От стафилококка: Стафилококк у детей — причины, симптомы, диагностика и лечение стафилококковой инфекции в Москве в клинике «СМ-Доктор»

alexxlab Разное

Содержание

Мясников рассказал о борьбе с инфекцией

Рубрику «Простые истины» своей еженедельной программы Александр Мясников посвятил вопросам гигиены, которые очень важны для профилактики и борьбы с опасной стафилококковой инфекцией. 30 процентов населения Земли являются носителями стафилококка, и огромное количество болезней – пневмония, эндокардит, артрит, сепсис – вызываются стафилококками. Целые больницы, роддома закрываются из-за внутрибольничной стафилококковой инфекции.

Истина №1. Гигиенические тампоны могут быть опасны. В конце 70-х годов был описан так называемый токсический стафилококковый шок у молодых женщин, которые пользовались тампонами. Было обнаружено, что после менструации через какое-то время у женщин, которые пользовались тампонами, резко поднималась температура, появлялись высыпания, затруднялось дыхание, падало давление, поражались печень и почки. По словам доктора Мясникова, в патологии самого токсического стафилококкового шока очень много схожего с COVID-19. «Коронавирус, попадая в легкие, вызывает не пневмонию, а именно выброс цитокинов, коагуляцию, внутрисосудистое свертывание. Ровно то же самое вызывает стафилококк!» – объяснил Александр Леонидович и добавил, что не только гигиенические тампоны провоцируют синдром токсического стафилококкового шока, но и хирургия, и любые тампоны!

Истина №2. Не давите прыщи! 30 процентов людей являются носителями золотистого стафилококка. Соответственно, в больнице – каждый второй. Стафилококк до поры «спит». Мы носители! Иногда у некоторых бывает упорный фурункулез. Прыщи мы начинаем давить, гной попадает под кожу. И маленький прыщик перерастает во флегмону.

Истина №3. Не пользуйтесь чужой косметикой и чужими личными вещами. Помните: каждый третий – носитель золотистого стафилококка. «И если для него это «родной» стафилококк… Почему? Потому что на коже находятся другие бактерии, которые являются частью микробиома и являются частью нашего защитного иммунитета», – отметил Мясников. Стрептококки – те бактерии, которые в норме содержатся на коже, «защищают». Приходят стафилококки – и начинают их «прогонять», начинают их «пожирать», не пускать. Это приводит к фурункулезу.

«Все вопросы о личной безопасности и гигиене как бы надоели, но, тем не менее, инфекции всегда будут вокруг нас. Сойдет на нет коронавирус – стафилококк никуда не уйдет, – подвел итог знаменитый врач. – Поэтому помните об элементарных гигиенических привычках».

Лечение пазух носа и золотистого стафилококка в Калининграде

Лечение носа является одной из основных сфер работы лора. В клинике Потоцки в Польше есть все необходимое для борьбы с такими патологиями, как искривление перегородки, полипы и пр. Именно в лечении носа наиболее широко применяются хирургические методики.

Симптомы заболеваний носа чаще всего связаны с инфекционными или аллергическими причинами. Также это могут быть различные новообразования, а также скопления жидкости или слизи в носовых пазухах. Для точного выявления источников болезни следует пройти полное обследование у лора. Записаться на диагностику в нашей клинике можно в Калининграде по тел.: +7 (921) 262-29-59.

Заболевания носа и их лечение

Существует несколько видов распространенных патологий, лечение которых мы предлагаем:

  • вазомоторный ринит;
  • хронические синуситы;
  • полипы носа;
  • искривление перегородки;
  • стафилококки.

Каждое из этих заболеваний вызывает проблемы с дыханием (хроническую заложенность носа), болевые ощущения, недомогание, потерю обоняния и множество других неприятных последствий вплоть до внешнего изменения формы носа. При этом медикаментозное лечение часто не дает существенного результата.

В клинике Потоцки в Польше установлены современные комплексы аппаратного и хирургического оборудования, позволяющие проводить малоинвазивные и

эффективные процедуры для лечения пазух носа. Восстановление от таких операций не занимает много времени. Практически всегда пациенты покидают клинику в день операции и после соблюдения рекомендаций врача в течение нескольких дней возвращаются к нормальному жизненному распорядку.

Лечение стафилококка в носу

Помощь лора может понадобиться и при борьбе со стафилококком. Любопытно, что эти бактерии сопровождают человека всю его жизнь. Они проявляют себя только в периоды ослабления иммунитета, серьезных воспалительных процессах и травмах носа.

Особенно опасным является золотистый стафилококк. Обычно этой разновидности бактерии в организме нет. Она попадает в него извне и способна спровоцировать сильнейшие воспаления. Речь идет не только о ринитах, отитах или ангине. Поражаются все смежные органы дыхания и вызываются такие заболевания, как:

  • бронхит;
  • трахеит;
  • аденоидит;
  • гайморит.

При самых неблагоприятных сценариях, в случае отсутствия диагностики и лечения золотистого стафилококка, поражаются кости, сердце, почки, головной мозг. Особенно опасна бактерия для стариков и детей. Запомните симптомы, при которых нужно немедленно обратиться к лор-врачу: наличие примесей гноя в слизи из носа, нарушение обоняния, изменение тембра голоса, повышенная температура (до 39 градусов и более), общее недомогание, гайморит, фронтит.

Лечение стафилококка в носу у взрослых и детей должно быть своевременным и действенным. Чаще всего оно связано с приемом лекарственных средств, инъекциями препаратов и местной обработкой слизистой. При появлении гнойников может потребоваться и хирургическое вмешательство. Лечение золотистого стафилококка в носу у взрослых должно полностью контролироваться врачом. Это поможет избежать страшных последствий.

Записаться на диагностику и лечение носа в клинике Потоцки в городе Бранево в 5 км от границы Польши и Калининградской области можно по телефону или через форму на сайте. Обратитесь к профессионалам и будьте здоровы!

Пробиотики направленного действия

Мировые научные разработки

Результаты исследований последних лет показали, что различные штаммы полезных бактерий имеют свои уникальные свойства. Это позволило создать новейшие пробиотики, синбиотики и метабиотики с направленным действием на улучшение микрофлоры дыхательных путей, ЖКТ, кожи, полости рта, мочевыводящих путей, женских половых органов и т.д.


Укрепление здоровья дыхательных путей

Применение пробиотиков сегодня особенно актуально для поддержания дыхательной и иммунной систем. В том числе, исследователи делают акцент на возможностях применения пробиотиков в качестве фактора замедления прогрессирования новой коронавирусной инфекции. Было доказано, что применение специального штамма Lactobacillus plantarum DR7 в терапии дыхательных путей может снижать длительность воспалительных процессов и частоту заболеваний легких. Кроме того, этот пробиотик продемонстрировал эффективность, схожую с действием антибиотиков против пневмококка и золотистого стафилококка

1.

ОРВИС Пробиотик от «Эвалар» – первый2 в России пробиотик для поддержания здоровья дыхательных путей, который содержит специальный штамм Lactobacillus plantarum DR7. Он способствует подавлению роста патогенных микроорганизмов (в том числе золотистого стафилококка Staphylococcus aureus) и укреплению иммунитета.

Атака на цистит

Циститом страдают преимущественно женщины. Из-за более короткой уретры болезнетворным бактериям легче попасть в мочевой пузырь. Но мало кто знает, что у женщин есть и собственная, «встроенная» защита от цистита, а именно – микрофлора мочевыводящих путей. Но она часто выходит из строя по самым разным причинам.

Недавно выведены новые штаммы особых лактобактерий Lactobacillus plantarum CECT8675 и CECT8677 для предотвращения цистита. Они быстро формируют защитную биопленку на слизистых и начинают вырабатывать особые вещества, убивающие опасных бактерий.

Нефростен пробиотик

содержит именно эти особые лактобактерии Lactobacillus plantarum CECT8675 и CECT8677 в микроинкапсулированной форме. Он способствует поддержанию нормальной микрофлоры мочевыводящих путей и подавлению патогенных микробов, вызывающих риск развития цистита.

Снижение холестерина

Плохой холестерин незаметно забивает наши сосуды, что в результате приводит к повышенному артериальному давлению, нестабильной работе сердца, риску развития атеросклероза… Многие ошибочно считают, что лишний холестерин мы получаем из пищи. Однако, давно доказано, что его синтезирует печень для образования солей желчных кислот. Заблокировать процесс роста уровня плохого холестерина могут кишечные бактерии Lactobacillus plantarum. Они обладают уникальной способностью выводить желчные кислоты, которые синтезирует печень из холестерина. За счет этого процесса печень вынуждена снова начать работать и использовать имеющиеся запасы холестерина для образования новых желчных кислот. В результате уровень общего холестерина и ЛПНП (липопротеидов низкой плотности) в крови снижается.

С другой стороны, Lactobacillus plantarum, в отличие от статинов, способны снижать уровень еще одного «провокатора» развития атеросклероза – триглицеридов.

Мультифлора Холестерол специально разработанный пробиотик для снижения уровня общего холестерина и липопротеидов низкой плотности («плохого» холестерина), содержащий специальный штамм Lactobacillus plantarum. Способствует усилению действия статинов в целях снижения их дозировки.

Укрепление иммунитета

Именно микрофлора кишечника формирует основной иммунитет, помогает усваиваться полезным веществам… Для нормального функционирования кишечника необходимы лактобактерии, бифидобактерии и пребиотики. Бифидобактерии ускоряют переваривание белков, жиров, стимулируют перистальтику кишечника, участвуют в синтезе и всасывании витаминов, стимулируют синтез иммуноглобулинов, что играет важную роль в формировании общего иммунитета человека. Лактобактерии продуцируют собственные антибиотики, подавляют гнилостные условно-патогенные микроорганизмы и возбудителей острых кишечных инфекций. Пребиотики, являясь пищей для собственной кишечной микрофлоры, стимулируют ее рост и нормальное функционирование. Все перечисленные компоненты в комплексе содержатся в синбиотиках – современных пробиотические средствах.

Мультифлора Эвалар – синбиотик нового поколения (пробиотики + пребиотик) для поддержания правильного баланса микрофлоры кишечника. 7 видов живых бактерий в защитной двухслойной оболочке попадают в кишечник в неизменном виде и способствуют восстановлению микрофлоры кишечника, в том числе после приема антибиотиков и других синтетических лекарств, укреплению иммунитета, улучшению пищеварения, выведению токсинов.

Защита от аллергии

Кожа выполняет защитную функцию для всего организма. Все это благодаря полезным бактериям. Когда эта защита слабеет, появляются аллергические реакции. Для восстановления микрофлоры кожного покрова учеными был разработан специальный штамм Lactobacillus sakei Probio 65. Он обладает устойчивостью к кислотам и антибиотикам, подавляет рост вредных патогенных микроорганизмов, в частности рост золотистого стафилококка, который является фактором, усугубляющим атопический дерматит.

Мультифлора Дерма содержит специально разработанный для здоровой и красивой кожи штамм Lactobacillus sakei Probio 65. Он снижает частоту проявлений аллергических реакций: высыпаний на коже, зуда.

Защита от кариеса и заболевания десен

Нарушение баланса микрофлоры полости рта может привести к появлению кариеса и несвежего дыхания. Но сегодня есть специальные штаммы Lactobacillus brevis CECT7480, Lactobacillus plantarum CECT7481 и Pediococcus acidilactici, которые предотвращают рост вредной микрофлоры, патогенов, вызывающих заболевания десен и кариес, модулируют иммунитет слизистой оболочки полости рта с образованием биопленки, предотвращают неприятный запах изо рта.

Мультифлора Дента содержит специальные штаммы Lactobacillus brevis CECT7480, Lactobacillus plantarum CECT7481 и Pediococcus acidilactici и способствует уменьшению количества патогенных микроорганизмов в полости рта, вызывающих кариес; снижению риска воспаления и кровоточивости десен, устранению неприятного запаха изо рта.

Профилактика кандидоза

Нарушение женской естественной микрофлоры влагалища может привести к такой серьезной проблеме, как кандидоз. Но специальный пробиотик Lactobacillus plantarum I1001 поддерживает естественное кислотное значение pH влагалища, предотвращая рост вредных микроорганизмов. Он способствует восстановлению баланса полезной микрофлоры женщины, а также формирует защитную биопленку, которая предотвращает присоединение патогенных микроорганизмов.

Мультифлора Феми содержит пробиотик Lactobacillus plantarum I1001 и способствует восстановлению и формированию защитной микробиоты (микрофлоры) женщины и подходит для снижения риска развития кандидоза.


1 Chong H-X, Yusoff NAA, Hor Y-Y, Lew L-C, Jaafar MH, Choi S-B, et al. Lactobacillus plantarum DR7 improved upper respiratory tract infections via enhancing immune and inflammatory parameters: A randomized, double-blind, placebo-controlled study. J Dairy Sci. 2019 Jun; 102 (6): 4783-97.
2 По данным государственного реестра зарегистрированных БАД (http://fp.crc.ru/gosregfr/).
НЕ ЯВЛЯЕТСЯ ЛЕКАРСТВЕННЫМ СРЕДСТВОМ

Шведы объяснили механизм защиты человеческой кожи от золотистого стафилококка

Schulz et al. / Cell reports, 2019

Шведские ученые выяснили, каким образом кожа человека может противостоять проникновению в организм золотистого стафилококка. Оказалось, что клетки нижних слоев кожи выделяют провоспалительный цитокин, который привлекает иммунные клетки. Это объясняет, почему смертельно опасный супермикроб может время от времени селиться на коже людей без вреда для их здоровья. Исследование опубликовано в журнале Cell Reports.

Золотистый стафилококк, устойчивый к метициллину (MRSA), входит в десятку самых опасных для человечества микробов по оценкам ВОЗ. Он же ответственен за три четверти воспалений кожи и мягких тканей, а заражение им нередко приводит к гибели пациентов. Тем удивительнее, что примерно у каждого пятого человека золотистый стафилококк входит в число постоянных обитателей носовой полости. А судя по наличию антител к нему в крови, практически каждый из нас рано или поздно сталкивался с этим микробом.

Судя по всему, у человека есть какой-то механизм борьбы с опасной бактерией. Анетт Шульц (Anette Schulz) из Каролинского института и ее коллеги предположили, что защитой от стафилококка может служить человеческая кожа. Чтобы проверить, как именно происходит колонизация кожи бактерией, исследователи пересадили участки здоровой человеческой кожи иммунодефицитным мышам, и после этого поселили на нее золотистый стафилококк.

Ученые обнаружили, что в течение первых пяти дней после подселения бактерия успешно размножается на поверхности кожи, но к десятому дню практически полностью исчезает. Ни в какой момент времени стафилококк не проникал во внутренние слои кожи, каждый раз его обнаруживали только на поверхности наружного рогового слоя. Этот эффект воспроизводился для разных доноров кожи — значит, дело не в иммунитете конкретного человека, а в каком-то универсальном механизме.

C-E — трансплантаты кожи, которые прижились у мышей; G-I — результаты эксперимента: стафилококк (желтый) на поверхности клеток на 2 (G) и 5 (H) день, I — кожа после нанесения контрольного физиологического раствора

Schulz et al. / Cell reports, 2019

Исследователи гомогенизировали участки кожи, которая сопротивлялась стафилококку, и обнаружили в ней повышенную концентрацию интерлейкина-8. Это провоспалительный цитокин, который призван привлечь на место инфицирования иммунные клетки, в первую очередь — нейтрофилы. Когда ученые окрасили препараты кожи на характерные маркеры, то действительно увидели нейтрофилы — как в дерме, так и в самом эпидермисе кожи.

Интерлейкин-8 — человеческий цитокин, у мышей есть только его аналог, но его концентрации практически не изменялись даже при заселении кожи стафилококком. Количество других мышиных цитокинов тоже оставалось постоянным. Поэтому исследователи заключили, что основной «сигнал тревоги» поступает именно от клеток человека, то есть от клеток кожи. Когда же ученые заблокировали интерлейкин-8 с помощью антител или вызывали у мышей нейтропению — дефицит нейтрофилов — те перестали сопротивляться инфекции, и число бактерий на поверхности кожи не снизилось со временем.

Таким образом, ученые обнаружили в человеческой коже новый механизм защиты от стафилококка, который не встречается у мышей, но действует только при наличии достаточного количества иммунных клеток в боевой готовности. Тем не менее авторы статьи отмечают, что некоторые штаммы золотистого стафилококка выделяют вещества, токсичные для человеческих нейтрофилов, поэтому настоящая картина битвы иммунитета с супермикробом может оказаться еще сложнее.

Ранее ученые обнаружили мутацию, которая делает людей устойчивыми к золотистому стафилококку. В то же время, продолжается поиск эффективных лекарств: мышей, например, вылечили от инфекции с помощью ретиноидов, а недавно противомикробную активность нашли и у одного противогрибкового средства.

Полина Лосева

Стафилококк золотистый. Микробиологические аспекты . Азбука антибиотикотерапии. Видаль справочник лекарственных препаратов

Автор: Трубачева Е.С., врач – клинический фармаколог

Прошло много лет после написания первой статьи, посвященной лечению инфекций, вызванных золотистым стафилококком. За это время автор, будем надеяться, немного помудрела и приобрела кое-какой опыт в более детальной диагностике вышеупомянутых состояний, чем и хотела бы поделиться с многоуважаемой аудиторией в надежде, что, возможно, поможет каждому из вас в рутинной ежедневной работе, так как с этой зверюшкой сталкивается буквально каждый, кто надел белый халат и уж тем более хирургический костюм.

Сначала повторим общеизвестные факты: S.aureus относится к грамположительным коккам и являются чуть ли не основной причиной большого количества инфекций кожи и мягких тканей, а так же ведущей причиной послеоперационных раневых инфекций.

Выделяют следующие разновидности золотистого стафилококка:

  • Дикий S.aureus
  • MSSA – метициллин-чувствительные стафилококки
  • MRSA – метициллин-резистентные, которые обладают устойчивостью ко всему бета-лактамному ряду, сохраняя клинически важную чувствительность к ванкомицину, линезолиду и тигециклину
  • VRSA и VISA – ванкомицин-устойчивые штаммы, к счастью, крайне редко встречающиеся и в основном наблюдающиеся в отделениях онкогематологии научно-исследовательских центров у пациентов, проходящих курс полихимиотерапии с последующей трансплантацией костного мозга

И сейчас обсудим первые три более подробно, так как именно они являются той причиной, ради которой повторно поднята данная тема, в том числе и по просьбам читателей (за что выражаем отдельную признательность).

Первое, что необходимо не просто запомнить, а буквально зазубрить наизусть – золотистый стафилококк, он же S.aureus, является нормальным жителем на неповрежденной коже и слизистых оболочках. Еще раз – нормальным, но только на неповрежденной коже и вне зависимости от антибиотикочувствительности пойманных экземпляров. Если кожа по тем или иным причинам поражается (например, сахарным диабетом) или повреждается, стафилококк тут же из милого соседа превращается в злейшего врага. Все как у людей – стоит дать слабину, и ближайшие соседи начнут добивать с ласковой улыбкой.

Таким образом, когда вы получаете результат микробиологического исследования образца, взятого с кожи (или из носоглотки), и видите там золотистого стафа, то должны понимать, кто перед вами, и насколько этот кто-то имеет отношение к текущему процессу.

Второе: если клиника отсутствует, а стафилококк посеялся, надо сделать что? Правильно, повторить посев еще раз. Золотистый стафилококк – это один из немногих микробов, чье наличие в отделяемом материале надо проверять дважды. Единственное исключение – это кровь, взятая непосредственно из сосудистого русла, чаще всего из вены. Наличие стафилококка в крови является поводом к немедленному назначению антибактериальной терапии, так как прямо указывает на наличие инфекции кровотока, а уж какого она генеза, спонтанного или ятрогенного, разбираться будете позже. Во всех остальных ситуациях проводится пересев с тщательным соблюдением техники забора материала (со стенок раны, а не гной, состоящий из дохлых нейтрофилов и нападавших сверху стафилококков) и правил асептики и антисептики, чтобы собственными стафилококками с кожи вновь забранный материал не контаминировать.

Чтобы понять, друг перед нами или враг, познакомимся со стафилококками более подробно.

  1. Дикий S.aureus, не видавший ни одного антибиотика, выглядит так

Или так:

И нет, автор не сошла с ума – резистентность к ванкомицину у природных диких золотистых стафилококков – совершенно нормальное явление. Более того, попытка лечить такого возбудителя ванкомицином считается грубейшей ошибкой и закончится полным провалом в силу природной устойчивости к данному препарату. Это третье, о чем помнить необходимо.

Где мы встречаем таких S.aureus чаще всего? В носоглотках грудных младенцев или в их же кале, если придумали посеять. Почему? Потому что это представитель нормальной микрофлоры кожи, и ребенок сглатывает то, что живет в его носоглотке или слизывает с кожи матери. Надо лечить? В данной ситуации – ни в коем случае, иначе побьете нормальную микрофлору кожи и слизистых, и если очень повезет, то для ребенка это пройдет без последствий, но, скорее всего, получим стафилококка, вооруженного пенициллиназами, или MSSA. Повторимся еще раз – только в случае отсутствия клинической картины можно принимать такого рода решения. Во всех иных случаях необходима антибактериальная терапия, причем на длительный (до 28 суток) период времени.

