием пост-теста Данна; P <0,05 *. ООН; прединфекция, wpi; недель после заражения.Хронический; все младенческие временные точки после 8 wpi. Рисунок изменен из работы. (135).

    Эти наблюдения подчеркивают важность использования соответствующих возрастных контролей при изучении педиатрических инфекций и обеспечивают основу для продолжения работы, связывающей созревание иммунных ответов с изменениями в патогенезе, иммунной активации и динамике популяций тканевых макрофагов у младенцев, инфицированных в разном возрасте. Насколько нам известно, опубликованных работ, с которыми можно было бы сравнить и сопоставить наши исследования педиатрических макрофагов, практически нет, особенно в случае ВИЧ / SIV-инфекции и прогрессирования СПИДа.Дополнительные соображения необходимы для лучшего понимания возрастных иммунных ответов и патогенеза у пациентов, получающих АРТ, которые обычно используются при инфицировании людей и экспериментальных макак ВИЧ / SIV. В целом АРТ менее эффективна для подавления вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных детей по сравнению со взрослыми (144, 145). Типичными показателями эффективности лечения у детей являются вирусная РНК-нагрузка и количество CD4 + Т-лимфоцитов, которые сильно различаются по сравнению с результатами, полученными при применении аналогичных протоколов приема лекарств у взрослых, и особенно при сравнении различных комбинированных лекарственных препаратов (146).Кроме того, определение вирусологической супрессии варьируется между исследованиями, которые могут показывать до 30% неудач после лечения первой линии (которое не включает ингибиторы протеазы) (146). Показатели процента неудач также сообщаются независимо от исходов со смертельным исходом. В отличие от исследований на людях, у новорожденных и взрослых макак-резусов обычно используются более похожие схемы дозирования в зависимости от веса, что позволяет проводить более прямое сравнение между эффективностью лечения и результатами выживания после экспериментальных инфекций, начатых в разном возрасте.Взрослые часто получают три режима: эмтрицитабин, тенофовир и долутегравир, и обычно сообщается об успешном контроле репликации вируса (69). Интересно, что у педиатрических макак лекарственная терапия оказывается менее эффективной, чем у взрослых, и животные демонстрируют устойчивую высокую вирусную нагрузку и прогрессируют, несмотря на лечение (147). Возможно, это связано с накоплением специфических мутаций, устойчивых к лекарствам, в дополнение к подавленной иммунной системе. Наша лаборатория в настоящее время оценивает устойчивость вируса в тканевых макрофагах и Т-клетках у педиатрических животных, получавших АРТ, которые интегрируются со сдвигами фенотипа моноцитов / макрофагов для выявления биомаркеров эффективности АРТ.

    Заключение и перспективы

    Результаты многих исследований показали продуктивную инфекцию в макрофагах, но их роль в качестве скрытого резервуара все еще остается весьма спорной. В некоторых исследованиях вирусная ДНК не обнаруживается в популяциях тканевых макрофагов после успешной терапии АРТ. Это может быть связано с более коротким периодом полураспада некоторых подмножеств макрофагов, небольшими размерами образцов и / или ограничениями порогового обнаружения в анализах, используемых для обнаружения вируса. Часто бывает трудно идентифицировать инфицированные макрофаги, особенно в тканях, результаты которых отрицательны с помощью ПЦР или in situ гибридизации, но анализы вирусного разрастания выявили макрофаги открытой ткани как способные, латентно инфицированные резервуары.Ограничения анализов в дополнение к ограничениям исследований на ВИЧ в тканях человека вызывают постоянные дискуссии. Однако наши исследования на макаках-резус показывают, что короткоживущие макрофаги способствуют активной инфекции, а затем умирают, тем самым вызывая увеличение оборота моноцитов, что служит физиологическим биомаркером для прогнозирования начала SAIDS. Наша коррелятная гипотеза следует из того, что долгоживущие макрофаги инфицируются, не умирают и вместо этого служат резервуаром, невосприимчивым к АРТ. Восприимчивость популяций макрофагов к вирусной инфекции, вероятно, будет различаться у разных людей и, вероятно, зависит от времени начала АРТ, величины ВН в начале АРТ, вирусного штамма, иммунного статуса и возраста на момент инфицирования.Эти переменные могут привести к обсуждаемым несоответствиям, обнаруженным в литературе, относительно вклада инфицированных макрофагов в резервуары вируса. Важно отметить, что, хотя в этом обзоре основное внимание уделялось роли моноцитов / макрофагов в ВИЧ / SIV-инфекции, другие клетки иммунной системы также могут оказывать важное влияние на инфекцию и патологию. Очевидно, что необходимы дальнейшие исследования для выявления и удаления всех вирусных резервуаров для разработки терапевтических методов лечения.

    Таким образом, мы показали, что увеличение оборота моноцитов в крови, которое является результатом гибели короткоживущих макрофагов в ткани, предсказывает прогрессирование заболевания у инфицированных вирусом SIV макак-резус. Базовая скорость оборота моноцитов, наблюдаемая у неинфицированных новорожденных, выше, чем у неинфицированных взрослых. У животных, инфицированных SIV при рождении, оборот моноцитов увеличивался и оставался выше, чем у взрослых, инфицированных SIV, и это было связано с более быстрым прогрессированием заболевания.

    Наши текущие исследования направлены на изучение связи между более высоким оборотом моноцитов и быстрым прогрессированием у младенцев, а также на роль макрофагов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека, как резервуара вируса. Ведется работа по оценке персистенции вируса в тканевых макрофагах и Т-клетках у педиатрических животных, получавших АРТ. Мы предполагаем, что ранняя и высокая инфекция неонатальных макрофагов приводит к созданию вирусного резервуара в долгоживущих подгруппах макрофагов, что способствует неконтролируемой вирусной нагрузке, несмотря на АРТ, и, возможно, объясняет неудачи лечения первой линии у детей.

    Вместе мы рассмотрим некоторые важные аспекты макрофагов при инфицировании и прогрессировании ВИО и подчеркнем необходимость дальнейшего изучения их роли в педиатрических случаях.

    Банкноты

    Данные, представленные в наших собственных исследованиях, были выполнены в соответствии со стандартами Национального института здоровья (NIH), Руководства по уходу и использованию лабораторных животных. Институциональный комитет по уходу и использованию животных Тулейнского университета одобрил используемые протоколы. Было получено разрешение на использование материалов, защищенных авторским правом, из других источников.

    Авторские взносы

    Все авторы участвовали в концепции, подготовке и редактировании рукописи. К.М. написал рукопись и развил рисунки.

    Заявление о конфликте интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Финансирование

    Исследовательская работа из нашей собственной лаборатории, упомянутая в этой рукописи, была поддержана грантами NIH для MK, включая RO1AI097059, R21AI0, RO1HL125054, R21AI116198, R21AI110163 и R33AI110163.

    Список литературы

    4. Стефатер Дж. А. III, Рен С., Ланг Р. А., Даффилд Дж. С.. Полицейские Мечникова: макрофаги в развитии, гомеостаз и регенерация. Trends Mol Med (2011) 17 (12): 743–52. DOI: 10.1016 / j.molmed.2011.07.009

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    6. Ван Гассен Н., Стэлс В., Ван Овермайр Э., Де Груф С., Соджуди М., Хереманс Ю. и др. Краткий обзор: макрофаги: универсальные привратники во время развития, повреждения и регенерации β-клеток поджелудочной железы. Stem Cells Transl Med (2015) 4 (6): 555–63. DOI: 10.5966 / sctm.2014-0272

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    7. Ламерс С.Л., Фогель Г.Б., Зингер Э.Дж., Салеми М., Нолан Д.Д., Хуйсентруит Л.К. и др. Nef ВИЧ-1 в патогенезе макрофагально-опосредованных заболеваний. Int Rev Immunol (2012) 31 (6): 432–50. DOI: 10.3109 / 08830185.2012.737073

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    8. Сугимото К., Хасэгава А., Сайто Ю., Фукуё Ю., Чиу К. Б., Цай Ю. и др.Кинетика дифференцировки моноцитов крови и дендритных клеток у макак: идеи для понимания развития миелоидных клеток человека. J Immunol (2015) 195 (4): 1774–81. DOI: 10.4049 / jimmunol.1500522

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    9. Винн Т.А., Ваннелла К.М. Макрофаги в восстановлении, регенерации и фиброзе тканей. Иммунитет (2016) 44 (3): 450–62. DOI: 10.1016 / j.immuni.2016.02.015

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    11.Мерад М., Манц М.Г., Карсунки Х., Вейджерс А, Петерс В., Чаро И. и др. Клетки Лангерганса обновляются в коже на протяжении всей жизни в стабильных условиях. Nat Immunol (2002) 3 (12): 1135–41. DOI: 10.1038 / ni852

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    12. Bouwens L, Baekeland M, De Zanger R, Wisse E. Количественное определение, тканевое распределение и кинетика пролиферации клеток Купфера в нормальной печени крысы. Гепатология (1986) 6 (4): 718–22. DOI: 10.1002 / hep.1840060430

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    13. Лоусон Л.Дж., Перри В.Х., Гордон С. Оборот резидентной микроглии в нормальном мозге взрослой мыши. Neuroscience (1992) 48 (2): 405–15. DOI: 10.1016 / 0306-4522 (92) -2

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    15. Филипович А.Р., МакГэри С.М., Холдер Г.Е., Линдгрен А.А., Джонсон Е.М., Сугимото С. и др. Пролиферация периваскулярных макрофагов способствует развитию энцефалитических поражений у ВИЧ-инфицированных людей и у макак, инфицированных вирусом иммунодефицита человека. Sci Rep (2016) 6: 32900. DOI: 10.1038 / srep32900

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    16. Бурдо Т.Х., Уокер Дж., Уильямс К.С.. Поляризация макрофагов при СПИДе: динамическое взаимодействие между противовирусными и противовоспалительными макрофагами во время острой и хронической инфекции. Дж. Clin Cell Immunol. (2015) 6 (3): 333. DOI: 10.4172 / 2155-9899.1000333

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    17. Guilliams M, De Kleer I, Henri S, Post S., Vanhoutte L, De Prijck S, et al.Альвеолярные макрофаги развиваются из моноцитов плода, которые дифференцируются в долгоживущие клетки на первой неделе жизни с помощью GM-CSF. J Exp Med (2013) 210 (10): 1977–92. DOI: 10.1084 / jem.20131199

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18. Фишер-Смит Т., Тедальди Е.М., Раппапорт Дж. Коэкспрессия CD163 / CD16 циркулирующими моноцитами / макрофагами в ВИЧ: потенциальные биомаркеры ВИЧ-инфекции и прогрессирования СПИДа. Ретровирусы AIDS Res Hum (2008) 24 (3): 417–21.DOI: 10.1089 / помощь.2007.0193

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    20. Соулас К., Конерли С., Ким В.К., Бурдо Т.Х., Альварес Х, Лакнер А.А. и др. Недавно инфильтрирующие MAC387 (+) моноциты / макрофаги — третья популяция макрофагов, вовлеченная в формирование энцефалитических поражений SIV и ВИЧ. Am J Pathol (2011) 178 (5): 2121–35. DOI: 10.1016 / j.ajpath.2011.01.023

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    21. Odink K, Cerletti N, Brüggen J, Clerc RG, Tarcsay L., Zwadlo G, et al.Два связывающих кальций белка в макрофагах инфильтрата ревматоидного артрита. Nature (1987) 330 (6143): 80–2. DOI: 10.1038 / 330080a0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    22. Уокер Дж. А., Сульцинер М. Л., Новицки К. Д., Миллер А. Д., Бурдо Т. Х., Уильямс К. С.. Повышенное количество макрофагов CD163 + в сердцах обезьян, инфицированных вирусом иммунодефицита обезьян, коррелирует с сердечной патологией и фиброзом. Ретровирусы AIDS Res Hum (2014) 30 (7): 685–94.DOI: 10.1089 / aid.2013.0268

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    23. Цай Й, Сугимото С., Лю Д. X., Мидкифф С. К., Альварес Х, Лакнер А. А. и др. Повышенный оборот моноцитов связан с накоплением интерстициальных макрофагов и повреждением легочной ткани у SIV-инфицированных макак-резус. J Leukoc Biol (2015) 97 (6): 1147–53. DOI: 10.1189 / jlb.4A0914-441R

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Swan ZD, Bouwer AL, Wonderlich ER, Barratt-Boyes SM.Устойчивое накопление макрофагов кишечника с нарушенной фагоцитарной функцией коррелирует с прогрессированием заболевания SIV у макак. Eur J Immunol (2017) 47 (11): 1925–35. DOI: 10.1002 / eji.201646904

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    25. Бесерра Дж. К., Бильдштейн Л. С., Гач Дж. С.. Недавние исследования пандемии ВИЧ / СПИДа. Microb Cell (2016) 3 (9): 451–75. DOI: 10.15698 / mic2016.09.529

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26.Pantaleo G, Graziosi C, Fauci AS. Иммунопатогенез инфекции вирусом иммунодефицита человека. N Engl J Med (1993) 328 (5): 327–35. DOI: 10.1056 / NEJM199302043280508

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28. Кармайкл С. Профилактика и лечение распространенных оппортунистических осложнений, связанных с ВИЧ. Prim Care (1997) 24 (3): 561–74.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    30. Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC).Пересмотренное определение случая ВИЧ-инфекции в эпиднадзоре — США, 2014 г. MMWR Recomm Rep (2014) 63 (RR-03): 1–10.

    Google Scholar

    33. Марголис Д.М., Арчин Н.М. Провирусный латентный период, стойкая инфекция вируса иммунодефицита человека и развитие агентов, обращающих латентный период. J Infect Dis (2017) 215 (Suppl_3): S111–8. DOI: 10.1093 / infdis / jiw618

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34. Шан Х.Т., Дин Дж.В., Юй С.Ю., Ву Т., Чжан К.Л., Лян Ф.Дж.Прогресс и проблемы в использовании латентных агентов, активирующих ВИЧ-1. Acta Pharmacol Sin (2015) 36 (8): 908–16. DOI: 10.1038 / aps.2015.22

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    35. Баннерт Н., Шентен Д., Крейг С., Содроски Дж. Уровень экспрессии CD4 ограничивает инфицирование первичных макрофагов макак-резус Т-тропным вирусом иммунодефицита обезьян и макрофагетропными вирусами иммунодефицита человека. J Virol (2000) 74 (23): 10984–93.DOI: 10.1128 / JVI.74.23.10984-10993.2000

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    36. Ли Б., Шаррон М., Монтанер Л.Дж., Вайсман Д., Домс Р.В. Количественная оценка уровней CD4, CCR5 и CXCR4 в субпопуляциях лимфоцитов, дендритных клетках и дифференцированно кондиционированных макрофагах, происходящих из моноцитов. Proc Natl Acad Sci U S. A (1999) 96 (9): 5215–20. DOI: 10.1073 / pnas.96.9.5215

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    37. Bergamini A, Bolacchi F, Pesce CD, Carbone M, Cepparulo M, Demin F, et al.Повышенная экспрессия CD4 и CCR5 и проникновение вируса иммунодефицита человека типа 1 в макрофаги, стимулированные лигандом CD40. J Infect Dis (2002) 185 (11): 1567–77. DOI: 10.1086 / 340413

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    38. Mori K, Rosenzweig M, Desrosiers RC. Механизмы адаптации вируса иммунодефицита обезьян к репликации в альвеолярных макрофагах. J Virol (2000) 74 (22): 10852–9. DOI: 10.1128 / JVI.74.22.10852-10859.2000

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    39.Таттл Д.Л., Харрисон Дж. К., Андерс С., Слизман Дж. В., Гуденау М. М.. Экспрессия CCR5 увеличивается во время дифференцировки моноцитов и напрямую опосредует восприимчивость макрофагов к инфекции вирусом иммунодефицита человека типа 1. J Virol (1998) 72 (6): 4962–9.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    40. Embretson J, Zupancic M, Ribas JL, Burke A, Racz P, Tenner-Racz K, et al. Массовое скрытое инфицирование хелперных Т-лимфоцитов и макрофагов ВИЧ в инкубационный период СПИДа. Nature (1993) 362 (6418): 359–62. DOI: 10.1038 / 362359a0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    42. ДиНаполи С.Р., Ортис А.М., Ву Ф., Мацуда К., Твигг Х.Л. 3-й, Хирш В.М. и др. Резидентные в тканях макрофаги могут содержать репликационно-способный вирус у азиатских макак, не получавших антиретровирусной терапии и инфицированных вирусом SIV. JCI Insight (2017) 2 (4): e

    . DOI: 10.1172 / jci.insight.

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    43. Аррильдт К.Т., Лабранш С.К., Джозеф С.Б., Духовлинова Е.Н., Грэм В.Д., Пинг Л.Х. и др.Фенотипические корреляты тропизма макрофагов ВИЧ-1. J Virol (2015) 89 (22): 11294–311. DOI: 10.1128 / JVI.00946-15

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    44. Миччи Л., Альварес Х, Ириэле Р.И., Ортис А.М., Райан Э.С., МакГэри С.С. и др. Истощение CD4 у макак, инфицированных SIV, приводит к инфекции макрофагов и микроглии с быстрым обновлением инфицированных клеток. PLoS Pathog (2014) 10 (10): e1004467. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1004467

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    46.Николсон Дж. К., Кросс Г. Д., Каллавей К. С., Макдугал Дж. С.. Инфицирование человеческих моноцитов in vitro Т-лимфотропным вирусом типа III / вирусом, ассоциированным с лимфаденопатией (HTLV-III / LAV). J Immunol (1986) 137 (1): 323–9.

    Google Scholar

    47. Gendelman HE, Orenstein JM, Martin MA, Ferrua C, Mitra R, Phipps T, et al. Эффективное выделение и размножение вируса иммунодефицита человека на моноцитах, обработанных рекомбинантным колониестимулирующим фактором 1. J Exp Med (1988) 167 (4): 1428–41.DOI: 10.1084 / jem.167.4.1428

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    48. Криббс С.К., Леннокс Дж., Калиендо А.М., Браун Л.А., Гуидо Д.М. Здоровые ВИЧ-1-инфицированные люди, получающие высокоактивную антиретровирусную терапию, содержат ВИЧ-1 в своих альвеолярных макрофагах. Ретровирусы AIDS Res Hum (2015) 31 (1): 64–70. DOI: 10.1089 / AID.2014.0133

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    49. Браун С.Р., Чапига М., Кабат Дж., Данг К., Урманов И., Нишимура Ю. и др.Уникальная патология у инфицированных вирусом обезьяньего иммунодефицита макак с быстрым прогрессированием согласуется с патогенезом, отличным от патогенеза классического СПИДа. J Virol (2007) 81 (11): 5594–606. DOI: 10.1128 / JVI.00202-07

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    50. Авалос С. Р., Абреу С. М., Куин С. Е., Ли М., Прайс С., Ширк Е. Н. и др. Макрофаги мозга у обезьян, инфицированных вирусом иммунодефицита обезьян и подавленных антиретровирусными препаратами: функциональный латентный резервуар. MBio (2017) 8 (4): e01186-17. DOI: 10.1128 / mBio.01186-17

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    51. Honeycutt JB, Thayer WO, Baker CE, Ribeiro RM, Lada SM, Cao Y, et al. Персистенция ВИЧ в тканевых макрофагах гуманизированных мышей, содержащих только миелоиды, во время антиретровирусной терапии. Nat Med (2017) 23 (5): 638–43. DOI: 10,1038 / нм 4319

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    53. Игараши Т., Браун С.Р., Эндо Ю., Баклер-Уайт А., Плишка Р., Бишофбергер Н. и др.Макрофаги являются основным резервуаром и поддерживают высокую вирусную нагрузку у макак-резусов после истощения CD4 + Т-клеток высокопатогенным вирусом иммунодефицита обезьян / химерой ВИЧ типа 1 (SHIV): последствия для инфицирования людей ВИЧ-1. Proc Natl Acad Sci U S. A (2001) 98 (2): 658–63. DOI: 10.1073 / pnas.98.2.658

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    54. Цай Й., Сугимото К., Араинга М., Мидкифф С.К., Лю Д.X., Альварес Х и др. Преимущественное разрушение интерстициальных макрофагов над альвеолярными макрофагами как причина легочного заболевания у макак-резусов, инфицированных вирусом иммунодефицита обезьян. J Immunol (2015) 195 (10): 4884–91. DOI: 10.4049 / jimmunol.1501194

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    55. Лакриц Дж. Р., Бодаир А., Шах Н., О’Доннелл Р., Полидефкис М. Дж., Миллер А. Д. и др. Транспорт моноцитов, гистопатология ганглиев задних корешков и потеря плотности интраэпидермальных нервных волокон при периферической невропатии SIV. Am J Pathol (2015) 185 (7): 1912–23. DOI: 10.1016 / j.ajpath.2015.03.007

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    56.Типпетт Э., Ченг В.Дж., Весторп С., Кэмерон ПУ, Брю Б.Дж., Левин С.Р. и др. Дифференциальная экспрессия CD163 на субпопуляциях моноцитов у здоровых людей и людей, инфицированных ВИЧ-1. PLoS One (2011) 6 (5): e19968. DOI: 10.1371 / journal.pone.0019968

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    57. Эллери П.Дж., Типпет Э., Чиу Ю.Л., Пауковикс Г., Камерон П.У., Соломон А. и др. Подмножество моноцитов CD16 + более восприимчиво к инфекции и предпочтительно содержит ВИЧ-1 in vivo. J Immunol (2007) 178 (10): 6581–9. DOI: 10.4049 / jimmunol.178.10.6581