  1. MSSA может выглядеть так

Или так

Обратите внимание на строку с бензилпенициллином, указывающую на наличие пенициллиназ. Мы обязаны упомянуть, что точно такая же картинка может наблюдаться и у пациентов, давно или никогда не применявших антибиотики, так как пенициллиназы еще в середине прошлого века «ушли» в дикую природу.
Почему MSSA? Обратите внимание на строку с оксациллином, который в данной панели поставлен вместо метициллина. Таким же ориентиром может быть цефазолин. Оба этих препарата до сих пор являются самыми эффективными в клиническом плане антибиотиками для эрадикации дикого и MSSA стафилококков, если к этому имеются показания

При каких состояниях мы можем увидеть подобных возбудителей?

  • Практически при всех инфекциях кожи и мягких тканей
  • При внутрибольничных раневых инфекциях
  • При диабетической стопе
  • У внутривенных наркоманов

Типичным для клинической картины будет довольно агрессивное течение заболевания с яркими клиническими проявлениями ввиду того, что именно такой вид стафилококка обладает определенным набором ферментов, очень быстро расплавляющим окружающие ткани с образованием полостей и большим количеством гнойного отделяемого.

  1. MRSA или метициллин-устойчивый S.aureus

на антибиотикограмме будет выглядеть приблизительно так, оксациллин-резистентный, но ванкомицин-чувствительный (хотя при таком значении МПК уже возможны варианты)

Когда встречается? Все многообразие ятрогенных ВБИ к вашим услугам – почти все раневые инфекции и послеоперационные гнойные осложнения вне зависимости от их локализации. Повторимся в очередной раз – руки надо мыть, и мыть правильно. А еще закрывать маской не только рот, но и нос всем, кто хоть как-то касается открытых ран вне зависимости от причин их образования, так как стоит ране появиться, как стафилококк мгновенно превращается в зверя, осложняющего течение любого послеоперационного периода, особенно после операций, связанных с установками импланта. Более подробно о лечении предлагаем почитать в первой статье.

  1. В последнем пункте автор, по идее, должна была бы предложить испугаться самыми страшными ванкомицин-резистентными стафилококками и предложить схватиться за голову, но глядя на следующий набор антибиотикограмм, мы предлагаем посмотреть на то, что обычно сваливается с рук медицинского персонала в раны пациентов или контаминирует их биологический материал, который собран или хранится неправильно. Слава микробиологии, что подобные возбудители для пациентов, которые сохранили хоть какие-то остатки неспецифического иммунитета, не опасны, так как проходя эволюционные пути борьбы с ванкомицином, они почти полностью теряют факторы вирулентности. Но так как такие находки – это будни любой микробиологической лаборатории, то и вы о них тоже должны иметь представление. Уточним еще раз – это результаты посевов при полном отсутствии клинической картины бактериальной инфекции.

А теперь, тихо-тихо прошепчем, что иногда так может выглядеть приболевший микробиологический анализатор, который все, что в него не поставят, может определять как подобную страшную зверюгу. Хотя у вашего анализатора может быть какая-то своя болячка, и эти болячки лучше все-таки знать. Именно такого рода антибиотикограммы, как ничто другое наглядно показывают необходимость развития клинического мышления для умения отличать истинного возбудителя от контаминанта или нормального жителя человеческого организма, а также необходимости понимания, как работают методы микробиологической диагностики и варианты их ограничения.

Подведем краткие итоги нынешнего разговора:

  • Стафилококк на неповрежденной коже и в носоглотке является нормальным представителем микромира, и лечить его не надо, более того, это может наносить прямой вред (как минимум кошельку)
  • Существует целый перечень профессий, где носительство стафилококка строго нежелательно, и именно для этого проводятся контролирующие посевы среди медицинского персонала и работников пищевой отрасли
  • Необходимо уверенно различать не только дикие и внутрибольничные штаммы, но и градацию по MRSA и MSSA, так как это прямо влияет на решение о применении конкретных препаратов при проведении эрадикационной терапии
  • Антибиотикотерапия стафилококковых инфекций должна быть длительной, а не прерываться через 7-10 дней, даже если пациент демонстрирует положительную динамику. Недобитые золотистые стафилококки умеют метастазировать. Более подробно смотрим предыдущую статью
  • Так как S.aureus занимает одно из ведущих мест в структуре внутрибольничных инфекций, особенно связанных с установкой имплантов, правила асептики и антисептики при работе с оными должны соблюдаться максимально жестко, иначе можно повторить дело Хабаровского кардиоцентра

В заключение хотелось бы отметить следующее. Уважаемые коллеги, золотистый стафилококк, при отсутствии клинической картины и на неповрежденной коже и слизистых является нормой – не надо его там «лечить». И брызгать ничем туда не надо. А в случаях наличия клинической картины (исключение – инфекции кровотока), необходимо провести повторный посев, с тщательным соблюдением правил асептики и антисептики, чтобы быть уверенными, что именно этот микроб является возбудителем, а не кто-то прячется за его спиной.

Надеемся, что наш сегодняшний разговор был полезен и прояснил наиболее частые вопросы, связанные с микробиологическими особенностями S.aureus.

Поделиться с друзьями

Пожалуйста, заполните поля e-mail адресов и убедитесь в их правильности

СТАФИЛОКОКК

Подробности

Посев на стафилококк🦠

Стафилококковая инфекция – группа заболеваний, которые вызваны одноименной бактерией разного типа, наиболее опасной из них считается Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus).

По разным данным от 25 до 40 % населения Земли являются его постоянными «владельцами». Бактерия проживает на кожных покровах и слизистых оболочках верхних дыхательных путей. Диапазон заболеваний, которые может вызвать ее присутствие, распространяется от кожных, мягких тканей, респираторных, костных и эндоваскулярных до раневых инфекций.



🎗️Кстати, свое имя бактерия получила благодаря примечательному внешнему виду под микроскопом: в отличие от других бесцветных, она имеет ярко выраженный золотистый окрас!

👉Часто встречаются следующие симптомы заболевания:
— гнойничковое поражение кожи
— зуд кожи, появление красных высыпаний или участков усиленной пигментации;
— локальное воспаление слизистой оболочки ротовой полости (стоматит), конъюнктивы глаз (конъюнктивит) и тому подобное;

‼️В нашем Центре вы можете пройти забор и исследование мазка на стафилококк из зева и носа. Бакпосев на питательных средах, сделанный в нашей лаборатории, позволит определить количество микроорганизма с постановкой последующей антибиотикограммы (покажет чувствительность и резистентность к антибиотикам).

Также наличие стафилококка способен показать анализ кала на условно-патогенную микрофлору, который вы также можете пройти в нашем центре!

«Положительный» результат теста- выявление золотистого стафилококка, свидетельствует об инфекции или о бессимптомном носительстве. В норме результат – «отрицательный», микроорганизм не обнаружен.

Чаще всего стафилококк золотистый можно обнаружить, в кондитерских изделиях и изделиях без должной термообработки (содержащие яйца и молочные продукты), салатах. Поэтому будьте осторожны и следите за сроком годности этих продуктов!

Золотистый и белый стафилококки атакуют / Здоровье / Независимая газета

По статистике, 20% людей на Земле – носители этих видов вирусов

Фурункул – серьезный недуг, при котором не обойтись без врачебной помощи. Фото Depositphotos/PhotoXPress.ru

Фурункул (в обиходе – чирей) – довольно распространенный недуг среди взрослых и детей. Это острое гнойно-некротическое воспаление фолликула волоса и окружающей ткани, вызванное внедрением золотистого стафилококка. В некоторых случаях возбудителем инфекции является так называемый белый стафилококк. Эти два вида бактерии широко распространены в окружающей среде: в уличной пыли, помещениях с недостаточной вентиляцией, жилищах, одежде. Стафилококки могут обитать на коже и слизистых человека, не вызывая при этом заболеваний. По статистике, 20% людей на Земле являются носителями этих микроорганизмов.

Чаще всего фурункул появляется на таких участках тела, как подмышечные впадины, грудь, паховая область, ягодицы, но может быть и на лице, в носу, в ухе. Фурункулы бывают одиночными и множественными. В последнем случае, когда происходит высыпание фурункулов, говорят о фурункулезе, или стафилодермии.

Среди причин возникновения этого кожного заболевания следует в первую очередь отметить ослабленный иммунитет и нарушение обмена веществ, особенно углеводного. Кроме того, его появлению способствуют загрязнение и микротравмы кожи, несоблюдение правил гигиены, гиповитаминозы, нерациональное питание, хронические недуги, например сахарный диабет.

К начальным признакам появления этого заболевания относятся зуд и покалывание на ограниченном участке кожи. Затем на месте воспаления образуется небольшой, болезненный при прикосновении красный узелок. Он постепенно увеличивается в размере и вскоре в его центре появляется гнойник. При возникновении этих симптомов необходимо обратиться к врачу. Следует подчеркнуть, что ни в коем случае нельзя выдавливать и прокалывать фурункул! Подобное самолечение может привести к таким тяжелым осложнениям, как сепсис (заражение крови) или острый тромбофлебит (воспаление вены, сопровождающееся образованием тромба).

Наибольшую угрозу представляет фурункул, локализующийся на лице, особенно в области губ и носа. Здесь находится разветвленная сеть кровеносных и лимфатических сосудов, способствующих быстрому распространению инфекции. Так, она может проникнуть в головной мозг и вызвать гнойный менингит (воспаление оболочек головного мозга). Среди других возможных осложнений – лимфангиит (воспаление лимфатических сосудов) и регионарный лимфаденит (воспаление лимфатического узла).

Словом, фурункул – серьезный недуг, при котором не обойтись без врачебной помощи. Она тем более необходима, если у пациента повысилась температура и появились признаки интоксикации (отравления) – слабость, головная боль, тошнота.

Прежде всего больному необходим полноценный отдых и рациональное питание. Что касается лекарств, то назначают витамины и препараты, способствующие укреплению иммунитета. При необходимости применяются антибактериальные препараты, действие которых направлено на предупреждение осложнений. Хороший эффект дает также такая медицинская процедура, как переливание собственной крови пациента. Важную роль в лечении играет диета. Так, в пищевом рационе следует ограничить употребление углеводистой и жирной пищи, острых специй. В меню можно включить отварные мясо и рыбу, черный хлеб, гречневую и овсяную каши, богатые витаминами группы В, а также кисломолочные продукты.

Что касается местного лечения, то в начальной стадии оно заключается в обработке участка воспаления раствором антисептика. Эту процедуру повторяют, когда фурункул созреет и вскроется. Для ускорения процесса созревания больному при отсутствии температуры показаны физиотерапевтические процедуры. После вскрытия и удаления гноя на эту область накладывается повязка с антимикробной мазью. При рецидивирующих фурункулах проводят курс иммунотерапии с применением специальной вакцины. В тех случаях, когда фурункул грозит перейти в абсцесс (гнойник), прибегают к хирургическому вмешательству.

Лучшее средство профилактики – здоровый образ жизни, который положительно действует на иммунную систему. А это, в свою очередь, способствует усилению защитных сил организма, противостоящих внедрению возбудителя. Необходимо регулярно и полноценно питаться, не допускать нарушений режима труда и отдыха, соблюдать правила личной гигиены. Кроме того, важно закаливать организм, заниматься физкультурой и спортом. 

Staphylococcus — Медицинская микробиология — Книжная полка NCBI

Общие понятия

Клинические проявления

Стафилококки могут вызывать многие формы инфекций. (1) золотистый стафилококк вызывает поверхностные поражения кожи (фурункулы, ячмень) и локализованные абсцессы в других места. (2) S. aureus вызывает глубоко укоренившиеся инфекции, такие как остеомиелит и эндокардит и более серьезные инфекции кожи (фурункулез). (3) S. aureus является основной причиной госпитального (внутрибольничного) инфицирование хирургических ран и с S. epidermidis вызывает инфекции, связанные с постоянным использованием медицинских устройств.(4) С aureus вызывает пищевое отравление, выделяя энтеротоксины в пищу. (5) S. aureus вызывает синдром токсического шока путем высвобождения суперантигенов в кровоток. (6) S saprophiticus причины инфекции мочевыводящих путей, особенно у девочек. (7) Другие виды стафилококки ( S. lugdunensis, S. haemolyticus, S. warneri, S. schleiferi, S. intermedius ) являются редкими возбудителями.

Структура

Стафилококки представляют собой грамположительные кокки диаметром 1 мкм.Они образуют сгустки.

Классификация

S aureus и S intermedius являются коагулаза положительный. Все остальные стафилококки коагулазоотрицательны. Они солеустойчивы и часто гемолитические. Для идентификации требуется анализ биотипа.

Естественная среда обитания

S. aureus колонизирует носовой ход и подмышечные впадины. С epidermidis является обычным кожным комменсалом человека. Другие виды стафилококки являются редкими комменсалами человека.Одни являются комменсалами других животные.

Патогенез

S. aureus экспрессирует множество факторов потенциальной вирулентности. (1) Поверхность белки, которые способствуют колонизации тканей хозяина. (2) Факторы, которые, вероятно, подавляют фагоцитоз (капсула, иммуноглобулин, связывающий белок А). (3) Токсины которые повреждают ткани хозяина и вызывают симптомы заболевания. Коагулазоотрицательный стафилококки обычно менее вирулентны и экспрессируют меньше факторов вирулентности. S. epidermidis легко колонизирует имплантированные устройства.

Защита хозяина

Фагоцитоз является основным механизмом борьбы со стафилококковой инфекцией. Образуются антитела, которые нейтрализуют токсины и способствуют опсонизации. капсула и белок А могут препятствовать фагоцитозу. Рост биопленки на имплантаты невосприимчивы к фагоцитозу.

Лечение

Инфекции, полученные вне больниц, обычно можно лечить с помощью пенициллиназорезистентные β-лактамы. Внутрибольничная инфекция часто вызываются устойчивыми к антибиотикам штаммами и лечатся только ванкомицин.

Устойчивость к антибиотикам

Множественная устойчивость к антибиотикам все чаще встречается у S aureus и S. epidermidis . Устойчивость к метициллину свидетельствует о множественном сопротивлении. Метициллин-устойчивый S aureus (MRSA) вызывает вспышки в больницах и может эпидемия.

Эпидемиология

Эпидемиологическое отслеживание S aureus проводится традиционно методом фагового типирования, но имеет ограничения. Методы молекулярного типирования проходят испытания экспериментально.

Диагностика

Диагностика основана на проведении тестов с колониями. Тесты на коэффициент слипания, коагулаза, гемолизины и термостабильная дезоксирибонуклеаза обычно используются для идентифицировать S aureus . Коммерческие тесты латексной агглютинации доступный. Идентификация S epidermidis подтверждается коммерческие наборы для биотипирования.

Контроль

Пациенты и персонал, являющиеся переносчиками эпидемических штаммов, особенно MRSA, должны быть изолированные. Пациентам могут быть назначены дезинфицирующие ванны или местное лечение. антибиотик для эрадикации носительства MRSA.Программы инфекционного контроля используются в большинство больниц.

Введение

Бактерии рода Staphylococcus являются патогенами человека и других млекопитающие. Традиционно они были разделены на две группы в зависимости от их способность к свертыванию плазмы крови (коагулазная реакция). Коагулазоположительные стафилококки составляют наиболее патогенный вид S aureus . В настоящее время известно, что коагулазонегативные стафилококки (ЦНС) включают более 30 других разновидность.ЦНС являются обычными комменсалами кожи, хотя некоторые виды могут вызывать инфекции. В настоящее время очевидно, что деление стафилококков на коагулазы положительное и отрицательное является искусственным и, действительно, в некоторых случаях вводит в заблуждение. коагулаза является маркером S aureus , но нет прямых доказательств того, что это фактор вирулентности. Кроме того, некоторые природные изоляты S. aureus являются дефект коагулазы. Тем не менее, этот термин все еще широко используется среди клинические микробиологи.

S aureus экспрессирует множество внеклеточных белков и полисахариды, некоторые из которых коррелируют с вирулентностью. Вирулентность возникает в результате сочетанное действие многих факторов, выраженное во время инфекции. Антитела будут нейтрализуют стафилококковые токсины и ферменты, но вакцины отсутствуют. Обе лечение антибиотиками и хирургический дренаж часто необходимы для лечения абсцессов, большие фурункулы и раневые инфекции. Стафилококки – частые возбудители инфекций связанных с постоянными медицинскими устройствами.Их трудно лечить только антибиотики и часто требуют удаления устройства. Некоторые штаммы, заражающие госпитализированные пациенты устойчивы к большинству антибиотиков, используемых для лечения инфекций, а ванкомицин является единственным оставшимся препаратом, к которому резистентность не развитый.

Таксономия

ДНК-рибосомальная РНК (рРНК) гибридизация и сравнительный олигонуклеотидный анализ 16S рРНК продемонстрировала, что стафилококки образуют связную группу в роду уровень. Эта группа встречается в широком семействе Bacillus-Lactobacillus-Streptococcus. кластер, определяющий грамположительные бактерии с низким содержанием G + C ДНК.

Не менее 30 видов стафилококков были идентифицированы биохимическим анализом и в частности, гибридизацией ДНК-ДНК. Одиннадцать из них могут быть выделены от человека. как комменсалы. S aureus (ноздри) и S epidermidis (ноздри, кожа) являются обычными комменсалами и также обладают наибольшим патогенным потенциалом. S saprophyticus (кожа, иногда) также является частой причиной инфекции мочевыводящих путей. S. haemolyticus, S. simulans, S. cohnii, S. warneri и S lugdunensis также могут вызывать инфекции у человек.

Идентификация стафилококков в клинической лаборатории

Структура

Стафилококки — грамположительные кокки размером около 0,5–1,0 мкм в диаметр. Они растут гроздьями, парами и иногда короткими цепочками. кластеры возникают из-за того, что стафилококки делятся в двух плоскостях. Конфигурация кокки помогают отличить микрококки и стафилококки от стрептококков, которые обычно растут цепочками. Необходимо проводить наблюдения за культурами, выращенными в бульоне, так как стрептококки, выращенные на твердой среде, могут образовывать комки.Несколько поля должны быть изучены, прежде чем решить, являются ли глыбы или цепочки настоящее время.

Тест на каталазу

Тест на каталазу важен для различения стрептококков (каталазонегативных) каталазоположительные стафилококки. Испытание проводится путем заливки скошенный агар или бульонную культуру с несколькими каплями 3% перекиси водорода. Каталазоположительные культуры сразу пузырятся. Тест не должен быть сделан на крови агар, потому что кровь сама по себе образует пузырьки.

Выделение и идентификация

Присутствие стафилококков в поражении можно заподозрить после исследование прямой окраской по Граму.Однако небольшое количество бактерий в крови исключают микроскопическое исследование и требуют предварительного посева.

Микроорганизм выделяют посевом материала из клинического образца (или из культуры крови) на твердые среды, такие как кровяной агар, триптический соевый агар или сердечный агар. Образцы могут быть контаминированы другими микроорганизмы можно высевать на агар с маннитоловой солью, содержащий 7,5% натрия хлорид, который позволяет расти гало-толерантным стафилококкам. В идеале грамм следует провести окрашивание колонии и провести тесты на каталазу и продукция коагулазы, позволяющая коагулазоположительным S aureus быть быстро идентифицированным.Еще один очень полезный тест для S aureus является продукция термостабильной дезоксирибонуклеазы. Золотой золотистый может быть подтверждено тестированием колоний на агглютинацию с латексными частицами покрыты иммуноглобулином G и фибриногеном, которые связывают белок А и фактор слипания, соответственно, на поверхности бактериальной клетки. Эти доступны от коммерческих поставщиков (например, Staphaurex). Самый последний латекс тест (Pastaurex) включает моноклональные антитела к серотипам 5 и 8 капсулярного полисахарида, чтобы уменьшить количество ложноотрицательных результатов.(Некоторые недавние клинические изоляты S aureus не производят коагулазы и/или фактор скопления, который может затруднить идентификацию.)

Ассоциация S. epidermidis (и в меньшей степени другие коагулазонегативные стафилококки) с внутрибольничными инфекциями, ассоциированными с постоянными устройствами означает, что выделение этих бактерий из крови может быть важным, а не из-за случайного загрязнения, особенно если последовательные культуры крови положительны.В настоящее время идентификация S epidermidis и другие виды Staphylococcus выполняется с использованием коммерческих наборов для идентификации биотипов, таких как API Staph Ident, API Staph-Trac, Vitek GPI Card и Microscan Pos Combo. К ним относятся предварительно сформированные полоски, содержащие тестовые субстраты.

Эпидемиология инфекций, вызываемых золотистым стафилококком

Поскольку S. aureus является основной причиной внутрибольничных и внебольничные инфекции, необходимо определить родство изоляты, собранные во время расследования вспышки.Системы типирования должны быть воспроизводимы, дискриминативны и просты в интерпретации и использовании. Традиционный метод типирования S. aureus – фаговое типирование. Этот метод основан на фенотипический маркер с плохой воспроизводимостью. Кроме того, он не образует много изолятов. (20% в недавнем опросе Центра по контролю и профилактике заболеваний), и это требует поддержания большого количества запасов фагов и размножающихся штаммов и следовательно, могут выполняться только специализированными референс-лабораториями.

Многие методы молекулярного типирования применялись для эпидемиологического анализа S. aureus , в частности штаммы, устойчивые к метициллину (МРЗС). Плазмидный анализ широко применялся с успехом, но недостаток в том, что плазмиды можно легко потерять и приобрести, и поэтому они по своей природе ненадежный. Методы, предназначенные для распознавания полиморфизмов длины рестрикционных фрагментов (RFLP) с использованием различных генных зондов, включая гены рРНК (риботипирование). ограниченный успех в эпидемиологии MRSA.В этой технике выбор рестрикционный фермент, используемый для расщепления геномной ДНК, а также зонды. ключевой. ПЦР со случайным праймером предлагает потенциал для различения штаммов, но подходящая грунтовка для S aureus еще не найдена. Метод В настоящее время наиболее надежным считается гель-электрофорез в импульсном поле, где геномная ДНК разрезается рестрикционным ферментом, который генерирует большие фрагменты 50-700 кб.

Клинические проявления

S. Aureus

S. aureus печально известен тем, что вызывает фурункулы, фурункулы, ячмень, импетиго и другие поверхностные кожные инфекции у людей ().Он также может вызывать более серьезные инфекции, особенно у лица, ослабленные хроническими заболеваниями, травмами, ожогами или иммуносупрессия. Эти инфекции включают пневмонию, глубокие абсцессы, остеомиелит, эндокардит, флебит, мастит и менингит, и часто связаны с госпитализированными пациентами, а не со здоровыми людьми в сообщество. S aureus и S epidermidis распространены причины инфекций, связанных с постоянными устройствами, такими как суставные протезы, сердечно-сосудистые устройства и искусственные клапаны сердца ().

Рисунок 12-2

Инфекции, связанные с постоянными устройствами.

Патогенез

S. Aureus Инфекции

S. aureus экспрессирует многие ассоциированные с клеточной поверхностью и внеклеточные белков, являющихся потенциальными факторами вирулентности. При большинстве заболеваний, вызываемых патогенез этого организма является многофакторным. Таким образом, трудно определить именно роль того или иного фактора. Это также отражает неадекватность многих животные модели стафилококковых заболеваний.

Однако существуют корреляции между штаммами, выделенными при определенных заболеваниях, и экспрессия определенных факторов, что свидетельствует об их важности в патогенезе. С некоторыми токсинами симптомы болезни человека могут быть воспроизведены у животных с чистым белки. Применение молекулярной биологии привело к недавним достижениям в понимание патогенеза стафилококковых заболеваний. Гены, кодирующие потенциал факторы вирулентности были клонированы и секвенированы, а белки очищены.Это имеет способствовал исследованиям на молекулярном уровне способов их действия, как в vitro и в модельных системах. Кроме того, гены, кодирующие предполагаемые факторы вирулентности были инактивированы, и вирулентность мутантов по сравнению с диким типом деформации в животных моделях. Любое снижение вирулентности указывает на отсутствующий фактор. Если вирулентность восстанавливается, когда ген возвращается к мутанту, то «Молекулярные постулаты Коха» выполнены. Несколько Факторы вирулентности S aureus были подтверждены этим подход.

Адгезия

Чтобы инициировать инфекцию, возбудитель должен получить доступ к хозяину и прикрепиться к клеткам или тканям хозяина.

S aureus Прилипает к белкам хозяина

Клетки S aureus экспрессируют на своей поверхности белки, которые стимулируют прикрепление к белкам хозяина, таким как ламинин и фибронектин, которые являются частью внеклеточный матрикс (). Фибронектин присутствует на эпителиальных и эндотелиальных поверхностях, а также является компонент тромбов.Кроме того, большинство штаммов экспрессируют фибриноген/фибрин. связывающий белок (фактор слипания), который способствует прикреплению к тромбам и травмированных тканей. Большинство штаммов S aureus экспрессируют фибронектин и фибриногенсвязывающие белки.

Рисунок 12-3

Сводка факторов вирулентности Staphylococcus золотистый .

Рецептор, который способствует прикреплению к коллагену, особенно связан с со штаммами, вызывающими остеомиелит и септический артрит.Взаимодействие с Коллаген также может играть важную роль в содействии прикреплению бактерий к поврежденным ткани, где были обнажены нижележащие слои.

Доказательства того, что эти стафилококковые матрикс-связывающие белки являются факторами вирулентности был получен в результате изучения дефектных мутантов в тестах приверженности in vitro и в экспериментальные инфекции. Мутанты, дефектные по связыванию с фибронектином и фибриноген снижал вирулентность в крысиной модели эндокардита, что предполагает что бактериальное прикрепление к стерильным вегетациям, вызванное повреждением эндотелиальной поверхности клапана сердца способствует фибронектин и фибриноген.Точно так же мутанты, лишенные коллаген-связывающего белка, уменьшили вирулентность в мышиной модели септического артрита. Кроме того, растворимый лигандсвязывающий домен фибриногена, фибронектина и коллагенсвязывающего белки, экспрессированные рекомбинантными методами, сильно блокируют взаимодействие бактериальные клетки соответствующим белком-хозяином.

Роль приверженности при инфекциях, связанных с медицинскими изделиями

Инфекции, связанные с постоянными медицинскими изделиями, начиная от простых внутривенные катетеры для протезов суставов и замены сердечных клапанов могут быть вызванные S aureus и S epidermidis ().Вскоре после биоматериал имплантируется в организм человека, он покрывается комплексом смесь белков хозяина и тромбоцитов. В одной модельной системе, включающей краткосрочные контакте биоматериала с кровью показано, что фибриноген является доминирующим компонент и в первую очередь отвечал за соблюдение S aureus в последующих анализах in vitro. Напротив, с материалом которые находились в организме в течение более длительного времени (например, человеческие внутривенные катетеры) фибриноген расщепляется и больше не способствует прикреплению бактерий.Вместо, фибронектин, который остается интактным, становится преобладающим лигандом, способствующим вложение.

Прилипание к эндотелиальным клеткам

S aureus может прикрепляться к поверхности культивируемого эндотелия человека клетки и становятся интернализованными в процессе, подобном фагоцитозу. Не ясно, если присоединение включает новый рецептор или известный поверхностный белок S золотистый . Некоторые исследователи считают, что S aureus может инициируют эндокардит, прикрепляясь к неповрежденному эндотелию.Другие чувствуют что травма даже очень незначительного характера необходима, чтобы способствовать привязанности бактерии.

Избегание защиты хозяина

S aureus выражает ряд факторов, которые потенциально могут нарушать защитные механизмы хозяина. Тем не менее убедительные доказательства роли вирулентность этих факторов отсутствует.

Капсульный полисахарид

Большинство клинических изолятов S aureus экспрессируют поверхностный полисахарид серотипа 5 или 8.Это называется микрокапсула. потому что его можно визуализировать только с помощью электронной микроскопии после антитела мечение, в отличие от обильных капсул других бактерий, которые визуализируются световая микроскопия. S. aureus , выделенный из инфекции, экспрессирует высокий уровень полисахарида, но быстро теряет его при лабораторном пересеве. Функция капсулы не ясна. Он может препятствовать фагоцитозу, но в В лабораторных тестах это было продемонстрировано только в отсутствие комплемента. Наоборот, сравнение дикого типа и мутантного штамма с дефектом капсулы при эндокардите Модель предположила, что экспрессия полисахаридов на самом деле препятствует колонизации поврежденные сердечные клапаны, возможно, за счет маскировки адгезивов.

Белок А

Белок А представляет собой поверхностный белок S. aureus , который связывает молекулы иммуноглобулина G Fc-областью (). В сыворотке бактерии неправильно связывают молекулы IgG. вокруг этого неиммунного механизма. В принципе это нарушит опсонизацию и фагоцитоз. Действительно, у мутантов S aureus отсутствует белок А. более эффективно фагоцитируются in vitro, а исследования с мутантами в Модели инфекции предполагают, что белок А усиливает вирулентность.

Лейкоцидин

S. aureus может экспрессировать токсин, который специфически действует на полиморфноядерные лейкоциты.Фагоцитоз является важной защитой от стафилококковая инфекция, поэтому лейкоцидин должен быть фактором вирулентности. Этот токсин более подробно обсуждается в следующем разделе.

Повреждение хозяина

S. aureus может экспрессировать несколько различных типов белковых токсинов, которые вероятно, ответственны за симптомы во время инфекций. Некоторые повреждают мембраны эритроцитов, вызывая гемолиз; но маловероятно, что гемолиз имеет отношение к виво. Лейкоцидин вызывает повреждение мембран лейкоцитов и не является гемолитическим.Системный выброс α-токсина вызывает септический шок, тогда как энтеротоксины и TSST-1 вызывают токсический шок.

Мембраноповреждающие токсины

(a) α-токсин

Наиболее охарактеризованный и наиболее сильнодействующий мембраноповреждающий токсин из S aureus представляет собой альфа-токсин. Он выражается в виде мономера, который связывается с мембраной восприимчивых клеток. Затем субъединицы олигомеризуются в образуют гексамерные кольца с центральной порой, через которую клеточное содержимое утечка.

Восприимчивые клетки имеют специфический рецептор для α-токсина, который позволяет Низкие концентрации токсина связываются, вызывая небольшие поры, через которые могут проходить одновалентные катионы.При более высоких концентрациях токсин реагирует неспецифически с мембранными липидами, вызывая более крупные поры, через которые могут проходить двухвалентные катионы и небольшие молекулы. Однако сомнительно, если это актуально при нормальных физиологических условиях.

У человека тромбоциты и моноциты особенно чувствительны к α-токсин. Они несут сайты с высоким сродством, которые позволяют токсину связываться в физиологически значимых концентрациях. Сложная серия из следуют вторичные реакции, вызывающие высвобождение эйкозаноидов и цитокинов которые запускают выработку медиаторов воспаления.Эти события вызывают симптомы септического шока, возникающие при тяжелых инфекциях, вызванных золотистый стафилококк .

Представление о том, что α-токсин является основным фактором вирулентности S aureus подтверждается исследованиями очищенного токсина в животных и в органной культуре. Кроме того, мутанты, лишенные α-токсина, менее вирулентны в различных моделях инфекций животных.

(b) β-токсин

β-токсин представляет собой сфингомиелиназу, повреждающую мембраны, богатые этим липид. Классическим тестом на β-токсин является лизис овец. эритроциты.Большинство человеческих изолятов S aureus не не экспрессируют β-токсин. Внутрь вводят лизогенный бактериофаг. ген, кодирующий токсин. Это явление называется негативным фагом. преобразование. Некоторые фаги, инактивирующие ген β-токсина несут детерминанту для энтеротоксина и стафилокиназы (см. ниже).

Напротив, большинство изолятов, выделенных из коровьего мастита, экспрессируют β-токсин, предполагая, что токсин играет важную роль в патогенезе мастита. Это подтверждается тем фактом, что дефицит β-токсина мутанты имеют пониженную вирулентность в мышиной модели мастита.

(c) δ-токсин

δ-токсин представляет собой очень маленький пептидный токсин, продуцируемый большинством штаммов S aureus . Он также производится S epidermidis и Slugdunensis . Роль δ-токсин при заболевании неизвестен.

(d) γ-токсин и лейкоцидин

γ-токсин и лейкоцидины представляют собой двухкомпонентные белковые токсины которые повреждают мембраны восприимчивых клеток. Белки экспрессируются по отдельности, но действуют вместе, повреждая мембраны. Нет никаких доказательств того, что они образуют мультимеры до внедрения в мембраны.γ-токсин локус экспрессирует три белка. Компоненты В и С образуют лейкотоксин. со слабой гемолитической активностью, тогда как компоненты А и В являются гемолитическими и слабо лейкотоксичны.

Классический лейкоцидин Пантона и Валентайна (PV) отличается от лейкотоксин, экспрессируемый локусом γ-токсина. Он обладает мощным лейкотоксичен и, в отличие от γ-токсина, негемолитичен. Только небольшая часть изолятов S aureus (2% в одном исследовании) экспрессируют лейкоцидин PV, тогда как 90% выделенных из тяжелых дермонекротические поражения экспрессируют этот токсин.Это свидетельствует о том, что лейкоцидин PV является важным фактором некротизирующих кожных инфекций.

PV-лейкоцидин вызывает дермонекроз при подкожном введении кроликам. Кроме того, при концентрации ниже той, которая вызывает повреждение мембраны, токсин высвобождает медиаторы воспаления из нейтрофилов человека, что приводит к дегрануляция. Это может объяснить гистологию дермонекроза. инфекции (расширение сосудов, инфильтрация и центральный некроз).

Суперантигены: энтеротоксины и токсин синдрома токсического шока

S. aureus может экспрессировать два разных типа токсина с суперантигенная активность, энтеротоксины, из которых шесть серотипов (A, B, C, D, E и G) и токсин синдрома токсического шока (TSST-1).Энтеротоксины вызывают диарею и рвоту при попадании в организм. виновник стафилококкового пищевого отравления. При выражении системно энтеротоксины могут вызывать синдром токсического шока (СТШ) — действительно энтеротоксины B и C вызывают 50% неменструальных TSS. ЦСТ-1 очень слабо связан с энтеротоксинами и не обладает рвотной активностью. ЦСТ-1 отвечает за 75% TSS, включая все менструальные случаи. ТСС может возникают как следствие любой стафилококковой инфекции при попадании энтеротоксина или TSST-1 высвобождается системно, и хосту не хватает соответствующего нейтрализующие антитела.Тампоассоциированный СТШ не является истинной инфекцией, вызванный ростом S aureus в тампоне и всасывание токсина в кровоток. TSS стал известен при введении супервпитывающих тампонов; и хотя количество таких случаев резко сократилось, они все еще имеют место несмотря на изъятие с рынка некоторых видов тампонов.

Суперантигены неспецифически стимулируют Т-клетки без нормального антигенного признание (). Вплоть до одна из пяти Т-клеток может быть активирована, тогда как только 1 из 10 000 активируется. стимулируются во время презентации антигена.Цитокины высвобождаются в большом количестве. количества, вызывающие симптомы СТШ. Суперантигены связываются непосредственно с главные комплексы гистосовместимости II класса антигенпрезентирующих клеток за пределами обычной антигенсвязывающей рощи. Этот комплекс распознает только элемент Vβ Т-клеточного рецептора. Таким образом, любая Т-клетка с соответствующим элементом Vβ ​​можно стимулировать, тогда как обычно при связывании также требуется антигенная специфичность.

Рисунок 12-4

Суперантигены и неспецифическая стимуляция T клетки.

Эпидермолитический (эксфолиативный) токсин (ЭТ)

Этот токсин вызывает у новорожденных синдром обожженной кожи с широко распространенным образование пузырей и потеря эпидермиса. Существуют две антигенно различные формы токсина, ETA и ETB. Имеются данные о том, что эти токсины имеют протеазу. деятельность. Оба токсина имеют сходство последовательности с S. aureus сериновая протеаза и три наиболее важные аминокислоты в активный центр протеазы сохраняется. Кроме того, изменение активного замена серина на глицин полностью устраняла активность токсина.Тем не менее, инопланетяне не обладают заметной протеолитической активностью, но обладают эстеразной активностью. Неясно, как последний вызывает расщепление эпидермиса. Возможно, что токсины нацелены на очень специфический белок, который участвует в поддержании целостность эпидермиса.

Другие внеклеточные белки

Коагулаза

Коагулаза не является ферментом. Это внеклеточный белок, который связывается с протромбина в хозяине с образованием комплекса, называемого стафилотромбин. протеаза в комплексе активируется характерная для тромбина активность, в результате превращение фибриногена в фибрин.Это основа трубчатой ​​коагулазы тест, при котором в плазме после инкубации с S образуется сгусток aureus супернатант бульонной культуры. Коагулаза – традиционный маркер для идентификации S aureus в клинической микробиологии лаборатория. Однако нет никаких доказательств того, что это фактор вирулентности, хотя разумно предположить, что бактерии могут защищать себя от защиты хозяина, вызывая локальное свертывание крови. В частности, коагулаза Дефицитные мутанты были испытаны на нескольких моделях инфекции, но не отличий от родительского штамма не наблюдалось.

В литературе существует некоторая путаница в отношении коагулазы и образования скоплений фактор, детерминанта связывания фибриногена на клетке S aureus поверхность. Частично это связано с расплывчатой ​​терминологией, с фактором скопления иногда его называют связанной коагулазой. Кроме того, хотя коагулаза считается внеклеточным белком, небольшая часть которого прочно связана с поверхности бактериальной клетки, где она может реагировать с протромбином. Наконец, он имеет недавно было показано, что коагулаза может связывать фибриноген так же, как и тромбин, по крайней мере, когда он внеклеточный.Генетические исследования однозначно показали, что коагулаза и фактор слипания — разные сущности. Отсутствуют конкретные мутанты коагулазы сохраняют активность фактора слипания, в то время как мутанты фактора слипания экспрессируют коагулаза в норме.

Стафилокиназа

Многие штаммы S. aureus экспрессируют активатор плазминогена, называемый стафилокиназа. Генетическая детерминанта связана с лизогенным бактериофаги. Образуется комплекс между стафилокиназой и плазминогеном. активирует плазминоподобную протеолитическую активность, которая вызывает растворение фибрина сгустки.Механизм идентичен стрептокиназе, которая используется в медицине для лечить пациентов, страдающих коронарным тромбозом. Как и в случае с коагулазой, нет доказательства того, что стафилокиназа является фактором вирулентности, хотя это кажется разумным предположить, что локализованный фибринолиз может способствовать распространению бактерий.

Ферменты

S aureus может экспрессировать протеазы, липазу, дезоксирибонуклеазу (ДНКаза) и фермент, модифицирующий жирные кислоты (МЭЖК). Первые три, вероятно, обеспечивают питательные вещества для бактерий, и маловероятно, что они имеют что-либо, кроме незначительных роль в патогенезе.Однако фермент FAME может быть важен при абсцессах, где это может изменить антибактериальные липиды и продлить выживание бактерий. термостабильная ДНКаза является важным диагностическим тестом для идентификации S золотистый .

Коагулазоотрицательные стафилококки

Стафилококки, отличные от S aureus , могут вызывать инфекции у человека. S. epidermidis является наиболее важным коагулазонегативным стафилококков (ЦНС) видов и является основной причиной инфекций, связанных с протезы и катетеры.ЦНС также вызывают перитонит у пациентов, получающих постоянный амбулаторный перитонеальный диализ и эндокардит у пациентов с протезами клапаны. Эти инфекции обычно не приобретаются внутрибольнично. Другие виды, такие as S. haemolyticus, S. warneri, S. hominis, S. capitis, S. intermedius, S. schleiferi и S simulans являются редкими патогенами. Slugdunesis — недавно признанный вид. Это, наверное, больше патогенны, чем другие виды ЦНС, со случаями эндокардита и других сообщается об инфекциях.Вероятно, что заболеваемость инфекциями, вызванными этих организмов недооценивается из-за трудностей идентификации.

Диагностика инфекций ЦНС затруднена. Инфекции часто вялотекущие и хронические с немногочисленными явными симптомами. Это связано с меньшим набором факторов вирулентности и токсины по сравнению с таковыми в случае S aureus . С epidermidis представляет собой комменсал кожи и является одним из наиболее распространенных загрязняющих веществ образцов, отправленных в диагностическую лабораторию, в то время как S lugdunensis часто путают с S aureus .Точный идентификация видов ЦНС требует использования дорогих тестовых наборов, таких как API-стафилококк.

В отличие от S aureus мало что известно о механизмах патогенез инфекции S. epidermidis . Приверженность, очевидно, решающий этап в инициации инфицирования инородным телом. Много исследований было сделано по взаимодействию между S epidermidis и пластиковым материалом используется в имплантатах, и была идентифицирована полисахаридная адгезия (PS/A).Мутанты отсутствие PS / A менее вирулентны в животной модели инфекции инородного тела, и иммунизация очищенным PS/A является защитной. Бактериально-пластиковые взаимодействия вероятно важно при колонизации катетеров через точку входа. Однако, белки-хозяева быстро откладываются на имплантатах. S epidermidis делает не связываются с фибриногеном, но большинство изолятов связывают фибронектин, хотя и менее активно, чем золотистый стафилококк . Однако неизвестно, есть ли белок, аналогичный участвует фибронектин-связывающий белок S. aureus .