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    58. Оренштейн Дж. М., Фокс С., Валь С. М.. Макрофаги как источник ВИЧ при оппортунистических инфекциях. Science (1997) 276 (5320): 1857–61. DOI: 10.1126 / science.276.5320.1857

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    60. Войнов Л., Мартинс М.А., Бин А.Т., Велосо де Сантана М.Г., Саша Дж. Б., Уилсон Н. А. и др. Большинство свежесортированных CD8 (+) Т-клеток, специфичных к вирусу обезьяньего иммунодефицита (SIV), не могут подавлять репликацию вируса в макрофагах, инфицированных вирусом SIV. J Virol (2012) 86 (8): 4682-7. DOI: 10.1128 / JVI.06324-11

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    61. Aquaro S, Caliò R, Balzarini J, Bellocchi MC, Garaci E, Perno CF. Макрофаги и ВИЧ-инфекция: терапевтические подходы к этому стратегическому резервуару вируса. Antiviral Res (2002) 55 (2): 209–25. DOI: 10.1016 / S0166-3542 (02) 00052-9

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    62. Perno CF, Newcomb FM, Davis DA, Aquaro S, Humphrey RW, Caliò R, et al.Относительная эффективность ингибиторов протеазы в моноцитах / макрофагах, остро и хронически инфицированных вирусом иммунодефицита человека. J Infect Dis (1998) 178 (2): 413–22. DOI: 10.1086 / 515642

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    63. Бакстер А.Е., Рассел Р.А., Дункан С.Дж., Мур, доктор медицины, Уилберг С.Б., Паблос Дж. Л. и др. Инфекция макрофагов путем избирательного захвата ВИЧ-1-инфицированных CD4 + Т-клеток. Клеточный микроб-хозяин (2014) 16 (6): 711–21. DOI: 10.1016 / j.chom.2014.10.010

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    64. Eugenin EA, Gaskill PJ, Berman JW. Туннельные нанотрубки (TNT) индуцируются ВИЧ-инфекцией макрофагов: потенциальный механизм межклеточного трафика ВИЧ. Cell Immunol (2009) 254 (2): 142–8. DOI: 10.1016 / j.cellimm.2008.08.005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    65. Sewald X, Ladinsky MS, Uchil PD, Beloor J, Pi R, Herrmann C, et al.Ретровирусы используют CD169-опосредованную транс-инфекцию пермиссивных лимфоцитов для установления инфекции. Наука (2015) 350 (6260): 563–7. DOI: 10.1126 / science.aab2749

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    66. Zhu T, Muthui D, Holte S, Nickle D, Feng F, Brodie S и др. Доказательства репликации вируса иммунодефицита человека типа 1 in vivo в моноцитах CD14 (+) и его потенциальной роли в качестве источника вируса у пациентов, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию. J Virol (2002) 76 (2): 707–16. DOI: 10.1128 / JVI.76.2.707-716.2002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    68. Гарсиа-Теллез Т., Хуот Н., Плокин М.Дж., Расле П., Жаклен Б., Мюллер-Трутвин М. Нечеловеческие приматы в исследованиях ВИЧ: достижения, ограничения и альтернативы. Infect Genet Evol (2016) 46: 324–32. DOI: 10.1016 / j.meegid.2016.07.012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    70. Hong FF, Mellors JW.Влияние антиретровирусной терапии на устойчивость ВИЧ-1: аргументы в пользу раннего начала. AIDS Rev (2015) 17 (2): 71–82.

    Google Scholar

    71. Уитни Дж. Б., Хилл А. Л., Санисетти С., Пеналоза-Макмастер П., Лю Дж., Шетти М. и др. Быстрый посев вирусного резервуара перед вирусом SIV у макак-резусов. Nature (2014) 512 (7512): 74–7. DOI: 10.1038 / природа13594

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    72. Селье П., Манниуи А., Бурри О., Дереуддр-Боске Н., Делаш Б., Брошар П. и др.Время начала антиретровирусной терапии во время первичной инфекции SIV (mac) у макак оказывает различное влияние на раннюю репликацию и распространение вируса. PLoS One (2010) 5 (5): e10570. DOI: 10.1371 / journal.pone.0010570

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    73. Bourry O, Mannioui A, Sellier P, Roucairol C, Durand-Gasselin L, Dereuddre-Bosquet N, et al. Влияние кратковременной ВААРТ на нагрузку SIV в тканях макака зависит от времени начала и антивирусной диффузии. Ретровирология (2010) 7:78. DOI: 10.1186 / 1742-4690-7-78

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    74. Sui Y, Gordon S, Franchini G, Berzofsky JA. Нечеловеческие модели приматов для разработки вакцины против ВИЧ / СПИДа. Curr Protoc Immunol (2013) 102: Unit12.14. DOI: 10.1002 / 0471142735.im1214s102

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    75. Lifson JD, Haigwood NL. Уроки нечеловеческих моделей приматов для исследования вакцины против СПИДа: от минных полей до вех. Cold Spring Harb Perspect Med (2012) 2 (6): a007310. DOI: 10.1101 / cshperspect.a007310

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    76. Баскин Г.Б., Мерфи-Корб М., Уотсон Е.А., Мартин Л.Н. Результаты аутопсии макак-резусов, экспериментально инфицированных культивированным вирусом иммунодефицита обезьян (SIV) / дельта. Vet Pathol (1988) 25 (6): 456–67. DOI: 10.1177 / 030098588802500609

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    77.Henrickson RV, Maul DH, Lerche NW, Osborn KG, Lowenstine LJ, Prahalada S и др. Клинические особенности обезьяньего синдрома приобретенного иммунодефицита (SAIDS) у макак-резусов. Lab Anim Sci (1984) 34 (2): 140–5.

    Google Scholar

    78. Бренчли Дж. М., Шакер Т. В., Рафф Л. Э., Прайс Д. А., Тейлор Дж. Х., Бейлман Дж. Дж. И др. Истощение количества CD4 + Т-лимфоцитов на всех стадиях ВИЧ-инфекции происходит преимущественно в желудочно-кишечном тракте. J Exp Med (2004) 200 (6): 749–59. DOI: 10.1084 / jem.20040874

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    79. Grivel JC, Malkevitch N, Margolis L. Вирус иммунодефицита человека типа 1 индуцирует апоптоз CD4 (+), но не CD8 (+) T-клеток в лимфоидной ткани человека, инфицированной ex vivo. J Virol (2000) 74 (17): 8077–84. DOI: 10.1128 / JVI.74.17.8077-8084.2000

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    80. Пикер Л.Дж., Хаген С.И., Лум Р., Рид-Индербицин Е.Ф., Дейли Л.М., Сильвестер А.В. и др.Недостаточная продукция и доставка в ткани CD4 + Т-клеток памяти при быстро прогрессирующей инфекции вируса иммунодефицита обезьян. J Exp Med (2004) 200 (10): 1299–314. DOI: 10.1084 / jem.20041049

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    81. Хасегава А., Лю Х., Линг Б., Борда Дж. Т., Альварес Х, Сугимото С. и др. Уровень оборота моноцитов позволяет прогнозировать прогрессирование заболевания на модели СПИДа у макак. Кровь (2009) 114 (14): 2917–25. DOI: 10.1182 / кровь-2009-02-204263

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    82. Хуан И, Инь Х, Ван Дж, Ма Х, Чжан И, Чен К. Значительное увеличение FcγRIIIA (CD16), чувствительного маркера, у пациентов с ишемической болезнью сердца. Ген (2012) 504 (2): 284–7. DOI: 10.1016 / j.gene.2012.05.017

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    83. Йошимото С., Накатани К., Ивано М., Асаи О, Самедзима К., Сакан Х. и др. Повышенный уровень экспрессии фракталкина и накопление моноцитов CD16 + в клубочках активного волчаночного нефрита. Am J Kidney Dis (2007) 50 (1): 47–58. DOI: 10.1053 / j.ajkd.2007.04.012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    84. Россол М., Краус С., Пирер М., Бервальд С., Вагнер У. Подмножество моноцитов CD14 (ярких) CD16 + увеличивается при ревматоидном артрите и способствует увеличению популяции клеток Th27. Arthritis Rheum (2012) 64 (3): 671–7. DOI: 10.1002 / art.33418

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    85.Grip O, Bredberg A, Lindgren S, Henriksson G. Увеличение субпопуляций моноцитов крови CD16 (+) и CD56 (+) у пациентов с активной болезнью Крона. Воспаление кишечника. Dis (2007) 13 (5): 566–72. DOI: 10.1002 / ibd.20025

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    86. Камада Н., Хисамацу Т., Окамото С., Чинен Х., Кобаяси Т., Сато Т. и др. Уникальные кишечные макрофаги CD14 вносят вклад в патогенез болезни Крона через ось IL-23 / IFN-гамма. J Clin Invest (2008) 118 (6): 2269–80.DOI: 10.1172 / JCI34610

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    87. Тизен С., Янчаускене С., Уронен-Ханссон Х., Агас В., Хёгеркорп С.М., Спее П. и др. CD14 (hi) HLA-DR (тусклые) макрофаги, похожие на классические моноциты крови, доминируют в воспаленной слизистой оболочке при болезни Крона. J Leukoc Biol (2014) 95 (3): 531–41. DOI: 10.1189 / jlb.0113021

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    88. Бурдо Т.Х., Сулас С., Орзеховски К., Баттон Дж., Кришнан А., Сугимото С. и др.Повышенный обмен моноцитов из костного мозга коррелирует с тяжестью энцефалита SIV и уровнями CD163 в плазме. PLoS Pathog (2010) 6 (4): e1000842. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1000842

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    89. Jellinger KA, Setinek U, Drlicek M, Böhm G, Steurer A, Lintner F. Невропатология и общие данные аутопсии при СПИДе за последние 15 лет. Acta Neuropathol (2000) 100 (2): 213–20. DOI: 10.1007 / s004010000245

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    90.Masliah E, DeTeresa RM, Mallory ME, Hansen LA. Изменения патологических данных при вскрытии трупов больных СПИДом за последние 15 лет. AIDS (2000) 14 (1): 69–74. DOI: 10.1097 / 00002030-200001070-00008

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    91. Цай Й, Сугимото К., Араинга М., Альварес Х, Дидье Е.С., Курода М.Дж. In vivo характеристика альвеолярных и интерстициальных макрофагов легких у макак-резус: значение для понимания болезней легких у людей. J Immunol (2014) 192 (6): 2821–9.DOI: 10.4049 / jimmunol.1302269

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    92. Плата Ф., Отран Б., Мартинс Л.П., Уэйн-Хобсон С., Рафаэль М., Мейо С. и др. Цитотоксические Т-лимфоциты, специфичные для вируса СПИДа, при заболеваниях легких. Nature (1987) 328 (6128): 348–51. DOI: 10.1038 / 328348a0