Характерной чертой клинических изолятов S. epidermidis является производство «слизи». Это спорная тема. Некоторые чувствуют что слизь является in vitro проявлением способности образовывать биопленку in vivo, например, на поверхности протеза и, таким образом, является маркером вирулентности. In vitro слизь образуется при росте в бульоне в виде биопленки на поверхности сосуд роста. На состав этой слизи, вероятно, повлиял рост Средняя. Одно исследование с определенной средой показало, что слизь была преимущественно секретируемая тейхоевая кислота, полимер, обычно присутствующий в клеточной стенке стафилококков.Некоторые полисахариды в слизи бактерий, выращенных на твердой среде, получены из агар.

Устойчивость стафилококков к противомикробным препаратам

Госпитальные штаммы S. aureus часто устойчивы ко многим различным антибиотики. Действительно штаммы, устойчивые ко всем клинически полезным препаратам, кроме описаны гликопептиды ванкомицин и тейкопланин. Термин МРЗС относится к устойчивости к метициллину, и большинство устойчивых к метициллину штаммов также многократно стойкий.Плазмид-ассоциированная резистентность к ванкомицину была обнаружена у некоторых энтерококки, и детерминанта резистентности была перенесена с энтерококков на S aureus в лаборатории и может встречаться в природе. С epidermidis внутрибольничные изоляты также часто устойчивы к нескольким антибиотики, в том числе метициллин. Кроме того, S aureus экспрессирует устойчивость к антисептикам и дезинфицирующим средствам, таким как соединения четвертичного аммония, что может помочь его выживанию в больничной среде.

С начала эры антибиотиков S aureus ответил на внедрение новых лекарств, быстро приобретающих устойчивость у различных генетические механизмы, включая (1) приобретение внехромосомных плазмид или дополнительная генетическая информация в хромосоме через транспозоны или другие типы вставками ДНК и (2) мутациями в хромосомных генах ().

Многие детерминанты, кодируемые плазмидами, недавно были вставлены в хромосому на сайте, связанном с детерминантой устойчивости к метициллину.Может быть преимущество для организма, имеющего детерминанты резистентности в хромосоме, поскольку они будут более стабильными. По сути, существует четыре механизма устойчивости к антибиотиков у бактерий: (1) ферментативная инактивация препарата, (2) изменения в мишень лекарственного средства для предотвращения связывания, (3) ускоренный отток лекарственного средства для предотвращения токсического концентрации, накапливающиеся в клетке, и (4) обходной механизм, посредством которого выражается альтернативная лекарственно-устойчивая версия мишени ().

Будущие перспективы

Противомикробные препараты

С момента первого применения пенициллина S aureus показал замечательная способность к адаптации.Резистентность к новым препаратам развилась в течение короткое время их введения. Некоторые штаммы теперь устойчивы к большинству обычные антибиотики. Беспокоит, что нет новых антибиотики на горизонте. Любые недавние разработки были модификациями существующие препараты.

Первоначальная стратегия, используемая фармацевтической промышленностью для поиска противомикробных препаратов. Препараты должны были проверять натуральные продукты и синтетические химические вещества на антимикробные свойства. деятельность. Затем был изучен механизм действия.

Применяются новые подходы к поиску нового поколения противомикробных препаратов. Потенциальные мишени, такие как ферменты, участвующие в важной функции (например, в клеточное деление) идентифицируются на основе знаний о бактериальной физиологии и метаболизм. Затем разрабатываются методы скрининга для выявления ингибиторов конкретную молекулу-мишень. Кроме того, обладая подробными молекулярными знаниями о молекулы-мишени, могут быть разработаны специфические ингибиторы.

Вакцины и новые подходы к борьбе с внутрибольничными инфекциями

В настоящее время не существует вакцины для борьбы со стафилококковыми инфекциями.Может Теперь следует рассмотреть методы предотвращения болезней, особенно в госпитализированных пациентов.

Гипериммунная сыворотка доноров-добровольцев или гуманизированные моноклональные антитела направлены на поверхностные компоненты (например, капсульный полисахарид или поверхностный белковые адгезии) могут как предотвращать прилипание бактерий, так и способствовать фагоцитоз бактериальных клеток. Действительно, прототип вакцины на основе капсульной полисахарид из S aureus вводили добровольцев для получения гипериммунной сыворотки, которую можно было бы вводить пациентам в больнице перед операцией.Вакцина на основе белка, связывающего фибронектин, индуцирует защитный иммунитет против мастита у крупного рогатого скота, а также может быть использован в качестве вакцина у людей.

При молекулярной основе взаимодействия между бактериальной поверхностью белки и лиганды белка матрикса-хозяина известны, возможно, разработать соединения, которые блокируют взаимодействие и, таким образом, предотвращают бактериальное колонизация. Их можно вводить системно или местно.

Ссылки

  1. Easmon CSF, Adlam C: Staphylococci and стафилококковые инфекции.Тома 1 и 2. Academic Press, Лондон, 1983 г. .

  2. Фостер Т.Дж. Возможности вакцинации против инфекций, вызванных Золотистый стафилококк . вакцина. 1991;9:221. [PubMed: 2058264]
  3. Фостер Т.Дж., Макдевитт Д.: Молекулярная основа приверженности стафилококков к биоматериалам. п. 31, In Bisno AL, Waldvogel FA (ред.): Инфекции, связанные с постоянными медицинскими устройствами, 2-е издание. американский Общество микробиологии, Вашингтон, округ Колумбия, 1994.

  4. Прево Г., Куппи П., Прево П.и другие. Эпидемиологические данные по Staphylococcus aureus штаммы-продуценты синергименотропных токсинов. J Med Microbiol. 1995;42:237. [PubMed: 7707330]
  5. Rupp ME, Archer GL. Коагулазоотрицательные стафилококки: возбудители, ассоциированные с медицинский прогресс. Клин Инфекция Дис. 1994;19:231. [PubMed: 7986894]
  6. Шливерт PM. Роль суперантигенов в заболеваниях человека. J заразить дис. 1993;167:997. [PubMed: 8486972]
  7. Skinner GRB, Ahmad, A: Стафилококковые вакцины — нынешнее состояние и перспективы на будущее.п. 537. В Mollby R, Flock JI, Nord CE, Кристенссон Б. (ред.): Стафилококки и стафилококковые инфекции. Збл. Бакт. Доп. 26, Fischer Verlag, Штутгарт, 1994.

  8. Vaudaux PE, Lew DP, Waldvogel FA: факторы хозяина предрасполагающие факторы и влияющие на терапию инфекций инородных тел. п. 1. В Бисно А.Л., Вальдвогель Ф.А. (ред.): Инфекции, связанные с постоянным лечением Устройства. 2-е изд. Американское общество микробиологии, Вашингтон, округ Колумбия, 1994 г. .

Staphylococcus aureus (стафилококк) Кожные инфекции

Staphylococcus aureus ( S.aureus или «стафилококк») является основной причиной инфекций кожи и мягких тканей, таких как абсцессы (фурункулы), фурункулы и флегмоны.

  • О Staphylococcus aureus
    Staphylococcus aureus факты, в том числе о распространении S. aureus , общих симптомах и осложнениях.
  • Диагностика и лечение Staphylococcus aureus
    Основы диагностики и лечения.
  • Профилактика Staphylococcus aureus Передача
    Узнайте, как свести к минимуму риск заражения Staphylococcus aureus .
  • Уход за Staphylococcus aureus Инфекция
    Узнайте, как лечить инфекцию Staphylococcus aureus , в том числе как правильно менять повязки.
  • Устойчивый к противомикробным препаратам Staphylococcus aureus
    Все большее число пациентов наблюдают с кожными инфекциями, вызванными бактериями Staphylococcus aureus , устойчивыми ко многим антибиотикам.
    МРЗС | ВИЗА и ВРСА

  • Золотистый стафилококк Статистика
    Статистические данные по MRSA и Staphylococcus aureus , включая ежегодную сводку инфекционных заболеваний, о которых сообщается Министерству здравоохранения Миннесоты.
  • Staph и MRSA Информация для школ
    Часто задаваемые вопросы, которые помогут родителям и администрации школы предотвратить распространение Staph и MRSA в школах.
  • Информация о стафилококке и MRSA для исправительных учреждений
    Руководство, ресурсы и информация для исправительных учреждений.
  • Информация о стафилококке и MRSA для медицинских работников
    Руководства, ресурсы и другая клиническая информация; информация для лабораторий по диагностике и лечению; необходимая отчетная информация.
    MRSA|CA-MRSA|HA-MRSA|VISA и VRSA
  • Материалы для печати
    Информационные бюллетени, буклеты, брошюры, листовки и другие материалы, которые можно распечатать и использовать.

 

Стафилококковые инфекции: основы практики, фон, патофизиология

  • Санчини А. Последние разработки в области фенотипических и молекулярных диагностических методов для обнаружения устойчивости к противомикробным препаратам у Staphylococcus aureus : описательный обзор. Диагностика (Базель) . 15 января 2022 г. 12 (1): [Ссылка на MEDLINE QxMD].

  • Ронгиш Р., Фабри М. [Инфекции мягких тканей]. Hautarzt . 2022 март.73 (3): 223-233. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Schramm GE, Johnson JA, Doherty JA, et al. Метициллин-резистентная инфекция Staphylococcus aureus стерильного участка: важность надлежащего начального антимикробного лечения. Крит Кеар Мед . 2006 г., 34 августа (8): 2069-74. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • [Руководство] Mermel LA, Farr BM, Sherertz RJ, et al. Руководство по лечению внутрисосудистых инфекций, связанных с катетером. Клин Заражение Дис .2001 1 мая. 32(9):1249-72. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Симор А.Е., Филлипс Э., МакГир А. и др. Рандомизированное контролируемое исследование хлоргексидина глюконата для промывания, интраназального мупироцина, рифампина и доксициклина в сравнении с отсутствием лечения для эрадикации метициллин-резистентной колонии Staphylococcus aureus. Клин Заражение Дис . 2007 15 января. 44(2):178-85. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Комото А., Майгума Т., Тешима Д., Сугияма Т., Харуки Ю.Эффекты вмешательства фармацевта в лечение ванкомицином пациентов с бактериемией, вызванной устойчивым к метициллину Staphylococcus aureus. PLoS Один . 2018. 13 (9): e0203453. [Ссылка QxMD MEDLINE]. [Полный текст].

  • Baggett HC, Hennessy TW, Rudolph K, et al. Метициллин-резистентный золотистый стафилококк с внебольничным появлением, связанный с применением антибиотиков и цитотоксина Пантон-Валентайн лейкоцидин во время вспышки фурункулеза в сельских районах Аляски. J Заразить Dis .2004 г., 1 мая. 189(9):1565-73. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Czachor J, Herchline T. Бактериальный неменструальный стафилококковый синдром токсического шока, связанный с энтеротоксинами A и C. Clin Infect Dis . 2001 1 февраля. 32(3):E53-6. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Ямасаки О., Канеко Дж., Моризанэ С. и др. Ассоциация между штаммами Staphylococcus aureus, несущими гены пантон-валентинового лейкоцидина, и развитием глубинной фолликулярной инфекции. Клин Заражение Дис . 2005 1 февраля. 40(3):381-5. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Лабандейра-Рей М., Кузон Ф., Буассет С., Браун Э.Л., Бес М., Бенито Ю. Staphylococcus aureus Пантон-Валентайн лейкоцидин вызывает некротизирующую пневмонию. Наука . 2007 г., 23 февраля. 315(5815):1130-3. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Cremieux AC, Dumitrescu O, Lina G, Vallee C, et al. Пантон-валентный лейкоцидин усиливает тяжесть внебольничного метициллин-резистентного остеомиелита кроликов Staphylococcus aureus. PLoS Один . 2009 г., 25 сентября. 4(9):e7204. [Ссылка QxMD MEDLINE]. [Полный текст].

  • Ниенабер Дж.Дж., Шарма Куинкель Б.К., Кларк-Пирсон М., Ламлертон С., Парк Л., Руд Т.Х. и др. Метициллин-чувствительные изоляты Staphylococcus aureus при эндокардите ассоциированы с генотипом клонального комплекса 30 и особым репертуаром энтеротоксинов и адгезинов. J Заразить Dis . 2011 сен. 204(5):704-713. [Ссылка QxMD MEDLINE]. [Полный текст].

  • де Йонг NWM, ван Кессель КПМ, ван Страйп JAG.Уклонение от иммунитета золотистого стафилококка. Микробиолог Спектр . 7 марта 2019 г. (2): [Ссылка на MEDLINE QxMD].

  • Кляйнер Э., Монк А.Б., Арчер Г.Л., Форбс Б.А. Клиническое значение Staphylococcus lugdunensis, выделенного из обычных культур. Клин Заражение Дис . 2010 1 октября. 51 (7): 801-3. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • фон Эйфф К., Беккер К., Мачка К. и др. Назальное носительство как источник бактериемии Staphylococcus aureus. Исследовательская группа. N Английский J Med . 2001 г., 4 января. 344 (1): 11–6. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Мерц Д., Фрей Р., Периат Н., Зиммерли М., Баттегай М., Флюкигер У. Эксклюзивное носительство Staphylococcus aureus в горле: группы риска. Медицинский стажер Arch . 2009 г., 26 января. 169 (2): 172-8. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Монтойя А., Шилдхаус Р., Гоял А., Манн Дж. Д., Снайдер А., Чопра В. и др. Как часто руки медицинского персонала колонизируются микроорганизмами с множественной лекарственной устойчивостью? Систематический обзор и метаанализ. Am J Борьба с инфекциями . 2019 47 июня (6): 693-703. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Гафтер-Гвили А., Мансур Н., Бивас А. и др. Тромбоцитопения при бактериемии золотистого стафилококка: факторы риска и прогностическое значение. Mayo Clin Proc . 2011 май. 86(5):389-96. [Ссылка QxMD MEDLINE]. [Полный текст].

  • Йылмаз М., Элальди Н., Балкан И.И., Арслан Ф., Батырел А.А., Бакыджи М.З. и др. Предикторы смертности от бактериемии, вызванной золотистым стафилококком: проспективное многоцентровое исследование. Ann Clin Microbiol Antimicrob . 2016 9 фев. 15 (1):7. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • McClelland RS, Fowler VG Jr, Sanders LL, et al. Бактериемия, вызванная золотистым стафилококком, среди пожилых и молодых взрослых пациентов: сравнение клинических признаков и смертности. Медицинский стажер Arch . 1999, 14 июня. 159(11):1244-7. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Kravitz GR, Dries DJ, Peterson ML, et al. Молниеносная пурпура, вызванная золотистым стафилококком. Клин Заражение Дис .2005 1 апреля. 40(7):941-7. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Бор Д.Х., Вулхендлер С., Нардин Р., Браш Дж., Химмельштейн Д.Ю. Инфекционный эндокардит в США, 1998-2009 гг.: общенациональное исследование. PLoS Один . 2013. 8 (3): e60033. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Tande AJ, Palraj BR, Osmon DR, Berbari EF, Baddour LM, Lohse CM, et al. Клиническая картина, факторы риска и исходы гематогенной инфекции протезированных суставов у пациентов с бактериемией Staphylococcus aureus. Am J Med . 2016 фев. 129 (2): 221.e11-20. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Робичек А., Бомонт Дж. Л., Пол С. М. и др. Всеобщий эпиднадзор за метициллин-резистентным золотистым стафилококком в 3 дочерних больницах. Энн Интерн Мед . 2008 18 марта. 148(6):409-18. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Миллер Л.Г., Дьеп Б.А. Клиническая практика: колонизация, фомиты и вирулентность: переосмысление патогенеза внебольничной метициллин-резистентной инфекции Staphylococcus aureus. Клин Заражение Дис . 2008 1 марта. 46(5):752-60. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Bischoff WE, Wallis ML, Tucker BK, et al. «Здоровье!» чихание, простуда, аллергия и дисперсия золотистого стафилококка. J Заразить Dis . 2006 г., 15 октября. 194(8):1119-26. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Diep BA, Chambers HF, Graber CJ, et al. Появление полирезистентного, внебольничного, метициллин-резистентного клона Staphylococcus aureus USA300 у мужчин, имеющих половые контакты с мужчинами. Энн Интерн Мед . 2008 19 февраля. 148(4):249-57. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Синг А., Тущак С., Хормансдорфер С. Метициллин-резистентный золотистый стафилококк в семье и домашняя кошка. N Английский J Med . 2008 13 марта. 358 (11): 1200-1. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Deck MK, Anderson ES, Buckner RJ, Colasante G, Coull JM, Crystal B, et al. Многоцентровая оценка Staphylococcus QuickFISH-метода для одновременной идентификации Staphylococcus aureus и коагулазоотрицательных стафилококков непосредственно из флаконов с культурами крови менее чем за 30 минут. Дж Клин Микробиол . 4 апреля 2012 г. [Ссылка на MEDLINE QxMD].

  • Сариконда К.В., Мичек С.Т., Доэрти Дж.А. и др. Назальная колонизация метициллинрезистентным золотистым стафилококком является плохим прогностическим признаком инфекции, вызванной устойчивым к метициллину золотистым стафилококком в отделении интенсивной терапии, требующей лечения антибиотиками. Крит Кеар Мед . 38 октября 2010 г. (10): 1991-5. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Holland TL, Arnold C, Fowler VG Jr. Клиническое лечение бактериемии, вызванной золотистым стафилококком: обзор. ДЖАМА . 2014 1 октября. 312 (13): 1330-41. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Кааш А.Дж., Фаулер В.Г. мл., Риг С., Пайерл-Хоффманн Г., Биркхольц Х., Хельмих М. и др. Использование набора простых критериев для проведения эхокардиографии при нозокомиальной бактериемии, вызванной золотистым стафилококком. Клин Заражение Дис . 2011 1 июля. 53 (1): 1-9. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Тубиана С., Дюваль Х., Алла Ф., Селтон-Сути С., Таттевин П., Делахай Ф. и др. Оценка VIRSTA, прогностическая оценка для оценки риска инфекционного эндокардита и определения приоритета эхокардиографии у пациентов с бактериемией, вызванной золотистым стафилококком. J Заразить . 2016 Feb 22. [QxMD MEDLINE Link].

  • Думитреску О., Буассе С., Бадью С., Бес М., Бенито Ю., Реверди М.Э. и др. Влияние антибиотиков на золотистый стафилококк, продуцирующий лейкоцидин Пантона-Валентайна. Противомикробные агенты Chemother . 2007 Апрель 51 (4): 1515-9. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • [Руководство] Liu C, Bayer A, Cosgrove SE, Daum RS, Fridkin SK, Gorwitz RJ, et al. Клинические практические рекомендации Американского общества инфекционистов по лечению инфекций, вызванных метициллинрезистентным золотистым стафилококком, у взрослых и детей. Клин Заражение Дис . 2011 фев. 52(3):e18-55. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Taupin D, Karchmer AW, Davis RB, LaSalvia MT. Неосложненный Staphylococcus aureus Бактериемия Продолжительность и исходы лечения в Академическом медицинском центре. Открытый форум заражает Dis . 2020 7 (10) октября: ofaa457. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • McNeil JC, Fritz SA. Стратегии профилактики рецидивирующих внебольничных инфекций кожи и мягких тканей, вызванных золотистым стафилококком. Curr Infect Dis Rep . 2019 11 мар. 21 (4):12. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Бай А.Д., Шоулер А., Берри Л., Стейнберг М., Риччиуто Д.Р., Фернандес Т. и другие. Влияние консультации по инфекционным заболеваниям на качество лечения, смертность и продолжительность пребывания при бактериемии, вызванной золотистым стафилококком: результаты большого многоцентрового когортного исследования. Клин Заражение Дис . 2015 15 мая. 60 (10): 1451-61. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Лучник ГЛ. Staphylococcus aureus: хорошо вооруженный возбудитель. Клин Заражение Дис . 1998 май. 26(5):1179-81. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Кунья Б.А. Антимикробная терапия мультирезистентных Streptococcus pneumoniae, ванкомицинрезистентных энтерококков и метициллинрезистентных Staphylococcus aureus. Med Clin North Am . 2006 ноябрь 90(6):1165-82. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Кунья Б.А. Метициллинрезистентный золотистый стафилококк: клинические проявления и антимикробная терапия. Clin Microbiol Infect .11 июля 2005 г. Приложение 4: 33–42. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Ши С., Сяо И., Чжан К., Ли К., Ван Ф., Ву Дж. и др. Эффективность и безопасность цефазолина по сравнению с антистафилококковыми пенициллинами для лечения бактериемии, вызванной метициллин-чувствительным золотистым стафилококком: систематический обзор и метаанализ. BMC Infect Dis . 2018 11 окт. 18 (1): 508. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Вейс С., Кессельмайер М., Дэвис Дж.С., Моррис А.М., Ли С., Шераг А. и другие.Цефазолин против антистафилококковых пенициллинов для лечения пациентов с бактериемией, вызванной Staphylococcus aureus. Clin Microbiol Infect . 2019 27 марта. [Ссылка QxMD MEDLINE]. [Полный текст].

  • Al-Hasan MN, Rac H. Переход от внутривенной к пероральной противомикробной терапии у пациентов с неосложненными и осложненными инфекциями кровотока. Clin Microbiol Infect . 22 мая 2019 г. [Ссылка на MEDLINE QxMD].

  • Иверсен К., Ихлеманн Н., Гилл С.У., Мэдсен Т., Элминг Х., Дженсен К.Т. и другие.Частичное пероральное и внутривенное лечение эндокардита антибиотиками. N Английский J Med . 2019 31 января. 380 (5): 415-424. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Bouza E. Новый терапевтический выбор для инфекций, вызванных устойчивым к метициллину Staphylococcus aureus. Clin Microbiol Infect . 2009. 15:44-52.

  • Кунья Б.А. Пероральная антибактериальная терапия серьезных системных инфекций. Med Clin North Am . 2006 ноябрь 90(6):1197-222.[Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Проктор Р.А. Роль антагонистов фолиевой кислоты в лечении метициллин-резистентной инфекции Staphylococcus aureus. Клин Заражение Дис . 15 февраля 2008 г. 46(4):584-93. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Даум Р.С., Миллер Л.Г., Иммерглюк Л., Фриц С., Крич С.Б., Янг Д. и другие. Плацебо-контролируемое исследование антибиотиков при абсцессах кожи меньшего размера. N Английский J Med . 2017 29 июня. 376 (26): 2545-2555. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Pillai SK, Wennersten C, Venkataraman L, Eliopoulos GM, Moellering RC, Karchmer AW. Развитие сниженной чувствительности к ванкомицину у метициллин-чувствительного золотистого стафилококка. Клин Заражение Дис . 2009 15 октября. 49(8):1169-74. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • [Руководство] Рыбак М.Дж., Ломаэстро Б.М., Ротшафер Дж.К., Меллеринг Р.К., Крейг В.А., Биллетер М. и соавт. Терапевтические рекомендации по ванкомицину: сводка согласованных рекомендаций Американского общества инфекционистов, Американского общества фармацевтов системы здравоохранения и Общества фармацевтов-инфекционистов. Клин Заражение Дис . 2009 1 августа. 49(3):325-7. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • [Руководство] Рыбак М.Дж., Ле Дж., Лодис Т.П., Левин Д.П., Брэдли Дж.С., Лю С. и соавт. Терапевтический мониторинг ванкомицина при серьезных инфекциях, вызванных устойчивым к метициллину золотистым стафилококком: пересмотренное согласованное руководство и обзор Американского общества фармацевтов системы здравоохранения, Американского общества инфекционистов, Общества детских инфекционных заболеваний и Общества фармацевтов-инфекционистов. Am J Health Syst Pharm . 2020 19 мая. 77 (11): 835-864. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Bellos I, Daskalakis G, Pergialiotis V. Взаимосвязь минимальных уровней ванкомицина с риском острого повреждения почек: метаанализ воздействия и токсичности. J Antimicrob Chemother . 2020 1 окт. 75 (10): 2725-2734. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Любин А.С., Снидман Д.Р., Рутазер Р., Биде П., Голан Ю. Прогнозирование высокой минимальной ингибирующей концентрации ванкомицина при инфекциях кровотока, устойчивых к метициллину Staphylococcus aureus. Клин Заражение Дис . 2011 15 апреля. 52(8):997-1002. [Ссылка QxMD MEDLINE]. [Полный текст].

  • Гериак М., Хаддад Ф., Ризви К., Роуз В., Куллар Р., ЛаПланте К. и др. Клинические данные по даптомицину плюс цефтаролин по сравнению со стандартной монотерапией при лечении бактериемии, устойчивой к метициллину Staphylococcus aureus. Противомикробные агенты Chemother . 2019 май. 63 (5): e02483-18. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Ченг М.П., ​​Лаванди А., Батлер-Лапорт Г., Де л’Этуаль-Морель С., Пакетт К., Ли Т.К.Дополнительный даптомицин в лечении бактериемии, чувствительной к метициллину Staphylococcus aureus: рандомизированное контролируемое исследование. Клин Заражение Дис . 2021 4 мая. 72 (9): e196-e203. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Джейн Р., Кралович С.М., Эванс М.Е. и др. Инициатива по делам ветеранов по предотвращению инфекций, вызванных устойчивым к метициллину золотистым стафилококком. N Английский J Med . 2011 14 апреля. 364(15):1419-30. [Ссылка QxMD MEDLINE].

  • Стид Л.Л., Костелло Дж., Лохиа С., Джонс Т., Спэннхейк Э.В., Нгуен С.Снижение назального носительства Staphylococcus aureus у медицинских работников путем лечения назальным антисептиком на спиртовой основе, не содержащим антибиотиков. Am J Борьба с инфекциями . 2014 авг. 42 (8): 841-6. [Ссылка QxMD MEDLINE]. [Полный текст].

  • Клеточная оболочка Staphylococcus aureus избирательно контролирует сортировку факторов вирулентности

    Условия роста бактерий

    Штаммы S. aureus выращивали на трипсиново-соевом агаре (TSA) или триптосоевом бульоне (TSB).При необходимости для отбора плазмид добавляли хлорамфеникол в концентрации 10 мкг/мл в ночной культуре или 5 мкг/мл в субкультуре, а 2 мкМ гемина использовали для индукции активности промотора P hrtAB . E. coli DH5α или IM08B 78 использовали для клонирования и выращивали в бульоне Луриа-Бертани с соответствующими антибиотиками. Культуры S. aureus выращивали в 5 мл среды в пробирках на 15 мл при встряхивании под углом 45° при 37 °C, за исключением того, что для масс-спектрометрических образцов использовали 20 мл среды в пробирках на 50 мл.Для всех экспериментов S. aureus выращивали в течение ночи в TSB и ночные культуры в разведении 1:100 субкультивировали в свежий TSB. Если не указано иное, S. aureus , выращенных до ранней стационарной фазы, собирали и нормализовали до OD600, равной ~1,1, для дальнейшего экспериментального анализа.

    Конструирование бактериальных штаммов и плазмид

    Штаммы, плазмиды и праймеры S. aureus , используемые в этом исследовании, перечислены в дополнительных данных 3. S.aureus штамм USA300 LAC клон Ah2263 79 использовали в качестве дикого типа (WT), если не указано иное.

    LAC srtA::bursa , spa::bursa , ypfP::bursa , atl::bursa , gtaB::bursa

    8 и

    7 mutant bursa были сгенерированы штаммами

    8 и 90:007 bursa. трансдукция мутаций соответствующих мутантных штаммов JE2 из библиотеки мутантов транспозонов штата Небраска

    41 в LAC с помощью фага 80α. Мутант sbi::kan был получен путем замены вставки транспозона bursa aurealis JE2 sbi::bursa маркером устойчивости к канамицину с использованием pKAN 80. sbi::kan впоследствии был преобразован в LAC spa::bursa или ∆ lukAB / spa::bursa . Вставка транспозона bursa aurealis ypfP::bursa была заменена маркером устойчивости к спектиномицину с использованием pSPC 80 , и полученный ypfP::spec был преобразован в LAC ∆spa∆sbi ∆spa∆sbi ∆sbi/ypfP::spec . Штамм ∆spa∆sbi/ypfP::spec имеет тот же фенотип секреции LukAB, что и ypfP::bursa .

    Мутант ∆ mprF::kan был получен путем замены локуса mprF в LAC WT геном aphA3 , кодирующим устойчивость к канамицину, с использованием системы аллельного обмена pIMAY 81 . Мутация ∆ mprF::kan трансдуцировалась в изогенные мутанты с помощью фага 80α с образованием ∆ lukAB mprF и ∆spa∆sbi∆mprF .

    хромосомное выражение LUKA , LUKB , LUKAB , MPRF (включая домен Flyppase или Synthase), YPFP-LTAA , GEH-6XHIS , SCH-6XHIS , HEL -6xhis , ssaA-6xhis , isaA-6xhis , isaB-6xhis и hla-6xhis были получены с использованием плазмиды pJC1111, которая стабильно интегрирована в сайт Sa1111 82 2 094 9PI1 90.Короче говоря, ампликоны ПЦР, содержащие ген и нативный промотор, были созданы и клонированы в pJC1111. Полученную плазмиду интегрировали в штамм RN9011 и затем трансдуцировали в штаммы LAC с помощью фага 80α. Для точечных мутантов mprF выбранные аминокислоты заменяли сайт-направленным мутагенезом с использованием набора QuikChange (Agilent) с использованием pJC1111-P mprF-mprF в качестве матрицы. В качестве контроля пустой вектор pJC1111 трансдуцировали в LAC WT, ∆ lukAB , ∆ mprF::kan и ypfP::bursa .

    Комплементация с FLAG-меченым LukAB была получена путем вставки 3x FLAG-метки в N-конец зрелого LukA на многокопийной плазмиде pOS1 83 . Полученную плазмиду трансформировали в LAC∆ lukAB∆spa∆sbi.

    Hemin-индуцируемые lukAB и pvl были получены путем лигирования ПЦР-ампликона, содержащего lukAB или pvl , в плазмиду pOS1- PhrtAB

    32 . Пустой вектор и полученную плазмиду трансформировали в LAC ∆ lukAB или ∆ лейкоцидинов .LukAB с SNAP-тегом был создан путем слияния gBlock, содержащего кодон-оптимизированный snap -tag из pSNAP-tag(T7)-2 (NEB) с линкером SGSGSGGRASGSGSG, с N-концом зрелого LukA на pOS1-. Плазмида PhrtAB 32 .

    Кривая роста

    Для измерения кривой роста S. aureus ночные культуры субкультивировали 1:100 в 150 мкл TSB. Разбавленные культуры выращивали в течение 24 ч при 37°С на установке Bioscreen C (Oy Growth Curves Ab Ltd, Финляндия).OD600 измеряли каждые 30 минут в течение 24 часов.

    Фракционирование бактериальной культуры

    Когда бактерии доросли до указанной фазы роста, культуры нормализовали по OD600 и осаждали центрифугированием при 4000 об/мин (~3200×g) в течение 10 мин. Супернатант культуры фильтровали и осаждали при 4 °C в течение ночи с использованием 10% (об./об.) трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Осажденные белки промывали 100% этанолом, осаждали, сушили на воздухе и солюбилизировали 8 М мочевиной в течение 30 мин при комнатной температуре.Раствор смешивали с 2x буфером для образцов SDS, кипятили в течение 10 минут и хранили при -80 °C. Для приготовления лизата бактериальных клеток 1 мл нормализованной бактериальной культуры промывали PBS и лизировали 100 мкг/мл лизостафина (Ambi Products LLC), 40 ед/мл ДНКазы, 40 мкг/мл РНКазы А, 1x Halt Protease Inhibitor ( ThermoFisher) в лизирующем буфере (10 мМ MgCl 2 , 1 мМ CaCl 2 в 50 мМ Трис, рН 7,5) в течение 30 мин при 37°С. Лизат смешивали с 4-кратным буфером для образцов SDS, кипятили в течение 10 минут и хранили при -80 °C.

    Чтобы разделить открытые поверхности и проксимальные компартменты, промытый бактериальный осадок инкубировали с 1x ингибитором протеазы в PBS в течение 10 мин при 37°C, после чего инкубировали с 1% (масса/объем) SDS, 1x ингибитор протеазы в PBS в течение 30 мин при комнатной температуре. После центрифугирования при 13 000 об/мин (~16 000 ×g) в течение 2 мин супернатант собирали как фракцию, экспонированную на поверхности. Полученный осадок, а именно проксимальную к мембране фракцию, трижды промывали PBS, содержащим 1×ингибитор протеазы, и лизировали, как описано выше.Обе фракции смешивали с 4-кратным буфером для образцов SDS, кипятили в течение 10 мин и хранили при температуре -80°С. Действие различных детергентов тестировали таким же образом, как и для получения поверхностно-экспонированной фракции, за исключением того, что добавляли 1% (об./об. или вес./об.) саркозила, тритона Х-100, сапонина, твина 20, Brij L23 или CHAPS. использовал. Эффект 8 M мочевины, 50 мМ MgCl 2 или 1,5 М LiCl тестировали путем инкубации LAC с указанными реагентами в 25 мМ HEPES с соблюдением того же протокола, что и получение фракции, экспонированной на поверхности.

    Когда для удаления поверхностных белков использовали трипсин, промытый бактериальный осадок инкубировали с 0,5 мг/мл трипсина в PBS в течение 30 мин при 37 °C. Необработанный образец инкубировали с 1× ингибитором протеазы в PBS. Трипсин нейтрализовали добавлением ингибитора протеазы до 1× и инкубировали еще 5 мин при 37°С. Трипсин удаляли путем трехкратной промывки бактериального осадка PBS, и бактериальный осадок лизировали, как описано выше.

    Для изучения перемещения LukAB из проксимальных отделов мембраны на клеточную поверхность и в супернатант, LAC ∆lukAB , дополненный индуцируемым гемином lukAB , выращивали в присутствии 10 мкМ гемина в течение 5 часов.Бактериальный осадок промывали, обрабатывали трипсином в течение 30 мин при 37°C и промывали 3 раза 1x ингибитором протеазы в PBS. Пробы бактерий собирали через 0, 5, 15, 30 и 60 мин после инкубации в ТШБ при 37°С. Колониеобразующие единицы (КОЕ) подсчитывали в начале и в конце эксперимента, при этом значительного роста бактерий не наблюдалось.

    Для выделения белков клеточной стенки, мембраны и цитоплазмы бактерии промывали, нормализовали до 1 × 10 9 КОЕ/мл и инкубировали в 0.2 мкг/мл лизостафина, 1× ингибитор протеазы в TSM (10 мМ MgCl 2 , 500 мМ сахарозы в 50 мМ Трис, рН 7,5) в течение 30 мин при 37°С. После центрифугирования при 4000 об/мин (~3200×g) в течение 10 мин супернатант собирали как фракцию клеточной стенки. Осадок осторожно промывали TSM и повторно суспендировали в 2 ед/мл ДНКазы, 2 мкг/мл РНКазы, 1× ингибитора протеазы в лизирующем буфере. Протопласты лизировали ультразвуком (Branson SFX250 Sonifier, микронаконечник, максимальная мощность 40%, 10 с, 8 циклов). После удаления ДНК путем инкубации в течение 30 мин при 37°С клеточный лизат подвергали ультрацентрифугированию при 40 000 об/мин (~86 000 ×g), 1 ч.Супернатант собирали в виде цитоплазматической фракции. Белки в клеточной стенке и цитоплазматических фракциях концентрировали путем преципитации ТХУ. Осадок промывали буфером для лизиса, полностью солюбилизировали буфером для образца 1× SDS и сохраняли как мембранную фракцию.

    Окрашивание кумасси и иммуноблоттинг

    Для изучения профиля экзопротеинов белки культурального супернатанта разделяли на 12% гелях SDS-PAGE и окрашивали кумасси бриллиантовым синим.

    Для иммуноблоттинга белки переносили на нитроцеллюлозную мембрану.Мембрану блокировали 5% молоком, зондировали указанным первичным антителом и инкубировали с конъюгированным с Alexa Fluor 680 козьим антикроличим или антимышиным IgG (Invitrogen, 1:25000) в качестве вторичного антитела. Первичными антителами, использованными в этом исследовании, были кроличьи анти-LukA 20 (1:5000), кроличьи анти-LukB 20 (1:1000), кроличьи анти-LukE (для обнаружения S-субъединицы других лейкоцидинов) 84. (1:5000), анти-LukD кролика (для выявления F-субъединицы других лейкоцидинов) 85 (1:7500), анти-α-токсин кролика (Sigma, 1:5000), анти-IsdA кролика 86 (1:25 000), кроличьи антисортазы A 86 (1:20 000), кроличьи анти-SaeR 87 (1:2 000), мышиные анти-His (Cell Sciences, 1:1 000) и мышиные смесь анти-LukAB (CC8-1-4.3.1.2.5.3 + CC30-3-10.1.5.9 + CC45-1-11.3.5, по 1 мкг/мл). Моноклональные антитела против LukAB были изготовлены на заказ в Envigo со стандартными процедурами получения мышиных моноклональных гибридом. Из-за высокого сходства последовательностей мы использовали перекрестно-реактивные антитела для зондирования соответствующих S- или F-субъединиц HlgAB, HlgCB, LukED и PVL 85 . Изображения были получены с помощью системы визуализации Odyssey Clx (Li-Cor Biosciences). Количественную оценку белковых сигналов проводили с использованием вестерн-анализа с помощью программного обеспечения Image Studio (Li-Cor Biosciences).Белковые сигналы нормализовали по WT или очищенному рекомбинантному белковому контролю на каждой мембране.

    Выделение бактерий из мышей

    Все эксперименты с участием животных были проверены и одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных NYU Langone Health и проводились в соответствии с рекомендациями Национальных институтов здравоохранения (NIH), Законом о защите животных, и Федеральный закон США. Мышей помещали в специальные помещения, свободные от патогенов, а самцов мышей C57BL/6 J в возрасте 6–15 недель случайным образом распределяли по группам инфицирования.

    Мышей инфицировали внутрибрюшинно 300 мкл USA300 WT (1,1 × 10 8 КОЕ) или ∆ lukAB (1,4 × 10 8 КОЕ). Примерно через 20 ч после заражения мышей подвергали эвтаназии, а брюшную полость промывали 3 раза по 5 мл PBS каждый раз. Перитонеальный лаваж центрифугировали при 4000 об/мин (~3200 ×g), 30 мин, 4 °С. Мышиные клетки дополнительно лизировали 0,1% сапонином, 1x ингибитором протеазы в 1 мл PBS в течение 30 минут на льду. Бактериальный осадок собирали после центрифугирования при 14000 об/мин (~21000 ×g), 20 мин при 4 °C.Осадок лизировали и определяли уровень LukAB с помощью иммуноблотов, как описано выше. Бактериальные КОЕ подсчитывали путем серийных разведений в PBS и посева на TSA.

    Анализы на интоксикацию

    Первичные полиморфно-ядерные лейкоциты человека (ПЯЛ) от анонимных здоровых доноров (Нью-Йоркский центр крови) выделяли из лейкоцитарных пленок, как описано ранее 88 . Вкратце, эритроциты удаляли путем инкубации с 0,9% раствором хлорида натрия, 3% раствором декстрана 500 при комнатной температуре в течение 25 мин.Верхнюю фракцию, содержащую PMN и мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC), промывали и отделяли центрифугированием с фиколлом (Ficoll-Paque PLUS, Cytiva) при 805 × g в течение 30 мин без торможения. Осадок собирали в виде PMN и дополнительно лизировали лизирующим буфером ACK (Gibco) для удаления загрязняющих эритроцитов. Клетки ресуспендировали в среде PMN (0,1% сывороточного альбумина человека, 10 мМ HEPES в RPMI) и перед использованием фильтровали через нейлоновый фильтр для клеток 70 мкм.

    Для приготовления бактериального лизата для интоксикации ПЯН бактерии промывали, нормализовали до 1 × 10 9 КОЕ/мл и лизировали 40 мкг/мл лизостафина в среде ПЯЛ.Бактерии также инкубировали со средой PMN только в качестве отрицательного контроля. Бактериальный дебрис удаляли центрифугированием, а супернатант фильтровали и сохраняли в виде бактериального лизата.

    В каждой лунке плоскодонного 96-луночного планшета, обработанного тканевой культурой, смешивали 2 × 10 5 ПЯЛ и бактериальный лизат, эквивалентный 2 × 10 6 КОЕ. При необходимости включали 2,5 мкг/мл аффинно очищенного анти-LukA 22 . После инкубации при 37 °C в 5% CO 2 в течение 2 часов жизнеспособность PMN оценивали с использованием анализа целостности гомогенной мембраны CytoTox-ONE (Promega).Вкратце, 25 мкл супернатанта смешивали с 25 мкл реагента ЛДГ и инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре. Флуоресценцию (возбуждение 560 нм; испускание 590 нм) измеряли с помощью планшетного ридера PerkinElmer 2103 Envision и нормализовали по лункам, содержащим только PMN (0% лизиса клеток) и PMN с Triton X-100 (100% лизиса клеток).

    Тесты на инфицирование

    Перед заражением PMN бактерии с нормированной OD600 промывали PBS и инкубировали с 100 мкг/мл хлорамфеникола, 40 мкг/мл тетрациклина, 1% этанола (контроль носителя для хлорамфеникола) или 0.5% этанол-0,5% метанол (контроль носителя для тетрациклина) на льду. Тетрациклин использовали для индуцируемого гемином lukAB из-за наличия устойчивой к хлорамфениколу плазмиды. После не менее 30 минут обработки аликвоты по 20 мкл бактерий вносили в каждую лунку 96-луночного планшета, затем добавляли 40 мкл среды PMN с антибиотиками или контрольным носителем в двукратной концентрации и 40 мкл PMN при 5 × 10 6 клеток. /мл. Смесь инкубировали при 37°C в 5% CO 2 в течение 1 ч и измеряли жизнеспособность PMN, как описано выше.