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    93. Кларк Дж. Р., Кришнан В., Беннет Дж., Митчелл Д., Джеффрис Д. Д.. Обнаружение ВИЧ-1 в макрофагах легких человека с помощью полимеразной цепной реакции. AIDS (1990) 4 (11): 1133–6. DOI: 10.1097 / 00002030-1900-00012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    94. Наката К., Вайден М., Харкин Т., Хо Д., Ром WN. Низкое количество копий и ограниченная вариабельность провирусной ДНК в альвеолярных макрофагах от ВИЧ-1-инфицированных пациентов: доказательства генетических различий в ВИЧ-1 между популяциями макрофагов легких и крови. Mol Med (1995) 1 (7): 744–57.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    95.Левин С.Р., Кирихара Дж., Сонза С., Ирвинг Л., Миллс Дж., Кроу С.М. Концентрации ДНК и мРНК ВИЧ-1 аналогичны в моноцитах периферической крови и альвеолярных макрофагах у ВИЧ-1-инфицированных лиц. AIDS (1998) 12 (7): 719–27. DOI: 10.1097 / 00002030-199807000-00008

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    96. Autran B, Plata F, Guillon JM, Joly P, Mayaud C, Debré P. ВИЧ-специфические цитотоксические Т-лимфоциты, направленные против альвеолярных макрофагов у ВИЧ-инфицированных пациентов. Res Virol (1990) 141 (2): 131–6. DOI: 10.1016 / 0923-2516 (90)

    -A

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    97. Фишер-Смит Т., Кроул С., Адени А., Рыбицка К., Моргелло С., Халили К. и др. Накопление макрофагов / микроглии и экспрессия ядерного антигена пролиферирующих клеток в центральной нервной системе при энцефалопатии вируса иммунодефицита человека. Am J Pathol (2004) 164 (6): 2089–99. DOI: 10.1016 / S0002-9440 (10) 63767-4

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    98.Ким В.К., Альварес X, Фишер Дж., Бронфин Б., Уэстморленд С., Маклаурин Дж. И др. CD163 идентифицирует периваскулярные макрофаги в нормальном и вирусном энцефалитическом мозге и потенциальных предшественников периваскулярных макрофагов в крови. Am J Pathol (2006) 168 (3): 822–34. DOI: 10.2353 / ajpath.2006.050215

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    99. Ноулин Б.Т., Бурдо Т.Х., Мидкифф С.К., Салеми М., Альварес Х, Уильямс К.С.. Поражения SIV-энцефалита состоят из макрофагов CD163 (+), присутствующих в центральной нервной системе во время ранней SIV-инфекции, и SIV-положительных макрофагов, окончательно задействованных при СПИДе. Am J Pathol (2015) 185 (6): 1649–65. DOI: 10.1016 / j.ajpath.2015.01.033

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    100. Палмер А.К., Киркланд JL. Старение и жировая ткань: потенциальные вмешательства для лечения диабета и регенеративной медицины. Exp Gerontol (2016) 86: 97–105. DOI: 10.1016 / j.exger.2016.02.013

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    102. Frasca D, Blomberg BB. Воспаление жировой ткани вызывает воспаление В-клеток и снижает функцию В-клеток при старении. Фронт Иммунол (2017) 8: 1003. DOI: 10.3389 / fimmu.2017.01003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    103. Шикума С.М., Гангкуангко Л.М., Киллебрю Д.А., Либутти Д.Е., Чоу Д.К., Накамото Б.К. и др. Роль ВИЧ и моноцитов / макрофагов в биологии жировой ткани. J Acquir Immune Defic Syndr (2014) 65 (2): 151–9. DOI: 10.1097 / 01.qai.0000435599.27727.6c

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    104.Damouche A, Lazure T, Avettand-Fènoël V, Huot N, Dejucq-Rainsford N, Satie AP и др. Жировая ткань — это забытый вирусный резервуар и очаг воспаления во время хронической ВИЧ-инфекции и инфекции SIV. PLoS Pathog (2015) 11 (9): e1005153. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1005153

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    106. Китагава М., Лакнер А.А., Мартфельд Д.Д., Гарднер МБ, Дандекар С. Инфекция макрофагов костного мозга макак вирусом иммунодефицита обезьян коррелирует с прогрессированием заболевания in vivo. Am J Pathol (1991) 138 (4): 921–30.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    107. Алексаки А., Вигдал Б. Инфекция ВИЧ-1 гемопоэтических клеток-предшественников костного мозга и их роль в транспортировке и распространении вируса. PLoS Pathog (2008) 4 (12): e1000215. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1000215

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    108. Swan ZD, Wonderlich ER, Barratt-Boyes SM. Накопление макрофагов в слизистой оболочке кишечника отличает СПИД от хронической инфекции SIV у макак-резусов. Eur J Immunol (2016) 46 (2): 446–54. DOI: 10.1002 / eji.201545738

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    109. Уильямс Д.В., Энгл Э.Л., Ширк Э.Н., Королева С.Е., Гама Л., Манковски Д.Л. и др. Повреждение селезенки во время инфекции ВИО: роль истощения Т-клеток, поляризации и инфекции макрофагов. Am J Pathol (2016) 186 (8): 2068–87. DOI: 10.1016 / j.ajpath.2016.03.019

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    110.Арайнга М., Эдагва Б., Мосли Р.Л., Полуэктова Л.Ю., Горантла С., Гендельман Х.Э. Зрелый макрофаг является основным клеточным резервуаром ВИЧ-1 у гуманизированных мышей после лечения антиретровирусной терапией длительного действия. Ретровирология (2017) 14 (1): 17. DOI: 10.1186 / s12977-017-0344-7

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    111. Баша С., Сурендран Н., Пичичеро М. Иммунные ответы у новорожденных. Expert Rev Clin Immunol (2014) 10 (9): 1171–84. DOI: 10.1586 / 1744666X.2014.942288

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    113. Палмейра П., Карнейро-Сампайо М. Иммунология грудного молока. Rev Assoc Med Bras (1992) (2016) 62 (6): 584–93. DOI: 10.1590 / 1806-9282.62.06.584

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    114. Тобин Н.Х., Альдрованди Г.М. Иммунология детской ВИЧ-инфекции. Immunol Rev (2013) 254 (1): 143–69. DOI: 10.1111 / imr.12074

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    115.Дей А., Аллен Дж., Хэнки-Гиблин П.А. Онтогенез и поляризация макрофагов при воспалении: моноциты крови против тканевых макрофагов. Front Immunol (2014) 5: 683. DOI: 10.3389 / fimmu.2014.00683

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    116. Ширер В.Т., Розенблатт Х.М., Гельман Р.С., Ойомопито Р., Плегер С., Стихм Э.Р. и др. Субпопуляции лимфоцитов у здоровых детей от рождения до 18 лет: исследование P1009 группы клинических исследований СПИДа у детей. J Allergy Clin Immunol (2003) 112 (5): 973–80.DOI: 10.1016 / j.jaci.2003.07.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    117. Рич К.С., Брамбилла Д., Питт Дж., Мойе Дж., Купер Е., Хиллер Дж. И др. Фенотипирование лимфоцитов у младенцев: созревание субпопуляций лимфоцитов и последствия ВИЧ-инфекции. Clin Immunol Immunopathol (1997) 85 (3): 273–81. DOI: 10.1006 / Clin.1997.4439

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    118. Бундерс MJ, ван дер Лоос CM, Klarenbeek PL, van Hamme JL, Boer K, Wilde JC, et al.Память CD4 (+) CCR5 (+) Т-клетки в большом количестве присутствуют в кишечнике новорожденных, что способствует передаче ВИЧ-1 от матери к ребенку. Кровь (2012) 120 (22): 4383–90. DOI: 10.1182 / кровь-2012-06-437566

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    119. Ньюэлл М.Л., Кувадия Х., Кортина-Борха М., Роллинз Н., Гайяр П., Дабис Ф. и др. Смертность инфицированных и неинфицированных младенцев, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей в Африке: объединенный анализ. Ланцет (2004) 364 (9441): 1236–43.DOI: 10.1016 / S0140-6736 (04) 17140-7

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    120. Гоулдер П.Дж., Левин С.Р., Лейтман Э.М. Детская ВИЧ-инфекция: возможности лечения. Nat Rev Immunol (2016) 16 (4): 259–71. DOI: 10.1038 / нет.2016.19

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    121. Тово П.А., де Мартино М., Габиано К., Каппелло Н., Д’Элия Р., Лой А. и др. Факторы прогноза и выживаемость у детей с перинатальной инфекцией ВИЧ-1. Итальянский регистр ВИЧ-инфекций у детей. Lancet (1992) 339 (8804): 1249–53. DOI: 10.1016 / 0140-6736 (92) -V

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    122. Макинтош К., Шевиц А., Закнун Д., Корнегай Дж., Чатис П., Картас Н. и др. Возрастные и временные изменения внеклеточной вирусной нагрузки у детей, вертикально инфицированных вирусом иммунодефицита человека. Pediatr Infect Dis J (1996) 15 (12): 1087–91. DOI: 10.1097 / 00006454-199612000-00006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    124.Милуш Дж. М., Ривз Дж. Д., Гордон С. Н., Чжоу Д., Мутукумар А., Косуб Д. А. и др. Вирусно-индуцированное истощение CD4 + Т-клеток недостаточно для индукции СПИДа у естественного хозяина. J Immunol (2007) 179 (5): 3047–56. DOI: 10.4049 / jimmunol.179.5.3047

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    125. Визи Р.С., Лифсон Дж. Д., Пандреа И., Перселл Дж., Пятак М-младший, Лакнер А.А. Инфекция вируса обезьяньего иммунодефицита у новорожденных макак. J Virol (2003) 77 (16): 8783–92.DOI: 10.1128 / JVI.77.16.8783-8792.2003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    126. Ван X, Xu H, Pahar B, Alvarez X, Green LC, Dufour J, et al. Вирус обезьяньего иммунодефицита избирательно инфицирует пролиферирующие CD4 + Т-клетки у новорожденных макак-резус. Кровь (2010) 116 (20): 4168–74. DOI: 10.1182 / кровь-2010-03-273482

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    127. Torow N, Yu K, Hassani K, Freitag J, Schulz O, Basic M, et al.Активное подавление созревания CD4 (+) TCRalphabeta (+) T-лимфоцитов в кишечнике в послеродовой период. Нац Коммун (2015) 6: 7725. DOI: 10.1038 / ncomms8725

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    128. Том Дж. Дж., Бикхэм К. Л., Омура Ю., Кубота М., Мацуока Н., Гордон С. и др. Компартментализация дифференцировки и регуляторной функции Т-клеток человека в слизистой и лимфоидной тканях в раннем возрасте. Nat Med (2016) 22 (1): 72–7. DOI: 10,1038 / нм 4008