    Влияние антибиотиков

    Для оценки влияния антибиотиков на рост бактерий анализы проводили так же, как и анализ инфекции, за исключением того, что бактерии инкубировали в течение 2 часов, чтобы обеспечить значительный рост бактерий без антибиотиков. КОЕ введенных бактерий и после 2-часовой инкубации подсчитывали путем серийного разведения и посева на чашки с TSA.

    Репортерный анализ XylE проводили, как описано ранее 32 . Бактерии выращивали до ранней стационарной фазы в TSB с 5  мкг/мл хлорамфеникола.Промытые бактерии, нормированные до 1 × 10 9 КОЕ/мл, инкубировали с 40 мкг/мл тетрациклина или 0,5% этанола-0,5% метанола (носитель-контроль) в течение 30 мин на льду. В 24-луночном планшете 0,4 мл бактерий разбавляли 1,6 мл среды PMN с 40 мкг/мл тетрациклина или без него, чтобы имитировать концентрацию бактерий, используемую в анализах инфекции PMN. В культуру добавляли гемин до конечной концентрации 0, 1, 2, 4 или 8 мкМ. После 1 ч инкубации при 37°С в 5% СО 2 бактерии осаждали центрифугированием при 13 000 об/мин (~16 000 × g), 2 мин.Осадок промывали 20 мМ фосфата калия (рН 8,0) и ресуспендировали в 100 мкл 10% ацетона, 20 мкг/мл лизостафина в 100 мМ фосфата калия (рН 8,0). После инкубации при 37 °C при встряхивании в течение 20 мин, а затем инкубации на льду в течение 5 мин клеточный дебрис удаляли центрифугированием при 14000 об/мин (~21000 ×g), 30 мин при 4 °C. В 96-луночном планшете с плоским дном 20 мкл супернатанта смешивали с 200 мкл 0,2 мМ пирокатехина в 100 мМ фосфата калия (pH 8,0). Поглощение при 375 нм измеряли сразу, а затем каждые 5 минут в течение 30 минут с помощью многофункционального считывателя планшетов PerkinElmer 2103 Envision.Концентрацию общего белка определяли с использованием анализа белка Pierce BCA (Thermo Scientific). Скорость образования 2-гидроксимуконового полуальдегида (активность XylE) рассчитывали, используя линейную регрессию как функцию времени. Относительную репортерную активность представляли как кратное изменение активности фермента XylE на миллиграмм общих белков по сравнению с контролем без промотора.

    Иммунофлуоресцентная микроскопия

    Для визуализации LukAB методом иммунофлюоресцентной микроскопии отмытые бактериальные клетки помещали на чистое покровное стекло на 15 мин и фиксировали 4% параформальдегидом в течение 15 мин при комнатной температуре.Покровное стекло блокировали 100 мкг/мл IgG человека, 5% BSA в PBS, а затем инкубировали с 10 мкг/мл аффинно-очищенных кроличьих анти-LukA 22 , мышиных анти-FLAG (Sigma) (1:100), или кроличьего антипротеина А (Sigma) (1:1000) в качестве первичного антитела в PBS, содержащем 1% BSA. Покровное стекло промывали три раза и затем инкубировали в темноте с конъюгированным с Alexa Fluor 594 козьим антикроличьим или антимышиным (Abcam) (1:1000) в PBS с 1% BSA. Каждый из этапов инкубации проводили при комнатной температуре в течение 1 часа.Затем покровное стекло промывали шесть раз и окрашивали в темноте 1 мкг/мл ванкомицина BODIPY FL (Invitrogen) в PBS в течение 10 мин. Покровное стекло трижды промывали, заливали Fluoromount G (SouthernBiotech) и сушили на воздухе в течение ночи в темноте.

    LukAB с меткой SNAP метили 20 мкМ SNAP-Surface 594 (NEB) в PBS, содержащем 0,5% BSA, в течение 30 мин при 37 °C. Клетки промывали, фиксировали 4% параформальдегидом в течение 15 мин, окрашивали 1 мкг/мл ванкомицина BODIPY FL (Invitrogen) в PBS в течение 10 мин и наносили на 1.5% агарозные подушечки для визуализации.

    Чтобы обнажить эпитопы LukAB внутри клеточной стенки, мы адаптировали метод обработки лизостафином, описанный ранее 89 . Фиксированные бактерии на покровном стекле обрабатывали 10 мкг/мл лизостафина в TSM в течение 15 минут при 37 °C. Стадии блокирования и окрашивания антителами выполняли, как описано выше, за исключением того, что PBS заменяли TSM на всех стадиях. После отмывания несвязавшегося вторичного антитела покровное стекло инкубировали в темноте с 10 мкг/мл FM 1-43 (Invitrogen) в течение 20 минут при комнатной температуре.Чтобы оценить эффект обработки лизостафином, покровное стекло последовательно окрашивали 1 мкг/мл ванкомицина BODIPY FL и 10 мкг/мл FM 4-64 при комнатной температуре. Покровное стекло монтировали с помощью Fluoromount G и сушили на воздухе в темноте в течение ночи.

    Предметные стекла визуализировали с использованием объектива Plan-Apochromat 63x/1.4 Oil DIC M27 Elyra на лазерном сканирующем конфокальном микроскопе Zeiss 880 с Airyscan. BODIPY FL и FM 1-43 были получены с использованием фильтров возбуждения 488 нм и эмиссионных фильтров 495–550 нм. Alexa Fluor 594, SNAP-surface 594 и mCherry были получены с использованием возбуждения 594 нм и длинноволнового эмиссионного фильтра 605 нм.Изображения FM 4-64 были получены с использованием возбуждения 488 нм и длинноволнового эмиссионного фильтра 605 нм. Z-стеки флуоресцентных каналов были собраны с шагом 0,17 мкм, чтобы покрыть глубину бактерий. Обработка 3D Airyscan выполнялась для необработанных изображений с использованием программного обеспечения Zen (Zeiss) с автоматической интенсивностью. Один срез светлого поля был захвачен в качестве эталона для определения положения бактерий. Идентичные настройки применялись ко всем образцам в каждом эксперименте. Для микроскопии структурированного освещения (SIM) образцы визуализировали с использованием объектива SR Apo TIRF AC 100xH на микроскопе сверхвысокого разрешения N-SIM S, а изображения реконструировали с использованием программного обеспечения NIS-elements AR (Nikon).

    Все изображения были обработаны в дистрибутиве Fiji программного обеспечения ImageJ 90,91 . Изображения стека были Z-проецированы по максимальной интенсивности. Профиль флуоресценции строили, проводя линию против часовой стрелки сверху вдоль клеточной стенки или окрашивая мембрану и измеряя интенсивность флуоресценции. Относительное расстояние до перегородки на двумерных проекциях определяли как отношение кратчайшего пути между фокусами LukAB и перегородкой вдоль клеточной стенки к половине длины полушария, содержащего очаги.Количественные оценки очагов LukAB были выполнены с использованием плагина ImageJ MicrobeJ 92 . Клетки бактерий, которые были интактными и имели четкое разделение с другими клетками, идентифицировались автоматически на основе окрашивания мембраны или клеточной стенки с ручной коррекцией. Фокусы LukAB, связанные с каждой клеткой, были идентифицированы как точечные максимумы, а фокусы между двумя клетками были автоматически назначены одной клетке с помощью программного обеспечения. Для анализа распределения LukAB в мутантах mprF и ypfP для количественного определения использовали только отдельные изолированные клетки.Порог для обнаружения максимума был установлен на основе мутантного и вторичного контроля только с антителами в каждом эксперименте. Список очагов с информацией об интенсивности флуоресценции и родительских бактериях был создан MicrobeJ и дополнительно проанализирован в MATLAB и Excel.

    Электронная микроскопия с криоиммунным золотом

    Бактерии выращивали до ранней стационарной фазы (5 ч), промывали 3 раза PBS при 2000 × g в течение 10 мин и фиксировали 3,2% параформальдегидом + 0,0125% или 0,05% глутаральдегидом в течение 30 мин.После еще одной промывки в PBS бактерии собирали, заливали желатином и инфильтрировали 2,3 М сахарозой в соответствии с методом, описанным ранее 93 . Ультратонкие срезы изготавливали при температуре -110 °C на криоультрамикротоме RMC MTX/CRX (Boeckeler Instruments Inc., Тусон, Аризона, США), переносили на ЭМ-сетки, покрытые углеродом и пиолоформом, и блокировали 0,3% BSA, 0,01 M глицином. , 3% CWFG в PBS. Срезы инкубировали с соответствующими разведениями аффинно-очищенных кроличьих поликлональных антител против LukA 22 или мышиных моноклональных антител против FLAG в том же буфере.Вторичные инкубации с антителами проводили с козьими антикроличьими и козьими антимышиными антителами, связанными с золотыми частицами размером 12 или 6 нм (Jackson ImmunoResearch). Затем образцы контрастировали и заливали уранилацетатом/метилцеллюлозой в соответствии с методом, описанным 94 , и анализировали в просвечивающем электронном микроскопе Leo 912AB (или Leo 906), работающем при 120 кВ (или 100 кВ) (Zeiss, Оберкохен, Германия). ). Микрофотографии-мозаики сканировали с помощью цифровой камеры Cantega с нижним креплением (или бокового крепления Morada) (SIS, Мюнстер, Германия) с программным обеспечением ImageSP от TRS (Tröndle, Moorenweis, Германия).

    Скрининг дот-блоттинга библиотеки мутантов Tn из штата Небраска

    Мутанты из библиотеки мутантов транспозонов штата Небраска выращивали в 96-луночных планшетах в течение 24 часов. Контрольные штаммы (JE2 WT, lukA::bursa , spa::bursa , saeR::bursa ), очищенный рекомбинантный LukAB и пустая лунка были включены в каждый планшет. Промытые бактериальные осадки ресуспендировали и разбавляли 1:4 буфером для образцов 1× SDS (2% SDS, 10% глицерина, 147 мМ 2-меркаптоэтанола, 12,5 мМ ЭДТА, 0,02 % бромфенолового синего в 50 мМ Трис, рН 6.8). После 30 минутной инкубации при комнатной температуре планшет центрифугировали при 4000 об/мин (~3200 ×g), 10 мин и 100 мкл супернатанта загружали на нитроцеллюлозную мембрану через микрофильтрационный аппарат Bio-Dot в соответствии с инструкциями производителя (Bio -Рад). Мембрану удаляли после того, как образцы фильтровали через мембрану и дважды промывали PBST (0,1% Tween 20 в PBS). Мембрану блокировали 5% молоком, 2 мкг/мл IgG человека в PBST при 4°C в течение ночи с последующей инкубацией с кроличьим антителом против LukA (1:5000) в качестве первичного антитела и козьим антителом Alexa Fluor 680 против -антитело кролика (1:25000) в качестве вторичного антитела при комнатной температуре для 1.5 ч каждый. Мембрану сканировали с помощью системы визуализации Odyssey Clx (Li-Cor Biosciences). Количественную оценку белковых сигналов проводили с использованием анализа сетки в программном обеспечении Image Studio (Li-Cor Biosciences) и рассчитывали относительное содержание LukA для каждого мутанта по сравнению с контрольными штаммами.

    После первичного скрининга с 1920 мутантами в библиотеке для вторичного скрининга был отобран 161 мутант с сигналом LukA выше 150% и 121 мутант с сигналом WT ниже 50%.Измерение дот-блоттинга уровней LukAB для этих мутантов повторяли три раза. Из вторичного скрининга был отобран 21 мутант с более высоким и более низким сигналом LukA (всего 42 мутанта) и исследованы на уровни LukAB, LukF и α-токсина с помощью иммуноблоттинга. Мутанты, которые влияют только на LukAB, но не на уровни LukF или α-токсина, были отобраны для дальнейшего изучения, включая трансдукции мутации в штамм LAC WT и комплементарность фенотипа.

    Анализ связывания цитохрома с

    Положительный поверхностный заряд определяли на основании способности бактерий отталкивать катионный белок цитохром с, как описано ранее 95,96 .Бактерии в ранней стационарной фазе доводили до OD600 ~1,1. Аликвоты по 2 мл бактерий дважды промывали ацетатно-натриевым буфером (20 мМ, рН 4,6). Осадок ресуспендировали в 0,5 мл 0,25 мг/мл цитохрома с в ацетатно-натриевом буфере и инкубировали при встряхивании в течение 15 мин при 37°С. Бактерии центрифугировали при 13 000 об/мин (~16 000 ×g), 2 мин, надосадочную жидкость разделяли на аликвоты и измеряли оптическую плотность при 410 нм с использованием планшетного ридера PerkinElmer 2103 Envision с несколькими метками. Измерение нормализовали до 0.25 мг/мл цитохрома с как процент несвязанного цитохрома с.

    Анализ гидрофобности

    Гидрофобность поверхности измеряли как сродство бактерий к органическим растворителям, как описано ранее 48 . Бактерии ранней стационарной фазы промывали PBS и доводили до OD600 ~0,5. Аликвоты по 3 мл бактерий энергично смешивали с 50 мкл додекана путем встряхивания в течение 1 мин. Фазы разделялись, оставляя пробирку неподвижной на 10 мин. Измеряли OD600 фазы PBS и нормализовали по WT как относительную гидрофобность поверхности.

    Анализ репортера GFP

    Штаммы, содержащие репортерные плазмиды GFP, выращивали до ранней стационарной фазы. Бактерии промывали и разбавляли 1:2 PBS. Флуоресценцию GFP и OD600 в 200 мкл суспензии измеряли с помощью многофункционального считывателя PerkinElmer EnVision 2103. Сигнал GFP был нормализован показаниями OD600.

    Количественная масс-спектрометрия

    После выращивания бактерий в течение 5 часов или 24 часов промытые бактериальные осадки нормализовали и повторно суспендировали в буфере для образцов 1× SDS (2% SDS, 10% глицерина, 147 мМ 2-меркаптоэтанола, 12.5 мМ ЭДТА, 0,02% бромфенолового синего в 50 мМ Трис, рН 6,8). Суспензию инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре, а затем центрифугировали при 4000 об/мин (~3200 ×g), 10 мин. Супернатант фильтровали через фильтр 0,22 мкм и хранили при -80°С. Часть образца кипятили, разделяли с помощью SDS-PAGE, окрашивали красителем SYPRO Ruby Protein Gel Stain (Invitrogen) и визуализировали с помощью имидж-сканера ChemiDoc (Bio-Rad).

    Для масс-спектрометрии (МС) белковые изоляты (три препарата) восстанавливали с помощью 0.02 М дитиотреитола и алкилируют 0,05 М йодацетамидом. Чтобы удалить детергент и другие несовместимые с МС компоненты, образцы помещали примерно на 2 см в гель NuPAGE (LifeTechnologies), чтобы весь образец был сконцентрирован в одну полосу геля. Гель окрашивали реагентом GelCode Blue Stain Reagent (Thermo), полосу, содержащую все белки, вырезали и обесцвечивали в течение 15 минут в растворе 1:1 (об./об.) метанола и 100 мМ бикарбоната аммония. Обесцвечивающий раствор удаляли, добавляли еще одну аликвоту свежего обесцвечивающего раствора и образцы обесцвечивали еще 15 мин.Это повторялось еще в течение 4 циклов. Полосы геля были обезвожены путем промывки ацетонитрилом, а затем дополнительно высушены путем помещения их в SpeedVac на 20 мин. 300 нг трипсина, модифицированного для секвенирования (Promega), добавляли непосредственно к высушенному гелю, а затем добавляли 100 мкл 100 мМ бикарбоната аммония, чтобы покрыть полосы геля. Расщепление продолжалось в течение ночи при осторожном перемешивании при комнатной температуре. Полученные пептиды экстрагировали и обессоливали, как описано ранее 97 .

    Аликвоту каждого образца загружали в колонку-ловушку Acclaim PepMap (75 мкм × 2 см, C18, 3 мкм, 100 Å) в соответствии с аналитической колонкой EASY-Spray (50 см × 75 мкм, внутренний диаметр PepMap C18, 2 мкм) с использованием автоматического пробоотборника ВЭЖХ EASY-nLC 1000 (Thermo Fisher Scientific) с растворителем А, состоящим из 2% ацетонитрила в 0.5% уксусная кислота и растворитель В, состоящий из 80% ацетонитрила в 0,5% уксусной кислоте. Пептиды градиентно элюировали в масс-спектрометре Orbitrap Fusion Lumos (Thermo Fisher Scientific) с использованием следующего градиента: 5–20% за 120 мин, 20–40% за 20 мин, затем 40–100% за 10 мин. Спектры MS1 были записаны с разрешением 70 000 (при m/z 200), мишенью AGC 1e6, максимальным временем иона 120  мс и диапазоном сканирования от 400 до 1500  m/z. Спектры МС/МС были собраны с использованием метода Top 20 с разрешением 17 500 (при m/z 200), мишенью АРУ 5e4, максимальным временем иона 120  мс, одним микросканированием, окном изоляции 2 m/z, нормализованным Энергия столкновения (NCE) 27, исключены ионы с зарядовым состоянием +1 и +5 и динамическое исключение 30  с.Поиск спектров

    Spectra проводился в комбинированной базе данных Uniprot Staphylococcus aureus USA300, USA300 TCH959 и Newman с использованием пакета программного обеспечения MaxQuant (версия 1.5.2.8). Для первого поиска допуск пептида был установлен на уровне 20 м.д., а для основного пептида допуск составлял 4,5 м.д. Было выбрано специфическое для трипсина расщепление с двумя пропущенными расщеплениями. Для идентификации были выбраны FDR совпадения спектра пептидов (PSM) 1% и FDR белка 1%. В качестве статической модификации добавлено карбамидометилирование Cys.Окисление Met, дезамидирование Asn и Gln и ацетилирование N-конца белка были допустимыми переменными модификациями. Фильтр был применен для выбора белков с более чем десятью PSM, по крайней мере, в двух образцах в каждом состоянии, и данные были дополнительно проанализированы с помощью MATLAB. Диаграммы Венна были сгенерированы с использованием функции Венна из файлового обмена MATLAB. Статистические различия в образцах WT между 5 часами и 24 часами были определены с помощью тестов t на PSM. Тепловая карта, содержащая образцы со значением p ≤ 0.05 был сгенерирован путем отображения z-показателей всех значений и неконтролируемой иерархической кластеризации белковых видов и образцов.

    Данные экзопротеина PSM были получены из предыдущего внутреннего исследования 27 (MassIVE ID MSV000080260), где штамм бактерий и условия роста были идентичны описанному здесь новому исследованию. Следует отметить, что это сравнение подчеркивает, что относительный состав протеома отличается в культуральном супернатанте от бактериальной поверхности. Исследование не было направлено на сравнение количества одного белка между двумя компартментами, поскольку это были разные эксперименты.

    Прогнозы биоинформатики

    Сигнальные последовательности лейкоцидинов были предсказаны с использованием SignalP-5.0 51 . Предсказанные сигнальные последовательности и последовательности зрелых белков выравнивали с использованием Clustal Omega (EMEL-EBI) с настройками по умолчанию 98 . Локализация белков была предсказана с использованием PSORTb-3.0.2 50 и присвоена каждому из белков, идентифицированных в масс-спектрометрии. Для поиска известных мотивов, которые опосредуют заякоривание клеточной поверхности в LukAB, был выполнен поиск гомологии для LukA и LukB с использованием инструмента ScanProsite 39 и веб-сервера HMMER 38.

    Статистический анализ

    За исключением масс-спектрометрических исследований, GraphPad Prism 8 использовался для всех статистических анализов. Все статистические детали экспериментов можно найти в подписях к рисункам.

    Сводка отчета

    Дополнительную информацию о дизайне исследования можно найти в Сводке отчета об исследовании природы, связанной с этой статьей.

    Паспорта безопасности патогенов: инфекционные вещества – Staphylococcus aureus

    ПАСПОРТ БЕЗОПАСНОСТИ ПАТОГЕНОВ — ИНФЕКЦИОННЫЕ ВЕЩЕСТВА

    РАЗДЕЛ I — ИНФЕКЦИОННЫЙ АГЕНТ

    НАИМЕНОВАНИЕ : Staphylococcus aureus

    Синоним или поперечная ссылка : MRSA (устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus ), MSSA (метициллин-восприимчивый (или чувствительный) Staphylococcus aureus ), виза (ванкомицин-промежуточный Staphylococcus aureus ), HVISA (гетерорезерный ванкомицин- промежуточный Staphylococcus aureus ), VRSA (ванкомицин-резистентный Staphylococcus aureus ), стафилококковая инфекция, стафилококковая инфекция, импетиго, синдром токсического шока.

    ХАРАКТЕРИСТИКИ : Staphylococcus aureus представляют собой грамположительные каталазоположительные кокки, принадлежащие к Staphylococcaceae семейству Сноска 1, Сноска 2 . Они имеют диаметр примерно 0,5-1,5 мкм, неподвижные, не образующие спор, факультативные анаэробы (за исключением S. aureus anaerobius ), которые обычно образуют скопления. Многие штаммы продуцируют стафилококковые энтеротоксины, суперантигенный токсин синдрома токсического шока (TSST-1) и эксфолиативные токсины. Staphylococcus aureus являются частью флоры человека и в основном обнаруживаются в носу и на коже Сноска 3 .