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    129.D’Arena G, Musto P, Cascavilla N, Di Giorgio G, Fusilli S, Zendoli F и др. Проточно-цитометрическая характеристика лимфоцитов пуповинной крови человека: иммунофенотипические особенности. Haematologica (1998) 83 (3): 197–203.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    130. Peoples JD, Cheung S, Nesin M, Lin H, Tatad AM, Hoang D, et al. Субпопуляции пуповинной крови новорожденных и цитокиновый ответ на бактериальные антигены. Am J Perinatol (2009) 26 (9): 647–57. DOI: 10.1055 / с-0029-1220788

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    131.Waecker NJ Jr, Ascher DP, Robb ML, Moriarty R, Krober M, Rickman WJ, et al. Параметры лимфоцитов CD4 + с поправкой на возраст у здоровых детей из группы риска заражения вирусом иммунодефицита человека. Военный педиатрический консорциум по ВИЧ. Clin Infect Dis (1993) 17 (1): 123–5. DOI: 10.1093 / Clinids / 17.1.123

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    132. Геснер М., Папаевангелу В., Ким М., Чен Ш., Мур Т., Красински К. и др. Изменение доли CD4 T-лимфоцитов в подгруппе детей, подвергшихся воздействию вируса иммунодефицита человека, не инфицированных. Педиатрия (1994) 93 (4): 624–30.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    133. Возрастные стандарты для субпопуляций Т-лимфоцитов, основанные на неинфицированных детях, рожденных женщинами, инфицированными вирусом иммунодефицита человека 1. Европейское совместное исследование. Pediatr Infect Dis J (1992) 11 (12): 1018–26. DOI: 10.1097 / 00006454-199211120-00006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    134. Плегер-Маршалл С., Халтин П., Бертолли Дж., О’Рурк С., Кобаяши Р., Кобаяши А.Л. и др.Антигены активации и дифференцировки на Т-лимфоцитах здоровых детей из группы риска и ВИЧ-инфицированных. J Acquir Immune Defic Syndr (1993) 6 (9): 984–93.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    135. Сугимото С., Мерино К.М., Хасегава А., Ван X, Альварес XA, Вакао Х. и др. Важнейшая роль моноцитов / макрофагов в быстром прогрессировании СПИДа у педиатрических макак-резус, инфицированных вирусом иммунодефицита человека. J Virol (2017) 91 (22): e01346-17. DOI: 10.1128 / JVI.01346-17

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    136.Берл С., Тауненд Дж., Нджи-Джобе Дж., Кокс М., Адетифа У. Дж., Турей Э. и др. Зависимое от возраста созревание цитокиновых ответов, опосредованных Toll-подобным рецептором, у младенцев из Гамбии. PLoS One (2011) 6 (4): e18185. DOI: 10.1371 / journal.pone.0018185

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    137. Асквит М., Хабертур К., Браун М., Энгельманн Ф., Мерфи А., Аль-Махди З. и др. Возрастные изменения фенотипа и функции врожденного иммунитета у макак резус (Macaca mulatta). Pathobiol Aging Age Relat Dis (2012) 2. doi: 10.3402 / pba.v2i0.18052

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    138. Ле Гарф-Тавернье М., Безиат В., Декок Дж., Сигуре В., Ганджбахч Ф., Паутас Е. и др. NK-клетки человека демонстрируют основные фенотипические и функциональные изменения на протяжении жизни. Ячейка старения (2010) 9 (4): 527–35. DOI: 10.1111 / j.1474-9726.2010.00584.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    141. Лусяти С., Хулзебос К.В., Зандвоорт Дж., Зауэр П.Дж.Уровни 25 цитокинов в первые семь дней жизни новорожденных. BMC Res Notes (2013) 6: 547. DOI: 10.1186 / 1756-0500-6-547

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    144. Де Росси А. Вирусологический и иммунологический ответ на антиретровирусную терапию у ВИЧ-1 инфицированных детей: генотипические и фенотипические анализы в мониторинге вирусологической неудачи. New Microbiol (2004) 27 (2 Suppl 1): 45–50.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    145.Пейнтсил Э. Мониторинг антиретровирусной терапии ВИЧ-инфицированных детей в странах с ограниченными ресурсами: история двух эпидемий. AIDS Res Treat (2011) 2011: 280901. DOI: 10.1155 / 2011/280901

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    146. ван Россум AM, Fraaij PL, de Groot R. Эффективность высокоактивной антиретровирусной терапии у детей, инфицированных ВИЧ-1. Lancet Infect Dis (2002) 2 (2): 93–102. DOI: 10.1016 / S1473-3099 (02) 00183-4

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    147.Ван Ромпей К.К., Мэтьюз Т.Б., Хиггинс Дж., Кэнфилд Д.Р., Тарара Р.П., Вайнберг М.А. и др. Вирулентность и снижение приспособленности вируса иммунодефицита обезьян к мутации M184V в обратной транскриптазе. J Virol (2002) 76 (12): 6083–92. DOI: 10.1128 / JVI.76.12.6083-6092.2002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Моноциты дромадера CD14 с высоким содержанием MHCII с высоким содержанием MHCII проявляют воспалительные свойства и их количество у новорожденных телят верблюдов снижено | BMC Veterinary Research

    • 1.

      Jakubzick CV, Randolph GJ, Henson PM. Дифференцировка моноцитов и антигенпрезентирующие функции. Nat Rev Immunol. 2017; 17 (6): 349–62.

      CAS Статья Google Scholar

    • 2.

      Auffray C, Fogg D, Garfa M, Elain G, Join-Lambert O, Kayal S, Sarnacki S, Cumano A, Lauvau G, Geissmann F. Мониторинг кровеносных сосудов и тканей популяцией моноцитов с патрульное поведение. Наука. 2007. 317 (5838): 666–70.

      CAS Статья Google Scholar

    • 3.

      Ziegler-Heitbrock HW. Определение моноцитов крови человека. J Leukoc Biol. 2000. 67 (5): 603–6.

      CAS Статья Google Scholar

    • 4.

      Gordon S, Taylor PR. Гетерогенность моноцитов и макрофагов. Nat Rev Immunol. 2005. 5 (12): 953–64.

      CAS Статья Google Scholar

    • 5.

      Ингерсолл М.А., Спанбрук Р., Лоттаз С., Готье Е.Л., Франкенбергер М., Хоффманн Р., Ланг Р., Ханиффа М., Коллин М., Таке Ф. и др.Сравнение профилей экспрессии генов между субпопуляциями моноцитов человека и мыши. Кровь. 2010; 115 (3): e10–9.

      CAS Статья Google Scholar

    • 6.

      Hussen J, Duvel A, Sandra O, Smith D, Sheldon IM, Zieger P, Schuberth HJ. Фенотипическая и функциональная гетерогенность моноцитов крови крупного рогатого скота. PLoS One. 2013; 8 (8): e71502.

      CAS Статья Google Scholar

    • 7.

      Hussen J, Schuberth HJ. Неоднородность моноцитов периферической крови крупного рогатого скота. Фронт Иммунол. 2017; 8: 1875.

      Артикул Google Scholar

    • 8.

      Коррипио-Мияр Ю., Хоуп Дж., Макиннес К.Дж., Ваттегедера С.Р., Дженсен К., Панг И., Энтрикан Дж., Гласс Э.Дж. Фенотипический и функциональный анализ популяций моноцитов периферической крови крупного рогатого скота позволяет идентифицировать субпопуляцию с высокой способностью к стимуляции эндоцитозных и аллогенных Т-клеток. Vet Res. 2015; 46: 112.

      Артикул Google Scholar

    • 9.

      Fairbairn L, Kapetanovic R, Beraldi D, Sester DP, Tuggle CK, Archibald AL, Hume DA. Сравнительный анализ субпопуляций моноцитов у свиньи. J Immunol. 2013. 190 (12): 6389–96.

      CAS Статья Google Scholar

    • 10.

      Гиббонс Н., Гуларт М.Р., Чанг Ю.М., Эфстатиу К., Перселл Р., Ву И., Петерс Л.М., Турмейн М., Шладовиц Б., Гарден О.А.Фенотипическая гетерогенность периферических моноцитов у здоровых собак. Vet Immunol Immunopathol. 2017; 190: 26–30.

      CAS Статья Google Scholar

    • 11.

      Ziegler-Heitbrock L. Субпопуляции моноцитов у человека и других видов. Cell Immunol. 2014. 289 (1–2): 135–9.

      CAS Статья Google Scholar

    • 12.

      Циглер-Хайтброк Л., Анкута П., Кроу С., Далод М., Грау В., Харт Д. Н., Линен П. Дж., Лю Ю. Дж., Макферсон Г., Рэндольф Г. Дж. И др.Номенклатура моноцитов и дендритных клеток крови. Кровь. 2010; 116 (16): e74–80.

      CAS Статья Google Scholar

    • 13.

      Завада А.М., Рогачев К.С., Ширмер С.Х., Сестер М., Бом М., Флисер Д., Хайне Г.Х. Гетерогенность моноцитов при сердечно-сосудистых заболеваниях человека. Иммунобиология. 2012.

    • 14.

      Moreno S, Alvarez B, Poderoso T., Revilla C., Ezquerra A, Alonso F, Dominguez J. Субпопуляции моноцитов свиней различаются по экспрессии CCR2 и их чувствительности к CCL2.Vet Res. 2010; 41 (5): 76.

      Артикул Google Scholar

    • 15.

      Циглер-Хайтброк Л. Перепечатка: субпопуляции моноцитов человека и других видов. Cell Immunol. 2014; 291 (1–2): 11–5.

      CAS Статья Google Scholar

    • 16.

      Крос Дж., Кагнард Н., Вуллард К., Пейти Н., Чжан С.Ю., Сенешал Б., Пуэль А., Бисвас С.К., Мошоус Д., Пикард С. и др. Моноциты CD14dim человека патрулируют и воспринимают нуклеиновые кислоты и вирусы через рецепторы TLR7 и TLR8.Иммунитет. 2010. 33 (3): 375–86.

      CAS Статья Google Scholar

    • 17.

      Pomeroy B, Sipka A, Hussen J, Eger M, Schukken Y, Schuberth HJ. Подсчет субпопуляций моноцитов крупного рогатого скота до отела позволяет прогнозировать послеродовое возникновение мастита и метрита. Vet Res. 2017; 48 (1): 13.

      Артикул Google Scholar

    • 18.

      Wong KL, Yeap WH, Tai JJ, Ong SM, Dang TM, Wong SC.Три подгруппы человеческих моноцитов: последствия для здоровья и болезней. Immunol Res. 2012. 53 (1–3): 41–57.

      CAS Статья Google Scholar

    • 19.

      Стэнсфилд Б.К., Инграм Д.А. Клиническое значение неоднородности моноцитов. Clin Transl Med. 2015; 4: 5.

      Артикул Google Scholar

    • 20.

      Хуссен Дж., Шаваф Т., Аль-Херц А.И., Альтураифи Х.Р., Аллувайми А.М. Реактивность коммерчески доступных моноклональных антител к антигенам CD человека с лейкоцитами периферической крови верблюдов-верблюдов (Camelus dromedarius).Open Vet J. 2017; 7 (2): 150–3.

      Артикул Google Scholar

    • 21.

      Чаморро С., Ревилла С., Альварес Б., Алонсо Ф., Эскерра А., Домингес Дж. Фенотипическая и функциональная гетерогенность моноцитов свиной крови и ее связь с созреванием. Иммунология. 2005. 114 (1): 63–71.

      CAS Статья Google Scholar

    • 22.

      Гибсон А., Миа С., Грибель П., Браунли Дж., Верлинг Д.Идентификация популяции отрицательных клонов клеток в периферической крови крупного рогатого скота с возможностью создания сильного интерферонового ответа типа I. Dev Comp Immunol. 2012. 36 (2): 332–41.

      CAS Статья Google Scholar

    • 23.

      Саммерфилд А., Гузилак-Пириу Л., Шауб А., Карраско С. П., Таш В., Чарли Б., Маккалоу К. С.. Дендритные клетки периферической крови свиней и естественные клетки, продуцирующие интерферон. Иммунология. 2003. 110 (4): 440–9.

      CAS Статья Google Scholar

    • 24.

      Auffray C, Sieweke MH, Geissmann F. Моноциты крови: развитие, гетерогенность и взаимосвязь с дендритными клетками. Анну Рев Иммунол. 2009; 27: 669–92.

      CAS Статья Google Scholar

    • 25.

      Hussen J, Koy M, Petzl W, Schuberth HJ. Дегрануляция нейтрофилов по-разному модулирует фенотип и функцию субпопуляций моноцитов крупного рогатого скота.Врожденный иммунитет. 2016; 22 (2): 124–37.

      CAS Статья Google Scholar

    • 26.

      Филбин В.Дж., Леви О. Биология развития врожденного иммунного ответа: значение для разработки вакцин для новорожденных и младенцев. Pediatr Res. 2009; 65 (5 Pt 2): 98R – 105R.

      Артикул Google Scholar

    • 27.

      Эгер М., Хуссен Дж., Дронг К., Мейер Ю., фон Сустен Д., Фрам Дж., Денике С., Бревес Дж., Шуберт Х. Дж..Влияние родов и оценки физического состояния на способность поглощать глюкозу субпопуляциями моноцитов крупного рогатого скота. Vet Immunol Immunopathol. 2015; 166 (1–2): 33–42.

      CAS Статья Google Scholar

    • 28.

      Хуссен Х.И., Перссон М., Моради Т. Тенденции и риск диабета 1 типа за последние 40 лет: анализ по когортам рождения и по происхождению миграции родителей в Швеции. BMJ Open. 2013; 3 (10): e003418.

      Артикул Google Scholar

    Молекулярная характеристика и улучшение условий культивирования для улучшения свойств стволовых клеток и пролиферативного потенциала

    Взрослые стволовые или программируемые клетки имеют большие перспективы при заболеваниях, при которых необходимо заменить поврежденные или нефункциональные клетки.Недавно мы продемонстрировали, что моноциты периферической крови могут быть дифференцированы in vitro в клетки, напоминающие специализированные типы клеток, такие как гепатоциты и бета-клетки поджелудочной железы. Во время фенотипической конверсии моноциты подавляют маркеры дифференцировки моноцитов / макрофагов, что указывает на частичную дедифференцировку, и частично перепрограммируются для достижения состояния пластичности наряду с экспрессией различных маркеров плюрипотентности и возобновления митоза. Было показано, что повышающая регуляция маркеров стволовых клеток и митотическая активность в культурах контролируется аутокринной продукцией / секрецией активина А и трансформирующего фактора роста-бета (TGF- β ).Эти перепрограммированные производные моноцитов были названы «программируемыми клетками моноцитарного происхождения» (PCMO). Текущие усилия сосредоточены на создании условий культивирования, которые увеличивают как пластичность, так и потенциал пролиферации PCMO, чтобы иметь возможность генерировать большие количества клеток крови, подходящих как для аутологичной, так и для аллогенной терапии.

    1. Введение

    Взрослые стволовые или программируемые клетки представляют собой многообещающую альтернативу эмбриональным стволовым клеткам в регенеративной медицине и тканевой инженерии [1].Хотя моноциты не считаются классическими взрослыми стволовыми клетками, они, как было показано, способны приобретать свойства, подобные стволовым клеткам [2–5]. Моноциты периферической крови имеют некоторые практические преимущества перед другими типами взрослых стволовых клеток / клеток-предшественников, когда они используются в клинических целях: (1) они могут быть извлечены из легкодоступного участка тела с помощью малоинвазивной процедуры или образуются как отходы в сдача крови; (2) их легко поддерживать в культуре; (3) они имеют низкий риск канцерогенности из-за их ограниченной пролиферативной способности и отсутствия теломеразы обратной транскриптазы (hTERT) [6]; (4) они могут применяться к пациентам как в аутологичных, так и в аллогенных условиях, устраняя необходимость в иммуносупрессии.В противном случае аутологичный клеточный материал для трансплантации может быть получен только из популяций взрослых стволовых клеток, таких как стволовые клетки, полученные из костного мозга, или из человеческих эмбриональных стволовых клеток, полученных путем переноса ядра соматических клеток, или из клеток с индуцированной плюрипотентностью (iPS). Однако все эти потенциальные источники клеток страдают биологическими, экономическими и / или этическими недостатками [7].

    Серьезными недостатками использования моноцитов являются их ограниченное количество в кровотоке и низкий потенциал пролиферации in vitro .Для целей трансплантации необходимо увеличить выход клеток на при экспансии in vitro. Другим препятствием является различный потенциал дифференцировки моноцитов в специализированные типы клеток, который в значительной степени зависит от донора. Чтобы быть клинически значимыми, условия должны быть оптимизированы для производства большого количества клеток от одного донора. Следовательно, основная цель состоит в том, чтобы повысить потенциал пролиферации клеток во время культивирования, в то же время поддерживая или даже улучшая их потенциал дифференцировки в направлении желаемого типа клеток.В ходе этой статьи мы даем обзор молекулярных событий во время фазы дедифференцировки, например, когда клетки приобретают свои характеристики, подобные стволовым клеткам, а затем обсуждаем различные стратегии, которые показали перспективу увеличения числа клеток в течение 90–325 лет. in vitro культура .

    2. Фенотипическая и функциональная гетерогенность макрофагов и пластичность моноцитов

    Циркулирующие моноциты — это очень универсальные клетки-предшественники, которые дают начало различным типам клеток.Он генерируется из гемопоэтических стволовых клеток через общий миелоидный предшественник (CMP) и предшественник гранулоцитов / моноцитов, который представляет популяции предшественников монобластов. Монобласты — это самая ранняя форма, которая превращается в моноциты, и их потомство эмигрирует из костного мозга в периферическую кровь. Когда моноциты периферической крови не задействованы в воспалительных поражениях, они способны подвергаться созреванию в несколько типов тканевых макрофагов (см. Обзор [8]), таких как макрофаги покоящейся ткани, клетки Купфера, клетки Лангерганса кожи, дендритные клетки, микроглия и т. Д. остеокласты и эндотелиальные клетки.При соответствующей стимуляции моноциты будут мигрировать к участкам воспаления и экстравазироваться из кровотока в ткани, приобретая характеристики активированного макрофага с воспалительным фенотипом. При остром воспалительном ответе это обычно влечет за собой выработку воспалительных цитокинов, антимикробных окислительных радикалов, протеиназ, очищающих ткани, и повышенную фагоцитарную активность. Как только рана очищается от воспалительного мусора, макрофаги вносят вклад в процесс рассасывания раны, способствуя ангиогенезу, производству матрикса и пролиферации клеток.Этот функциональный переход к альтернативно активированному, противовоспалительному и стимулирующему регенерацию фенотипу, по-видимому, инициируется фагоцитозом апоптотических клеток и регулируется множеством тканевых цитокинов, гормонов и метаболитов [9]. В некоторых карциномах макрофаги могут быть задействованы в этой ткани для принятия определенного фенотипа, который в конечном итоге способствует прогрессированию опухоли. Эти ассоциированные с опухолью макрофаги (ТАМ) хронически поляризованы, чтобы проявлять активность, которая поддерживает рост опухоли и метастазирование, подавляет адаптивные иммунные ответы и, следовательно, напоминает альтернативно активированный тип [9].Как создается функциональная пластичность моноцитов / макрофагов, в настоящее время является предметом дискуссий [9].

    Функциональная гетерогенность макрофагов может зависеть от дифференциации функциональных подлиний, или, альтернативно, макрофаги являются функционально пластичными клетками, которые способны постепенно изменять свою функциональную активность в ответ на изменение сигналов, генерируемых в их микроокружении (гипотеза функциональной пластичности). Функциональная пластичность и регенеративный потенциал моноцитов / макрофагов могут быть намного выше, чем предполагалось ранее.Некоторые культивируемые популяции человеческих клеток, происходящие из циркулирующих моноцитов, обладают способностью дифференцироваться в нефагоцитарные плюрипотентные стволовые клетки, подобные клеткам, таким как плюрипотентные стволовые клетки (PSC) [2], MOMC [3, 5], подмножество CD14 + KDR + [10], и PCMO [4, 11, 12].