    РАЗДЕЛ II — ИДЕНТИФИКАЦИЯ ОПАСНОСТИ

    ПАТОГЕННОСТЬ/ТОКСИЧНОСТЬ : Staphylococcus aureus представляет собой условно-патогенный микроорганизм, который может вызывать различные самоограничивающиеся и опасные для жизни заболевания у людей Сноска 2 . Бактерии являются основной причиной пищевых отравлений, возникающих в результате употребления продуктов, зараженных энтеротоксинами Сноска 4 .Стафилококковая пищевая интоксикация характеризуется быстрым появлением тошноты, рвоты, болей в животе, спазмов и диареи . Сноска 2, сноска 4 . Симптомы обычно проходят через 24 часа Сноска 4 . Укусы животных могут вызывать местные инфекции, целлюлит, эритему, болезненность, легкую лихорадку, аденопатию и лимфангит (редко) Сноска 5 . Синдром ошпаренной кожи вызывается эксфолиативными токсинами, выделяемыми эпидермисом, и в основном поражает новорожденных и детей младшего возраста Сноска 2 .Другие кожные заболевания, вызванные стафилококковыми эксфолиативными токсинами, включают волдыри, потерю кожи, прыщи, фурункулы, импетиго, фолликулит, абсцессы, плохой контроль температуры, потерю жидкости и вторичную инфекцию , сноска 2, сноска 4, сноска 6, сноска 7 . S. aureus также может вызывать некротизирующий фасциит у лиц с ослабленным иммунитетом, хотя это происходит очень редко Сноска 8 . Некротизирующий фасциит опасен для жизни и вызывает тяжелые осложнения.

    Определенные штаммы S.aureus продуцируют суперантиген TSST-1, который является причиной 75% случаев синдрома токсического шока (СТШ) . Сноска 2 . Клиническая картина СТШ тяжелая, а острые симптомы включают высокую температуру, сосудистый коллапс, рвоту, диарею, миалгию, гипотонию, эритематозную сыпь, шелушение и поражение не менее 3 органов , сноска 2, сноска 9, сноска 10 . Смертность очень высока, смерть может наступить в течение 2 часов Сноска 9 . Синдром токсического шока связан с колонизацией влагалища токсин-продуцирующим штаммом S.aureus во время менструации, осложнения стафилококковой инфекции других локализаций или осложнения хирургических процедур Сноска 10 . Глубокие инфекции включают эндокардит, перитонит, некротизирующую пневмонию, бактериемию, менингит, остеомиелит, септический артрит и инфекции костей, суставов и органов . Сноска 2, сноска 6, сноска 7 .

    ЭПИДЕМИОЛОГИЯ : Распространен во всем мире. Staphylococcus aureus является одной из наиболее частых причин инфекций кожи, мягких тканей и внутрибольничных инфекций Сноска 7 .Уровень заражения в общественных местах растет , сноска 7, сноска 11 . Жители домов престарелых также подвержены повышенному риску заражения MRSA . Сноска 12 . Около 20% людей являются постоянными носителями Staphylococcus aureus , около 60% являются периодическими носителями и примерно 20% редко являются носителями Сноска 3 . Дети чаще являются стойкими носителями бактерий . Сноска 3 . Молодые женщины подвержены более высокому риску синдрома токсического шока . Сноска 10 .

    АССОРТИМЕНТ ХОЗЯЕВ : Люди, дикие и домашние животные, включая коров Сноска 13 .

    ИНФЕКЦИОННАЯ ДОЗА : Не менее 100 000 организмов в организме человека Сноска 14 .

    ПУТЬ ПЕРЕДАЧИ : : Прием пищи, содержащей энтеротоксины Сноска 4 . Вертикальная передача во время вагинальных родов встречается редко Сноска 15 . Передача от человека к человеку происходит при контакте с гнойным поражением или с носителем Сноска 3 .Антисанитарные условия и многолюдные общественные места увеличивают воздействие S. aureus Сноска 16 . Инфекция может передаваться от человека к человеку через медицинских работников или пациентов Сноска 3 . Назальная колонизация может привести к аутоинфекции Сноска 17 .

    ИНКУБАЦИОННЫЙ ПЕРИОД : Начало симптомов после употребления зараженной пищи обычно составляет от 30 минут до 8 часов Сноска 4  . Колонии S. aureus могут существовать неопределенное время; некоторые люди могут носить его хронически, а некоторые могут переносить его периодически Сноска 3  .

    ИНФЕКЦИОННОСТЬ : Инфекционный период длится до тех пор, пока присутствует гнойное поражение или сохраняется состояние носительства.

    РАЗДЕЛ III — РАСПРОСТРАНЕНИЕ

    РЕЗЕРВУАР : Staphylococcus aureus обнаруживается у человека в носу, паху, подмышечных впадинах, в области промежности (у мужчин), на слизистых оболочках, во рту, молочных железах, волосах, а также в кишечнике, мочеполовых и верхних дыхательных путях Сноска 2 , сноска 4, сноска 18 . Резервуарами служат многие животные, особенно коровы с инфицированным выменем . Сноска 13 .

    ЗООНОЗ : Да, при прямом или косвенном контакте с инфицированным животным Сноска 5 .

    ВЕКТОРЫ : Нет.

    РАЗДЕЛ IV — СТАБИЛЬНОСТЬ И ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ

    ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ЛЕКАРСТВЕННЫМ СРЕДСТВАМ : Антибиотики , такие как клоксациллин и цефалексин , обычно используются для лечения стафилококковых инфекций Сноска 19 . Ванкомицин, который вводят внутривенно, используется для лечения MRSA . Сноска 20 .

    УСТОЙЧИВОСТЬ К ЛЕКАРСТВЕННЫМ СРЕДСТВАМ : Многие штаммы Staphylococcus aureus обладают повышенной устойчивостью к антибиотикам нескольких классов Сноска 6 .Резистентные к метициллину штаммы часто вызывают внутрибольничные инфекции Сноска 21 . Во многих больницах документируется растущая резистентность к ванкомицину Сноска 6 .

    ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИМ СРЕДСТВАМ : Чувствителен к 70% этанолу, хлоргексидину, 1% гипохлориту натрия, 2% глутаральдегиду, 0,25% бензалкония хлориду и формальдегиду Сноска 12, Сноска 22, Сноска 23 .

    ФИЗИЧЕСКАЯ ИНАКТИВАЦИЯ : Staphylococcus aureus может расти при рН 4.2 до 9,3 и с концентрацией солей до 15% Сноска 4 . Энтеротоксины устойчивы к температурам, разрушающим бациллы Сноска 4 . Чувствительны к сухой термической обработке 160-170 o С в течение не менее часа, но не к влажной термической обработке Сноска 24 .

    ВЫЖИВАНИЕ ВНЕ ХОЗЯИНА : Выживает на тушах и органах (до 42 дней), полу (менее 7 дней), стекле (46 часов), солнечном свете (17 часов), ультрафиолете (7 часов), мясных продуктах (60 дней). ), монеты (до 7 дней), скин (от 30 минут до 38 дней) (нужна ссылка).В зависимости от размера колонии S. aureus могут выживать на тканях от нескольких дней до месяцев Сноска 25 .

    РАЗДЕЛ V – ПЕРВАЯ ПОМОЩЬ / МЕДИЦИНСКАЯ

    НАБЛЮДЕНИЕ : Мониторинг симптомов. В условиях вспышек пищевое отравление может быть диагностировано на основании клинических данных при культивировании пищевых продуктов на S. aureus Сноска 2 . На синдром токсического шока может указывать клинический диагноз и выделение штамма S. aureus , TSST-1 или энтеротоксинов B или C.Этого можно добиться с помощью ИФА, обратной пассивной латексной агглютинации или ПЦР. Синдром ошпаренной кожи можно диагностировать клинически, при наличии признака Никольского и идентификации S. aureus , извлеченных из очага инфекции. Бактериемия и глубокие инфекции подтверждаются прямым микроскопическим исследованием клинического образца.

    Примечание. Все методы диагностики доступны не во всех странах.

    ПЕРВАЯ ПОМОЩЬ/ЛЕЧЕНИЕ: Лечение абсцессов обычно не требует антибактериальной терапии; обычно достаточно соответствующего дренажа Сноска 6 .При более серьезных инфекциях требуется надлежащая антибактериальная терапия.

    ИММУНИЗАЦИЯ : Нет Сноска 2 .

    ПРОФИЛАКТИКА : Устранение назального носительства с помощью местного применения мупироцина также устраняет ручное носительство Сноска 3 .

    РАЗДЕЛ VI — ЛАБОРАТОРНЫЕ ОПАСНОСТИ

    ИНФЕКЦИИ, ПРИОБРЕТЕННЫЕ В ЛАБОРАТОРИИ : 29 зарегистрированных случаев по состоянию на 1973 г., с 1 летальным исходом Сноска 26 .

    ИСТОЧНИК/ОБРАЗЦЫ : Инфекционные стадии могут присутствовать в спинномозговой жидкости, аспирате из суставов, крови, абсцессах, аэрозолях, фекалиях и моче Сноска 2, Сноска 4, Сноска 6, Сноска 18 .

    ОСНОВНЫЕ ОПАСНОСТИ : Травма кожного барьера, парентеральное введение, прямая имплантация медицинских устройств (т. е. постоянных катетеров и внутривенных капельниц), проглатывание инфицированного материала и контакт с аэрозолями Сноска 2, Сноска 4, Сноска 18 .

    ОСОБАЯ ОПАСНОСТЬ : Загрязненные бланки заявлений , обернутые вокруг контейнеров с образцами Сноска 21 . Прямой контакт с открытыми порезами и повреждениями кожи.

    РАЗДЕЛ VII – КОНТРОЛЬ ВОЗДЕЙСТВИЯ / ИНДИВИДУАЛЬНАЯ ЗАЩИТА

    КЛАССИФИКАЦИЯ ГРУПП РИСКА : Группа риска 2 Сноска 27 .

    ТРЕБОВАНИЯ К СОДЕРЖАНИЮ : Помещения, оборудование и методы работы Уровня сдерживания 2 для работы с инфекционными или потенциально инфекционными материалами, животными или культурами.

    ЗАЩИТНАЯ ОДЕЖДА : Лабораторный халат. Перчатки, когда прямой контакт кожи с зараженными материалами или животными неизбежен. Защита глаз должна использоваться там, где существует известный или потенциальный риск воздействия брызг Сноска 28 .

    ДРУГИЕ МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ : Все процедуры, при которых могут образовываться аэрозоли или вовлекать высокие концентрации или большие объемы, должны проводиться в боксе биологической безопасности (БББ).Использование игл, шприцев и других острых предметов должно быть строго ограничено. Дополнительные меры предосторожности следует учитывать при работе с животными или крупномасштабных мероприятиях Сноска 28 .

    РАЗДЕЛ VIII – ОБРАЩЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ

    РАЗЛИВЫ : Дайте аэрозолям осесть и, надев защитную одежду, осторожно прикройте разлив бумажными полотенцами и нанесите соответствующее дезинфицирующее средство, начиная с периметра и двигаясь к центру. Выждите достаточное время контакта перед очисткой.

    УТИЛИЗАЦИЯ : Обеззараживать все отходы, которые содержат инфекционный организм или контактировали с ним, перед удалением в автоклаве, химической дезинфекцией, гамма-облучением или сжиганием.

    ХРАНЕНИЕ : Инфекционный агент следует хранить в герметичных контейнерах с соответствующей маркировкой.

    РАЗДЕЛ IX — НОРМАТИВНАЯ И ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ

    НОРМАТИВНАЯ ИНФОРМАЦИЯ : Импорт, транспортировка и использование патогенов в Канаде регулируется многими регулирующими органами, включая Агентство общественного здравоохранения Канады, Министерство здравоохранения Канады, Канадское агентство по надзору за продуктами питания, Министерство окружающей среды Канады и Министерство транспорта Канады.Пользователи несут ответственность за соблюдение ими всех соответствующих актов, правил, руководств и стандартов.

    ОБНОВЛЕНО : декабрь 2011 г.

    ПОДГОТОВЛЕН : Управление по регулированию патогенов, Агентство общественного здравоохранения Канады

    Хотя информация, мнения и рекомендации, содержащиеся в данном Паспорте безопасности патогенов, собраны из источников, считающихся надежными, мы не несем ответственности за точность, достаточность или надежность, а также за любые потери или травмы, возникшие в результате использования информации.Часто обнаруживаются недавно обнаруженные опасности, и эта информация может быть не совсем актуальной.

    Copyright ©
    Агентство общественного здравоохранения Канады, 2011 г.
    Canada

    Профилактика и борьба с инфекцией, вызванной золотистым стафилококком

    Как передается Staphylococcus aureus ?

    S. aureus является распространенным кожным микроорганизмом, по оценкам, 25% людей являются длительными носителями. Из-за его присутствия на коже он может быть основной причиной загрязнения фармацевтических продуктов из-за неправильного обращения или плохих асептических процессов и протоколов.Он может передаваться различными путями, например воздушно-капельным или аэрозольным путем, при прямом контакте с зараженными предметами (еда, вода, неодушевленные предметы) или при укусах.

    Как можно обнаружить, предотвратить и контролировать Staphylococcus aureus ?

    Staphylococcus aureus связан с инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи. Его диагностика основана на проведении тестов на обнаружение и идентификацию микробов в бактериальных колониях.Инфекцию Staphylococcus aureus можно предотвратить и контролировать с помощью:


    ● Соблюдение правил гигиены рук

    ● Гигиенические условия проведения медицинских процедур и надлежащее использование противомикробных препаратов

    ● Надлежащие методы контроля окружающей среды, включая регулярный мониторинг воздуха, воды и поверхностей

    ● Строгая очистка и дезинфекция оборудования и окружающей среды

    ● В клинических условиях изоляция пациентов при необходимости

    ● Тщательный мониторинг пациентов и групп риска

     

    Как можно определить присутствие Staphylococcus aureus в фармацевтических продуктах?


    Присутствие микроорганизмов, таких как Staphylococcus aureus , можно определить с помощью процедур микробиологического обнаружения.Компания bioMerieux разработала автоматизированные решения для обнаружения, такие как SCANRDI и BACT ALERT , которые можно использовать для обнаружения бактерий, дрожжей и плесени в пищевых и фармацевтических продуктах.


    Как можно контролировать Staphylococcus aureus в пищевой и фармацевтической промышленности?


    Отраслевые руководства по контролю (или меры контроля) содержат рекомендации о том, как лучше всего эффективно предотвращать и контролировать инфекцию Staphylococcus aureus. Следует следовать списку рекомендаций, предоставленных руководствами FDA и GMP.


    Каковы риски Staphylococcus aureus для пациента?


    Хотя Staphylococcus aureus обычно безвреден для кожи, при попадании в кровоток он может вызывать опасные для жизни заболевания. Staphylococcus aureus является основной причиной сепсиса при попадании в организм через имплантаты, хирургические разрезы и инъекционные лекарства. Некоторые штаммы Staphylococcus aureus представляют собой особую проблему в здравоохранении, поскольку у них развилась устойчивость к антибиотикам.

    В результате фармацевтические системы и мониторинг должны быть спроектированы таким образом, чтобы предотвращать и обнаруживать любое загрязнение. Меры по исправлению положения при постоянном заражении кожными микроорганизмами, такими как Staphylococcus aureus , обычно включают переподготовку операторов для улучшения асептических методов или дополнительное усовершенствование процесса, чтобы уменьшить участие или контакт человека.

    Как лечить инфицирование Staphylococcus aureus ?


    Инфекцию Staphylococcus aureus обычно лечат соответствующими антимикробными методами, такими как удаление временных медицинских приспособлений (таких как катетеры), если это возможно, и терапевтический мониторинг для остановки роста бактерий как можно раньше.Антибиотики также могут быть реализованы.

     

    Географическое распространение золотистого стафилококка, вызывающего инвазивные инфекции в Европе: молекулярно-эпидемиологический анализ

    Аннотация

    Фон

    Staphylococcus aureus является одним из наиболее важных патогенов человека, а метициллин-резистентные варианты (MRSA) являются основной причиной внутрибольничной и внебольничной инфекции. Мы стремились составить карту географического распределения доминирующих клонов, вызывающих инвазивные инфекции в Европе.

    Методы и выводы

    В каждой стране стафилококковые референс-лаборатории обеспечили участие достаточного числа больничных лабораторий для достижения национальной геодемографической репрезентативности. Участвующие лаборатории собрали последовательные изоляты метициллин-чувствительных (MSSA) и MRSA от пациентов с инвазивной инфекцией S. aureus , используя согласованный протокол. Все изоляты были отправлены в соответствующие национальные референс-лаборатории и охарактеризованы контролируемым качеством типированием последовательности вариабельной области стафилококкового гена spa (типирование spa ), а данные были загружены в центральную базу данных.Соответствующая генетическая и фенотипическая информация была собрана для интерактивного опроса с помощью специально созданного картографического веб-приложения. В период с сентября 2006 г. по февраль 2007 г. 357 лабораторий, обслуживающих 450 больниц в 26 странах, собрали 2890 изолятов MSSA и MRSA от пациентов с инвазивной инфекцией S. aureus . Обнаружено широкое географическое распространение спа-типов из , причем некоторые из них преобладают во всех европейских странах. MSSA были более разнообразны, чем MRSA. Генетическое разнообразие MRSA значительно различалось между странами с доминирующими типами MRSA spa , формирующими характерные географические кластеры.Мы приводим доказательства того, что сетевой подход, состоящий из децентрализованного типирования и визуализации агрегированных данных с использованием интерактивного инструмента картирования, может предоставить важную информацию о динамике популяций MRSA, такую ​​как раннее выявление новых штаммов, трансграничное распространение и завоз в результате путешествий.

    Выводы

    В отличие от MSSA, типы MRSA spa имеют преимущественно региональное распространение в Европе. Этот вывод свидетельствует об отборе и распространении ограниченного числа клонов в сетях здравоохранения, предполагая, что усилия по контролю, направленные на прекращение распространения внутри и между учреждениями здравоохранения, могут быть не только осуществимыми, но в конечном итоге успешными, и поэтому их следует всячески поощрять.

    См. далее в статье сводку редакторов

    Образец цитирования: Grundmann H, Aanensen DM, van den Wijngaard CC, Spratt BG, Harmsen D, Friedrich AW, et al. (2010) Географическое распространение Staphylococcus aureus , вызывающих инвазивные инфекции в Европе: молекулярно-эпидемиологический анализ. ПЛОС Мед 7(1): е1000215. https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1000215

    Академический редактор: Генри Ф.Chambers, Калифорнийский университет в Сан-Франциско и больница общего профиля Сан-Франциско, Соединенные Штаты Америки

    Получено: 2 июля 2009 г.; Принято: 4 декабря 2009 г .; Опубликовано: 12 января 2010 г.

    Авторские права: © 2010 Grundmann et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания оригинального автора и источника.

    Финансирование: Все вклады стафилококковых референс-лабораторий финансировались из национальных источников. Сбор данных, управление и анализ финансировались Министерством социального обеспечения и спорта Нидерландов и Генеральным директоратом по здравоохранению и защите прав потребителей Европейской комиссии в соответствии с Соглашением № -2003212 и Wellcome Trust в рамках гранта № 030662. SeqNet.org частично финансируется Программой Interregio Европейского Союза IIIA fund 2-EUR-V-1-96.Спонсоры не принимали участия в разработке проекта, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

    Конкурирующие интересы: DH является одним из разработчиков программного обеспечения Ridom StaphType и SpaServer, упомянутых в рукописи. Клиентское программное обеспечение распространяется и продается компанией Ridom GmbH, которая частично принадлежит ему. Все остальные авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

    Сокращения: CA-MRSA, внебольничный устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus ; КИ, доверительный интервал; СО-МРЗС, устойчивый к метициллину золотистый стафилококк ; УША, Европейская система надзора за устойчивостью к противомикробным препаратам; МЛСТ, мультилокусное типирование последовательности; МРЗС, устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus ; МССА, чувствительный к метициллину Staphylococcus aureus ; ПВЛ, Лейкоцидин Пантона-Валентайна; ООО, С.aureus Референтные лаборатории; СТ, тип последовательности

    Резюме редактора

    Фон

    Бактерия Staphylococcus aureus обитает на коже и в носу примерно у трети здоровых людей. Хотя S. aureus обычно мирно сосуществует со своими переносчиками среди людей, он также является важным болезнетворным организмом или патогеном. Если он попадает в организм через порез или во время хирургической процедуры, S. aureus может вызывать легкие инфекции, такие как прыщи и фурункулы, или более серьезные, опасные для жизни инфекции, такие как заражение крови и пневмония.Незначительные инфекции S. aureus можно лечить без антибиотиков — например, путем дренирования фурункула. Инвазивные инфекции обычно лечат антибиотиками. К сожалению, многие из циркулирующих в настоящее время клонов S. aureus (группы бактерий, которые все генетически связаны и произошли от одного общего предка) устойчивы к метициллину и некоторым другим антибиотикам. Инвазивные метициллин-резистентные инфекции S. aureus (MRSA) представляют собой особую проблему в больницах и других медицинских учреждениях (так называемые внутрибольничные инфекции MRSA), но они также могут встречаться у здоровых людей, которые не были госпитализированы в больницу. больнице (внебольничные инфекции MRSA).