    3. Дифференциальный потенциал PCMO и молекулярные доказательства для моноцитов как потенциальных стволовых клеток

    Недавно мы разработали протокол для индуцирования из моноцитов культурой in vitro , по-видимому, более пластичного производного, которое мы назвали «программируемыми клетками моноцитов». происхождение »(PCMO).Эти клетки после 4-6-дневной обработки макрофагальным колониестимулирующим фактором (M-CSF), интерлейкином-3 (IL-3) и сывороткой человека были чувствительны после воздействия соответствующей индукционной среды, чтобы дифференцироваться в клетки с эндотелиальными характеристиками. хондроциты и остеобласты / остеоциты (рукопись в стадии подготовки). Исследование Yang и соавторов предположило, что in situ остеогенная дифференцировка и образование костей трансплантированными человеческими PBMNCs [13]. Ранее мы также показали, что PCMO, генерируемый из периферической крови человека или из крови или селезенки нечеловеческих приматов, может превращаться в клетки, продуцирующие инсулин [4].Однако наше внимание было сосредоточено на гепатоцитоподобных клетках, происходящих из PCMO (так называемые NeoHepatocytes), которые экспрессируют различные маркеры гепатоцитов и проявляют специфичные для гепатоцитов метаболические функции in vitro и in vivo [4, 11]. Интересно, что NeoHepatocytes смогли улучшить выживаемость на крысиной модели острой печеночной недостаточности [14], а полученные из моноцитов гепатоцитоподобные клетки даже показали перспективу в лечении декомпенсированного цирроза печени, связанного с HBV [15]. Более общая потеря фенотипа моноцитов / макрофагов, таким образом, будет в пользу процесса дедифференцировки и будет поддерживать наше утверждение, что PCMO представляют собой клетки, которые вернулись к более примитивному предшественнику с менее ограниченным потенциалом дифференцировки.В соответствии с этим было обнаружено, что в ответ на специфические условия культивирования моноциты подавляют гены монопоэтических маркеров PRDMI и ICSBP при сохранении экспрессии клон-специфичных факторов транскрипции PU.1 [4]. Еще более информативным оказался образец Krüppel-подобного фактора 4 (Klf4), ядерного фактора дифференцировки моноцитов-макрофагов, который экспрессируется в ограниченном моноцитами и специфичном для стадии паттерне во время миелопоэза и способствует воспалительной дифференцировке моноцитов [16]. Klf4 быстро подавлялся после воздействия на моноциты условий культивирования PCMO, и уровни транскриптов оставались низкими до дня 6, после чего они становились неопределяемыми. Другие маркеры, связанные со специализированными функциями, например, те, которые участвуют в обнаружении и уничтожении вторгшихся микроорганизмов, таких как CD14, толл-подобные рецепторы (TLR 2, 4, 7 и 9) и две субъединицы реактивного фермента, продуцирующего кислород, NAD ( P) H-оксидаза (Nox4 и), соответственно, подавлялась, хотя и с другой кинетикой [6].Экспрессия TLR и Nox4 была резко снижена на уровне транскрипции на 6-й день культивирования, в то время как экспрессия оставалась неизменной на уровне мРНК, но, по-видимому, снижалась на уровне белка, начиная со 2-го дня в среде PCMO [6]. Список маркеров, которые подвергаются понижающей регуляции во время конверсии моноцитов в PCMO, представлен в таблице 1.

    MI A изоформа) Пониженные гены Активируемые гены ICSBP NANOG KLF4 Myc CD14 TLRs (216 916 935 935 916 916 916 916 935 935 916 916 916 916 935 935 916 p47

    3.1. Экспрессия и реактивация маркеров плюрипотентности во время генерации PCMO

    Несмотря на хорошо задокументированный широкий потенциал дифференцировки моноцитов, на удивление мало известно о механизмах, которые позволяют им поддерживать состояние незафиксированного предшественника. Поэтому мы задались вопросом, действуют ли механизмы, лежащие в основе фенотипической пластичности ESCs, в PCMO. В этом отношении мы предоставили доказательства на уровне мРНК и белка, что PCMO имеет несколько общих маркеров ESCs, таких как OCT4 (также называемый POU5f, включая OCT4A, изоформу, связанную с плюрипотентностью) и NANOG [6].Оба белка могут функционировать как активаторы генов самообновления и плюрипотентности и как репрессоры генов коммитирования клонов. Интересно, что эндогенные гены OCT4 и NANOG , по-видимому, реактивируются, и кинетика хорошо согласуется с зависимым от времени паттерном чувствительности к дифференцировке гепатоцитов [6]. Другие гены, участвующие в поддержании самообновления и плюрипотентности и экспрессируемые в PCMO, включают фактор роста и дифференцировки 3 ( GDF3 ), DPPA3 / STELLA / PGC7 , ABCG2 Conne , , NCAM , DNMT3b , UTF , BMP2 , CRIPTO / TDGF1 , E-CADHERIN и CD105 .Другие гены, такие как SOX2 , GABRB3 , NODAL , LEFTY B и hTERT , были отрицательными в PCMO. Данные показывают, что критические регуляторы плюрипотентности (например, OCT4 и NANOG) и, возможно, другие факторы сети плюрипотентности, такие как Myc (см. Таблицу 1), повторно активируются в PCMO и, вероятно, контролируют их пластическое поведение. Действительно, PCMO, по-видимому, в некоторых аспектах напоминает частично перепрограммированные клеточные линии [17] в том, что они реактивируют гены, связанные с обновлением и поддержанием стволовых клеток (например,g., MYC ) и плюрипотентность ( OCT4 , NANOG ). Эти результаты показывают, что в среде с подходящим фактором роста циркулирующие моноциты могут, по крайней мере частично, быть перепрограммированы без экзогенного введения факторов плюрипотентности.

    3.2. TGF-

    β / передача сигналов активина и усиление экспрессии маркера плюрипотентности

    В ES-клетках поддержание недифференцированной стадии и выход из нее в первую очередь контролируются членами семейства факторов роста TGF- β / активин посредством регуляции ассоциированные с плюрипотентностью факторы транскрипции OCT4 и NANOG [18, 19].Имеются также доказательства роли факторов, связанных с TGF- β / активином, в регуляции стволовости моноцитов / PCMO. Недавно мы показали, что TGF- β и его рецепторы, рецептор TGF- β типа II и активин-рецептор-подобная киназа 5 (ALK5) экспрессируются в PCMO. Более того, мы обнаружили, что TGF- β секретируется PCMO в культуральный супернатант, как определено с помощью ELISA, при этом уровни TGF- β -1 снижаются во время превращения моноцитов в PCMO. Напротив, уровни активина А (гомодимера) в культуральных супернатантах увеличивались на до 4-го дня культивирования.Интересно, что PCMO экспрессируют не только лиганд активина А, но также рецепторы ActRIIA и ALK4, оба из которых были активированы до 4 дня культивирования, что указывает на повышенную чувствительность клеток к (аутокринной) стимуляции активином. Взаимная аутокринная передача сигналов с помощью TGF-, β и активина в культурах была подтверждена демонстрацией того, что C-концевое фосфорилирование / активация Smad3, первичной мишени ALK5, снижалось до 4-го дня культивирования, в то время как активация Smad2, первичной мишени ALK4 вырос за тот же период.Мы подтвердили чувствительность PCMO к передаче сигналов активина, показав, что рекомбинантные активины (A, B и AB) индуцируют C-концевое фосфорилирование Smad2, но не Smad3.

    3.3. Эпигенетические изменения во время генерации PCMO

    Метилирование гистонов играет решающую роль в эпигенетической регуляции экспрессии генов во время развития млекопитающих. В общем, транскрибируемые гены связаны с триметилированием по Lys-4 гистона h4 (me-h4 (K4)) [20], тогда как многие молчащие гены связаны с триметилированием h4 (K27) [21].Интересно, что индукция как NANOG , так и OCT4 совпадала с временными изменениями в модификациях гистонов, указывающими на транскрипционную (ре) активацию [6]. В недифференцированных клетках промотор OCT4 упакован нуклеосомами, которые содержат маркеры активного хроматина, а именно гистон h4, высоко ацетилированный по Lys-9 и Lys-14, и me-h4 (K4) [22]. Мы отметили кратковременный рост глобального me-h4 (K4) в культурах PCMO, который точно отражает динамику транскрипционной активности OCT4 .Метилирование промотора OCT4 оставалось высоким на различных стадиях генерации PCMO, что было выявлено преобразованием бисульфита и пиросеквенированием на специфических островках CpG в дистальном энхансере OCT4 [6], предполагая, что деметилирование промотора не было основным механизмом . OCT4 индукционный. Предварительные данные показывают, что обработка ПКМО 5-азацитидином может повысить их пластичность. В настоящее время мы изучаем, отражается ли это также на повышении активности генов, определяющих плюрипотентность.

    4. Условия культивирования, благоприятствующие свойствам стволовых клеток моноцитов

    В настоящее время мы реализуем три стратегии для усиления характера стволовых клеток PCMO, исходя из предположения, что предшественник, более похожий на стволовые клетки, будет влиять на фенотип желаемого типа дифференцированных клеток: (1) избегание стимулов активации / дифференцировки (провоспалительных агентов и бактериальных компонентов), которые могут препятствовать надлежащей дедифференцировке моноцитов, (2) сравнение пластичности PCMO и пролиферативной активности PCMO в условиях приостановленного и прикрепленного роста и (3) усиление PCMO Экспрессия маркера пластичности / плюрипотентности путем модуляции активина и передачи сигналов TGF- β .

    4.1. Избегание стимулов активации / дифференцировки, которые могут предотвратить правильную дифференцировку моноцитов

    Чтобы предотвратить активацию провоспалительных макрофагов, кажется обязательным истощить среду клеток любыми потенциальными провоспалительными агентами, бактериальными компонентами или чужеродными антигенами, вызывающими активацию моноциты в процессе иммунной реакции. Наши данные ясно демонстрируют, что использование аутологичной сыворотки снижает начальную активацию макрофагов в культурах PCMO и впоследствии улучшает как выход, так и функцию дифференцированных неоГепатоцитов.Аутологический подход также может быть полезен в других процессах получения стволовых клеток, где активация клеток во время генерации должна быть сведена к минимуму.

    4.2. Сравнение PCMO пластичности PCMO в условиях приостановленного и прикрепленного роста

    Адгезия первичных моноцитов периферической крови имеет важное значение для дифференцировки в макрофаги. С другой стороны, развитие PCMO должно сопровождаться поддержанием состояния дифференциации de . Чтобы сохранить клетки в дифференцированном состоянии de , теоретически логично культивировать их в суспензии, чтобы предотвратить дифференцировку в макрофаги.Переход от приостановленного к адгезивному росту, который был связан с изменениями в морфологии клеток [4], также затронул белки, участвующие в клеточной адгезии и регуляции цитоскелета, такие как β, -актин и E-кадгерин (которые все увеличились) в течение 4–6 лет. -дневный культурный период [6]. Вместе эти данные предполагают, что моноциты во время их превращения в PCMO претерпевают частичную дифференцировку de . Экспрессия маркерных генов стволовых клеток OCT4 и NANOG была выше в адгезивных клетках, чем в суспендированных клетках.

    Сравнение полученных дифференцированных NeoHepatocytes, происходящих из прикрепленных и суспендированных PCMO, дало смешанные результаты. Клетки в суспензии приводили к образованию неоГепатоцитов с более высокими уровнями CYP1A1 / 2, CYP2D6 и UDPG и более высоким метаболизмом мочевины, в то время как прикрепленные PCMO приводили к образованию неоГепатоцитов с более высоким уровнем SRB-1 и метаболизмом глюкозы. Эти специфичные для гепатоцитов анализы могут указывать на независимую регуляцию пластичности и пролиферации PCMO.

    4.3. Повышение экспрессии маркера пластичности / плюрипотентности PCMO за счет модуляции активина и передачи сигналов TGF-

    β

    Недавно мы показали, что во время генерации PCMO экспрессия маркера плюрипотентности контролируется положительно активином / Smad2 и отрицательно сигналом TGF- β / Smad3. .В частности, ингибирование передачи сигналов аутокринного активина активин-связывающим белком фоллистатином снижает как активацию Smad2, так и активацию OCT4A / NANOG. Можно сделать вывод, что обработка PCMO активином (ами) может усилить экспрессию и плюрипотентность OCT4A / NANOG. Напротив, ингибирование аутокринной передачи сигналов TGF- β антителом против TGF- β снижает активацию Smad3 и умеренно усиливает экспрессию OCT4A / NANOG, что является аргументом в пользу ингибирования TGF- β в качестве дополнительной или комплементарной стратегии увеличения стволовости PCMO.Для этой цели доступны несколько ингибиторов пути TGF- β (которые не должны перекрестно ингибировать передачу сигналов активина, такие как обычно используемый низкомолекулярный ингибитор ALK4 / 5 SB431542) [23].

    5. Стратегии увеличения потенциала распространения PCMO

    Как упоминалось выше, условия расширения и дифференциации должны быть оптимизированы для производства больших количеств PCMO от одного донора. Ранее мы показали, что моноциты возобновляют пролиферацию в условиях культивирования PCMO [6]; однако процент клеток, которые повторно вошли в митоз, был все еще низким.Помимо использования аутологичной сыворотки, которая улучшила выход дифференцированных неогепатоцитов за счет увеличения числа клеток на стадии PCMO [24], в настоящее время мы применяем три другие стратегии для достижения этого: (1) усиление пролиферации после культивирования адгезии, (2) совместное культивирование PCMO с лимфоцитами и (3) добавление митогенных факторов роста.

    5.1. Сравнение пролиферации PCMO в условиях приостановленного и прикрепленного роста

    Мы сравнили пролиферативную активность PCMO, культивируемого в суспензии , с соблюдением режима .Пролиферацию изучали с помощью иммунофлуоресценции Ki67, которая знаменует переход от G1- к S-фазе в клеточном цикле. В отличие от наших ожиданий, данные показали, что пролиферация PCMO была на выше в адгезивно растущих культурах, чем в суспендированных культурах, о чем свидетельствует появление субпопуляции Ki67-положительных моноцитов и подавление [25].

    5.2. Усиление пролиферации после совместного культивирования PCMO с аутологичными лимфоцитами

    Конечная цель состоит в повышении потенциала пролиферации клеток во время культивирования PCMO без ухудшения их потенциала дифференцировки и в дальнейшем увеличении потенциала дифференцировки без ущерба для их пролиферативной активности.Мы наблюдали, что пролиферация PCMO была намного выше в смешанных культурах (PBMC, «загрязненных» аутологичными лимфоцитами), чем в чистых культурах моноцитов, очищенных путем отмучивания, что указывает на то, что прямые межклеточные взаимодействия или факторы, секретируемые лимфоцитами, взаимодействуют с PCMO для увеличения их пролиферации. . Чтобы прояснить роль аутологичных лимфоцитов в пролиферации PCMO, отмученные моноциты сокультивировали с увеличивающимся количеством лимфоцитов от одного и того же донора в отдельных вставках с размером пор 0.4 мкм м, которые позволяют переносить микромолекулы, но не клетки (рис. 1 (а), вверху). Наши результаты показали увеличение доли Ki67-положительных моноцитов, которое было пропорционально количеству совместно культивируемых лимфоцитов (выраженное соотношением лимфоциты: моноциты, рисунок 1). Увеличение митотически активных моноцитов сопровождалось подавлением ингибитора клеточного цикла при соотношении моноциты: лимфоциты более 1: 1 (рис. 1 (b)) и, вероятно, отражает дерепрессию из-за остановки роста.Поскольку индуцируется передачей сигналов TGF- β / Smad3 и TGF- β 1 присутствует в супернатантах культур PCMO [25], мы рассмотрели вопрос о том, могут ли лимфоциты ингибировать сигнальную активность TGF- β путем мониторинга статус активации Smad3 (и Smad2 в качестве контроля) с помощью фосфоиммуноблоттинга. В совместно выращиваемых моноцитах наблюдалось снижение фосфорилирования Smad3 по сравнению с монокультурными моноцитами, в то время как активация Smad2 была затронута лишь незначительно при оценке относительно уровней домашнего белка α -тубулина (Рисунок 1 (c)).Эти результаты предполагают, что аутологичные лимфоциты усиливают пролиферацию моноцитов путем подавления оси TGF- β / Smad3 /, ингибирующей рост.

    5.3. Усиление пролиферации после добавления митогенных факторов роста

    5.3.1. EGF / HB-EGF

    В более ранних исследованиях мы наблюдали активацию внеклеточной сигнально-регулируемой киназы (ERK) 1 в моноцитах, пик активности которой приходился на 3-4 день культивирования PCMO [4]. Поскольку путь MEK / ERK в значительной степени активируется эпидермальным фактором роста (EGF), который, как известно, индуцирует пролиферацию во многих типах клеток, а его рецептор сверхэкспрессируется в пролиферативных клетках [26], мы оценили возможные прямые эффекты EGF на пролиферацию PCMO. .Гепарин-связывающий эпидермальный фактор роста (HB-EGF), гликопротеин 20–22 кДа из семейства EGF, также, как сообщается, обладает пролиферативным действием и является мощным митогеном для многих типов клеток [27]. Сообщалось, что моноциты периферической крови человека экспрессируют функциональный рецептор EGF (EGFR) [28, 29], в то время как рецепторы EGF c-erbB2, c-erbB3 и c-erbB4 не изучались. Однако о связи между EGF или HB-EGF и пролиферацией в моноцитах еще не сообщалось.

    EGF и HB-EGF усиливали клеточную пролиферацию PCMO, что продемонстрировано повышенной экспрессией генов контроля цикла (ABL, ANAPC2, CDC2, CDK4 и CDK6), увеличением фосфорилирования белка ретинобластомы (Rb pRb ppRb) и увеличением Количество клеток PCMO после стимуляции EGF или HB-EGF [30].EGF также увеличивал количество моноцитов, экспрессирующих маркер пролиферации Ki67. PCMO экспрессировал рецепторы EGF EGFR (ERBB1) и ERBB3, и экспрессия обоих увеличивалась во время генерации PCMO. Фосфоиммуноблоттинг PCMO показал, что как EGF, так и HB-EGF активировали MEK-1/2 и ERK1 / 2 в зависимости от концентрации, причем эффект EGF был более выраженным [30]. Обработка EGF дополнительно снижала экспрессию и увеличивала экспрессию NANOG, указывая на усиление дифференцировки de и плюрипотентности, соответственно.Лечение как EGF, так и HB-EGF привело к неоГепатоцитам с улучшенными функциональными параметрами [30]. Результаты предполагают, что добавление EGF или HB-EGF к среде дифференцировки PCMO суперактивирует передачу сигналов MEK / ERK, что затем увеличивает пролиферацию PCMO и функциональную дифференцировку неоГепатоцитов, полученных из PCMO.

    5.3.2. TGF-

    β / Activin

    Скрининг агентов, стимулирующих пролиферацию PCMO, привел к идентификации ингибитора ALK4 / 5/7 SB431542 [31] как агента, увеличивающего общее количество PCMO, вероятно, за счет предотвращения цитостатической функции. TGF- β на PCMO.Ингибирование аутокринной передачи сигналов TGF- β либо SB431542, либо антителом против TGF- β уменьшало активацию Smad3 и сильно увеличивало количество Ki67-положительных клеток. Ослабление ингибирования роста является в первую очередь результатом снижения TGF- β / Smad3 и, в меньшей степени, передачи сигналов activin / Smad2 [25]. Ингибирование рецепторов TGF- β во время культивирования PCMO, по-видимому, является подходящим инструментом для дальнейшего увеличения PCMO, чтобы максимизировать выход клеток для целей трансплантации в будущем.Однако, поскольку SB431542 также ингибирует ALK4 и ALK7 и, таким образом, передачу сигналов активина, необходимо следить за тем, чтобы эта функция не происходила за счет снижения плюрипотентности. Чтобы избежать этой проблемы, необходимо использовать более специфические ингибиторы передачи сигналов TGF- β [23].

    В течение последнего десятилетия мы и другие внесли свой вклад в осознание того, что моноциты являются чрезвычайно универсальными и пластичными клетками и что эта функция может быть использована in vitro для использования этих клеток в качестве стволовых клеток в регенеративной медицине.Было показано, что различные клеточные препараты, полученные из моноцитов периферической крови, экспрессируют маркеры плюрипотентности / ESC, такие как OCT4 и NANOG, хотя их функция стволовых клеток не была однозначно продемонстрирована. В более крупном масштабе было обнаружено сходство между транскриптомными профилями макрофагов и недифференцированными ЭСК мыши, но не дифференцированными стволовыми клетками [32]. Более того, сходство моноцитов со взрослыми стволовыми клетками также очевидно из наблюдения, что эффективное репрограммирование взрослых (нервных) стволовых клеток в моноциты может быть достигнуто за счет эктопической экспрессии только одного гена, а именно PU.1 [33]. PCMO демонстрирует некоторые особенности частично перепрограммированных клеточных линий, такие как частичная реактивация генов, связанных с обновлением и поддержанием стволовых клеток (например, MYC ) и некоторых генов плюрипотентности ( OCT4 и NANOG ) и неполное подавление транскрипции, определяющей клон. факторы (например, PU.1). Другой особенностью стабильных частично перепрограммированных клеточных линий является гиперметилирование ДНК в локусах, связанных с плюрипотентностью. Основываясь на этих наблюдениях, возможно дальнейшее усиление характера PCMO стволовыми клетками и, в конечном итоге, индукция плюрипотентного состояния посредством генетической комплементации SOX2 , подавления PU.1 , и / или обработка PCMO низкомолекулярными соединениями, которые модифицируют хроматин или усиливают действие факторов плюрипотентности. Однако следует упомянуть, что существует вероятность того, что повторная экспрессия OCT4 в моноцитах / PCMO в ответ на воздействие MCSF / IL-3 / сыворотки не отражает физиологический механизм; тем не менее, это может привести к появлению терапевтически релевантного типа клеток. Интересно, что мы наблюдали некоторое сходство в экспрессии маркеров между PCMO и альтернативно активированными макрофагами, такими как AMAC-1, FoxP3 и IDO (HU, неопубликовано).Поскольку известно, что M2-поляризованные макрофаги выполняют регенеративные функции после повреждения тканей в ходе воспалительного процесса, они не только могут способствовать процессу заживления путем секреции цитокинов, но и сами могут действовать как клетки стволовых клеток для восстановления тканеспецифичных клеток. . В этом отношении и в свете наших данных о том, что аутологичная сыворотка снижает исходную активацию макрофагов в PCMO и улучшает как выход, так и функцию дифференцированных неогепатоцитов (см.

    No related posts.