    Почему было проведено это исследование?

    Тяжесть и исход инфекции S. aureus у человека частично зависят от способности бактериального клона, которым инфицирован человек, вызывать заболевание — «вирулентности» клона. Должностные лица органов здравоохранения и эксперты по инфекционным заболеваниям хотели бы знать географическое распространение вирулентных клонов S. aureus , вызывающих инвазивные инфекции, поскольку эта информация должна помочь им понять, как распространяются эти патогены и, таким образом, как с ними бороться.Разные клоны S. aureus можно различить с помощью «молекулярного типирования» — определения клоноспецифических последовательностей нуклеотидов в вариабельных областях бактериального генома (чертеж бактерии; геномы состоят из ДНК, длинных цепочек нуклеотидов). В этом исследовании исследователи используют молекулярное типирование для картирования географического распространения MRSA и метициллин-чувствительных клонов S. aureus (MSSA), вызывающих инвазивные инфекции в Европе; клон MRSA появляется, когда клон MSSA приобретает устойчивость к антибиотикам от другого типа бактерий, поэтому полезно понимать географическое распространение как MRSA, так и MSSA.

    Что сделали и нашли исследователи?

    В период с сентября 2006 г. по февраль 2007 г. 357 лабораторий, обслуживающих 450 больниц в 26 европейских странах, собрали почти 3000 изолятов MRSA и MSSA от пациентов с инвазивными инфекциями S. aureus . Изоляты были отправлены в соответствующую национальную стафилококковую референс-лабораторию (SRL), где они были охарактеризованы с помощью контролируемого качества типирования последовательности вариабельной области стафилококкового гена, названного spa (типирование spa ).Данные набора spa были введены в центральную базу данных, а затем проанализированы общедоступным, специально созданным картографическим веб-инструментом (SRL-Maps), который обеспечивает интерактивный доступ и простые для понимания иллюстрации географического распределения . Клоны S. aureus . Используя этот картографический инструмент, исследователи обнаружили широкое географическое распространение спа-типов по всей Европе, при этом некоторые типы распространены во всех европейских странах. Изоляты MSSA были более разнообразны, чем изоляты MRSA, а генетическое разнообразие (изменчивость) MRSA значительно различалось между странами.Что наиболее важно, основные типы MRSA spa встречались в отдельных географических кластерах.

    Что означают эти данные?

    Эти находки представляют собой первый репрезентативный снимок генетической структуры популяции S. aureus в Европе. Поскольку исследователи использовали типирование spa , которое анализирует только небольшую область одного гена и охарактеризовало только 3000 изолятов, теперь необходим анализ других частей генома S. aureus в большем количестве изолятов, чтобы построить полный портрет географическое обилие S.aureus , которые вызывают инвазивные инфекции в Европе. Однако тот факт, что типы MRSA spa встречаются в основном в географических скоплениях, имеет важное значение для борьбы с MRSA, поскольку он указывает на то, что ограниченное число клонов распространяется в сетях здравоохранения, а это означает, что MRSA в основном распространяется пациентами, которые неоднократно госпитализируются в разные стационары. Исследователи предполагают, что усилия по контролю, направленные на прекращение этого распространения внутри и между учреждениями здравоохранения, могут быть осуществимы и в конечном итоге успешны, и их следует всячески поощрять.Кроме того, это исследование показывает, как, обмениваясь результатами типирования на веб-платформе, международная сеть эпиднадзора может предоставить клиницистам и группам инфекционного контроля важную информацию о динамике патогенов, таких как S. aureus , включая ранние предупреждения о появление вирулентных клонов.

    Введение

    Staphylococcus aureus является основной причиной гнойных инфекций у человека [1]. S. aureus обладает потенциалом локальной, а также диссеминированной инфекции и может вызывать поражения во всех тканях и анатомических участках.Инфекции могут быть приобретены в обществе или в связи с оказанием медицинской помощи. Положение S. aureus как одного из важнейших патогенов человека во многом обусловлено его вирулентным потенциалом и повсеместным распространением в качестве колонизатора у людей, домашних животных и домашнего скота [2]. От 25% до 35% здоровых людей являются носителями S. aureus на коже или слизистых оболочках [3]. Любое повреждение, нарушающее целостность эпителия, травмы, медицинские или хирургические вмешательства, а также вирусные инфекции могут привести к инвазии тканей [4]–[6].Предполагается, что тяжесть и исход во многом зависят от вирулентности введенного штамма и иммунного репертуара хозяина [7], [8]. Иногда S. aureus приобретает повышенную вирулентность и устойчивость к противомикробным препаратам за счет горизонтального переноса ДНК и поддерживает эти мобильные генетические элементы в преимущественно клональном геномном фоне. Таким образом, клоны S. aureus относительно стабильны и диверсифицируются в основном за счет накопления одиночных нуклеотидных замен при отсутствии частой межштаммовой рекомбинации.Таким образом, можно различать разные клоны и клональные линии с помощью молекулярного типирования [9]. Этот метод позволяет сделать несколько важных наблюдений относительно эволюции, эпидемиологии и распространения клонов, имеющих особое значение для общественного здравоохранения, таких как метициллин-резистентный штамм S. aureus (MRSA), устойчивый к метициллину, связанный с больницами, местным населением и домашним скотом. В отношении MRSA такое наблюдение особенно важно, поскольку, по-видимому, некоторые клоны распространились по обширным географическим регионам и угрожают значительным улучшениям в лечебной медицине и здравоохранении [10].Однако географически подробное описание этого расширения в масштабах всего континента было неадекватным из-за отсутствия соответствующих исследований и согласия в отношении последовательного применения стандартизированных подходов молекулярного типирования. В то же время мало что известно о структуре популяции и географическом распространении метициллин-чувствительного S. aureus (MSSA), который обеспечивает генетический резервуар, из которого возникает MRSA.

    Настоящее исследование было разработано, чтобы заполнить эти пробелы в знаниях и предоставить (i) первый репрезентативный и современный снимок генетической структуры популяции S.aureus (на основе типирования spa ), которые вызывают инвазивную инфекцию в Европейском регионе; (ii) понимание географического распределения различных клонов среди MSSA и MRSA в масштабе всего континента; и (iii) общедоступный картографический веб-инструмент, обеспечивающий интерактивный доступ и интуитивно понятную иллюстрацию результатов, полученных в результате этой крупномасштабной инициативы по набору текста. Текущее исследование также было организовано для создания логистики для будущих совместных исследований, которые продолжат улучшать важные знания для клиницистов и диагностических лабораторий о географической и временной динамике клонов MSSA / MRSA и их эпидемических характеристиках в соседних географических районах.Наконец, исследование предназначено для дополнительного усиления роли референс-лабораторий (SRL) S. aureus путем выявления и информирования медицинских работников и широкой общественности о потенциально важных угрозах общественному здоровью.

    Методы

    спа Набор текста

    При эпидемиологическом типировании используются очень дискриминационные генетические маркеры, которые характеризуют патогены человека, что позволяет идентифицировать изоляты, которые тесно связаны из-за недавнего общего происхождения.Локус spa S. aureus кодирует белок А, видоспецифичный генный продукт, известный своей способностью связывать IgG. Этот локус обладает высокой полиморфностью за счет внутренней вариабельной области коротких тандемных повторов, которые различаются не только числом, но и нуклеотидными заменами в пределах отдельных повторяющихся единиц [11]. Таким образом, последовательности ДНК гена spa обеспечивают портативные, однозначные и биологически значимые данные молекулярного типирования, которые продемонстрировали свою полезность для эпидемиологических целей, таких как исследования передачи и вспышек на различных географических уровнях [12], [13].

    Наращивание потенциала

    В ходе трех семинаров, организованных для технического персонала из 28 европейских SRL, участники прошли практическое обучение типированию последовательности spa и анализу последовательности spa в соответствии со стандартным протоколом с использованием специально разработанного программного инструмента StaphType, разработанного Ridom GmbH. [13]. Проверку квалификации проводили путем отправки в каждый SRL пяти хорошо охарактеризованных изолятов S. aureus и пяти хроматограмм последовательностей (файлов трассировки) известных типов spa , как описано ранее [14], [15].Все лаборатории, участвовавшие в описанном здесь структурированном опросе, соответствовали поддающимся количественной оценке критериям качества, которые заключались в однозначном базовом вызове всех секвенированных нуклеотидов как для прямого, так и для обратного секвенирования тестовой панели.

    Структурированный опрос

    Протокол был составлен и разослан для комментариев всем SRL и согласован в апреле 2006 г. В соответствии с этим протоколом европейским SRL было предложено определить примерно 20 лабораторий, которые обслуживают больницы и которые географически и демографически репрезентативны для их страны, и обеспечить их безопасность. участие.Эти лаборатории были выбраны из тех, которые регулярно участвуют в Европейской системе наблюдения за устойчивостью к противомикробным препаратам (EARSS). В течение 6 месяцев, с сентября 2006 г. по февраль 2007 г., этих участников попросили представить первые пять последовательных изолятов MSSA и первые пять последовательных изолятов MRSA от отдельных пациентов с инвазивной инфекцией. Инвазивную инфекцию определяли как локализованную или системную воспалительную реакцию на присутствие S. aureus в стерильных анатомических участках.Изоляты были отправлены участвующими лабораториями в SRL вместе с дополнительной информацией, включая идентификатор лаборатории EARSS, номер образца, дату выделения, происхождение клинического образца, демографические данные (такие как возраст и пол), эпидемиологический контекст (больница, приобретенный, когда симптомы развились более чем через 48 часов после госпитализации или как внебольничное начало в противном случае), устойчивость к изоксазолилпенициллину (т.е. оксациллину) или цефокситину и смертность от всех причин через 14 дней после выделения первого инвазивного изолята.SRL подтвердили MRSA с помощью ПЦР mec A или определения минимальной ингибирующей концентрации оксациллина вместе с агглютинацией PBP2a. Дополнительные данные загружались в базу данных и веб-приложение, если они были доступны. Они включали типирование стафилококковой кассеты хромосомы mec (SCC mec ) и идентификацию генов luk -PV, указывающих на лейкоцидин Пантона-Валентина (PVL). Все SRL сохранили изоляты в коллекциях штаммов и выполнили типирование последовательности spa в соответствии со стандартным протоколом, загрузили информацию о последовательности и сделали ее доступной путем синхронизации с центральным сервером Ridom SpaServer (www.spaserver.ridom.de), созданный SeqNet.org в Институте гигиены Университетской больницы Мюнстера, Германия [15], [16]. Качество представленных последовательностей контролировалось путем сравнения с сопровождающими хроматограммами (файлами трассировки) и исключалось, если не выполнялись строгие критерии качества для отличных данных секвенирования. Типы spa были сгруппированы в комплексы spa , если одно генетическое событие, такое как одиночные вставки, одиночные делеции или полиморфизм одного нуклеотида, могло объяснить наблюдаемое расхождение последовательностей.В дальнейшем обозначения типов spa , обозначенные строчной буквой «t», соответствуют номенклатуре, используемой сервером spa , а многолокусные типы последовательностей указываются как тип последовательности (ST) в соответствии с соглашением [17]. Наконец, тип SCC mec также добавляется к строке, состоящей из spa type/ST/SCCmec, все в скобках, например, (t032/ST22/SCC mec IV).

    Эпидемиологические данные и данные о типировании были переданы параллельно в центральную базу данных SQL в Национальном институте общественного здравоохранения и окружающей среды (RIVM) Нидерландов.Для каждой участвующей лаборатории SRL также предоставили почтовый адрес и указали свой административный регион (например, регион, провинция, штат, департамент или уровень NUTS-2), если расположение лабораторий должно было быть агрегировано на более высоком административном географическом уровне для отображения. на интерактивном картографическом инструменте (который был сделан только для Австрии, Бельгии, Чехии и Польши). Все данные были анонимными и собирались в соответствии с решением Европейского парламента и Совета по эпидемиологическому надзору и контролю за инфекционными заболеваниями в Европейском сообществе [18], [19].Таким образом, не требовалось этического одобрения и информированного согласия.

    Анализ данных, географическая иллюстрация и идентификация кластеров

    Все данные были проверены на предмет несоответствий и проанализированы по каждой стране и возвращены в SRL для обратной связи, разъяснения несоответствий и окончательного утверждения в феврале 2008 года. После окончательного утверждения данные были проанализированы с использованием Stata версии 10 и SAS версии 9.1 ( SAS Institute Inc.) с использованием критерия хи-квадрат для пропорций и критерия Стьюдента t для непрерывных переменных.Индекс разнообразия является объективной мерой вероятности выпадения двух разных типов spa при условии распределения типов spa в выборке. 95% доверительные интервалы (ДИ) рассчитывали, как описано ранее [20]. Почтовые адреса и местонахождение всех лабораторий по отбору проб были преобразованы в десятичные декартовы координаты с использованием средства геокодирования на сайте www.spatialepidemiology.net [21]. Были рассчитаны попарные расстояния между лабораториями, которые выделили MSSA и MRSA с идентичными типами spa , а матрицы расстояний были суммированы и сопоставлены с помощью непараметрических тестов.Веб-приложение SRL-Maps (http://www.spatialepidemiology.net/srl-maps) было разработано для опроса данных на основе картографических расположений лабораторий и центроидов административных районов (когда лабораторные результаты агрегировались на уровне административного района).

    Статистика пространственного сканирования использовалась для определения географического распределения конкретных типов курортов на двух уровнях: (i) частоты для конкретных стран, которые учитывают все типы спа в пределах национальных границ, и (ii) региональные кластеры различного размера. независимо от государственных границ.Чтобы идентифицировать видов spa с более высокой, чем ожидалось, встречаемостью в любой из участвующих стран, наблюдаемое количество всех видов spa , выделенных в каждой стране, сравнивали с числом, ожидаемым при допущении общеевропейского случайного распределения. Для идентификации региональных кластеров были спроектированы круглые окна вокруг всех лабораторий. Для каждой локации радиус окна варьировался от 0 до 1000 км. Таким образом, было создано конечное число отдельных окон.Для каждого окна наблюдаемое количество изолятов с определенным типом spa сравнивали с ожидаемым количеством при допущении случайного распределения. Было получено 10 000 случайных распределений путем изменения состава локальных типов spa во всех местоположениях лаборатории в соответствии с кумулятивными частотами, характерными для spa , с использованием моделирования Монте-Карло. Статистика теста была рассчитана с помощью теста логарифмического отношения правдоподобия, согласно которому страны или окна, в которых наблюдаемые частоты типа spa отличались от частот, полученных с помощью моделирования, считались содержащими значительные кластеры с альфа-ошибкой p <0.0001. Статистика сканирования была выполнена с помощью программного обеспечения SaTScan с использованием макросов SAS [22], [23].

    Результаты

    Сводная статистика

    26 SRL из 26 стран удовлетворительно выполнили критерии квалификации для типирования последовательности spa и предоставили данные для окончательного анализа. В период с сентября 2006 г. по февраль 2007 г. 357 лабораторий, обслуживающих 450 больниц (рис. 1), собрали 2890 последовательных изолятов MSSA и MRSA от пациентов с инвазивной инфекцией S. aureus (2603 из культур крови, 90.1%; 17 из спинномозговой жидкости — 0,6%; и 270 из пункционных жидкостей других нормально стерильных анатомических областей, 9,3%). Окончательная проверка данных выявила недостающую информацию о поле (28 изолятов, 1 %), возрасте (54 изолята, 1,9 %), датах отбора проб (74 изолята, 2,6 %), эпидемиологическом контексте (появление в сообществе или в больнице, 568 изолятов, 19,7 %). , смертность от всех причин через 14 дней после изоляции S. aureus (1052 изолята, 36,4%) и типа spa (40 изолятов, 1,4%). В Таблице 1 представлен краткий обзор числа участвующих лабораторий, изолятов и видов spa , представленных по странам.Многие лаборатории не смогли собрать пять изолятов инвазивного MRSA в течение периода отбора проб из-за низкой заболеваемости MRSA в обслуживаемых ими больницах. Таким образом, объединенная коллекция на две трети состояла из MSSA (1923; 66,5%) и на одну треть из MRSA (967; 33,5%, таблица 2). Пациенты с инвазивными инфекциями MRSA были старше (рис. 2) со средним возрастом 69 лет по сравнению со средним возрастом 63 года у пациентов с MSSA ( p <0,001). Кроме того, у пациентов с MRSA была более высокая смертность от всех причин (20.8%) через 14 дней после первого выделения S. aureus , чем у пациентов с MSSA (13,2%, p <0,0001). Больше мужчин (1765/2862; 61,7%), чем женщин, имели инвазивные инфекции S. aureus . Доля MRSA по сравнению с MSSA не различалась между полами ( p  = 0,2). Из 231 MRSA, которые были зарегистрированы как внебольничные (CO-MRSA), 226 (97,8%) были протестированы на наличие связанных с PVL генов luk -PV, и десять (4,4%) были положительными. Из 585 внутрибольничных MRSA (HA-MRSA) 551 (94.2%) были протестированы на PVL, и шесть (1,1%) были положительными. Разница была значимой ( p  = 0,009).

    спа Набор текста

    Всего было зарегистрировано 660 spa типов (табл. 2). Среди всех видов spa 565 и 155 были отнесены к MSSA и MRSA, соответственно, из которых 505 были идентифицированы исключительно как MSSA, а 95 — только к MRSA. 60 типов spa содержали как MSSA, так и MRSA. 27 изолятов MSSA (1,4%) и 13 изолятов MRSA (1,3%) оказались нетипируемыми.В таблице 3 показан порядок ранжирования наиболее часто встречающихся типов spa , выделенных в ходе исследования, а в таблице 4 — три наиболее часто встречающихся типа spa по странам. MRSA был менее разнообразен, чем MSSA. Только на пять типов spa приходится почти половина (48,1%) всех изолятов MRSA, тогда как такая же доля изолятов MSSA приходится на 26 наиболее часто встречающихся типов MSSA spa . Оценки генетического разнообразия значительно различались при индексе разнообразия MSSA, равном 0.985 (95% ДИ 0,983–0,987) и 0,940 (95% ДИ 0,933–0,947) для MRSA. В то время как разнообразие MSSA колебалось от 0,934 в Латвии до 1,0 в Исландии (неопубликованные данные), разнообразие MRSA между странами было более неоднородным: от 0,62 в Румынии до 0,91 в Австрии (рис. 3), что указывает на присутствие нескольких доминирующих типов MRSA spa в несколько стран. Соответственно, MRSA показал более высокую степень географической кластеризации, поскольку среднее расстояние между лабораториями, которые выделили один и тот же тип spa , было значительно меньше, чем для MSSA (таблица 2).Корреляции между генетическим разнообразием MRSA и общей долей MRSA среди 90 458 инфекций кровотока, вызванных S. aureus 90 459, на уровне страны по данным базы данных EARSS за 2007 г. обнаружено не было ( r  = −0,09, p  = 0,75) [24]. ], что указывает на то, что единичные успешные видов spa не могут объяснить разницу в доле MRSA, вызывающих S. aureus инфекций кровотока, наблюдаемых в Европе.

    Рисунок 3. Оценки генетического разнообразия по конкретной стране, выраженные в виде индекса Симпсона разнообразия видов spa (в процентах) для MSSA (голубые ромбы) и MRSA (темно-синие ромбы) и 95% ДИ (столбики).

    На этот рисунок были включены только страны, для которых была доступна информация о типе spa для более чем десяти изолятов MRSA.

    https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1000215.g003

    Кластеризация типов

    spa на уровне страны и региона

    В 17 странах обнаружено 22 spa типов с неожиданными частотами при применении гипотезы о случайном распределении, свидетельствующем о локальных эпидемиях (табл. 5).Большинство (86,9%) из них были MRSA. В десяти странах два типа spa сосуществовали с неожиданной частотой. В четырех из них эти два типа spa показали близкое генетическое родство и принадлежали к одному и тому же комплексу spa , при этом одно генетическое событие могло объяснить расхождение последовательностей между типами. Также имело место частое региональное совпадение с соседними странами, имеющими идентичные эпидемические spa типы. Чехия и Германия поделились spa типа t003 (t003/ST225/SCC mec II), Болгария и Румыния поделились t030 (t030/ST239/SCC mec III), Великобритания и Ирландия t032 (t032/ST22/ SCC mec IV), Италия и Хорватия имеют общий t041 (t041/ST228/SCC mec I) и штамм t067 (t067/ST5125/SCC mec IV), чье доминирование в Испании впервые было выявлено благодаря этой инициативе [25]. ], также был найден на юге Франции.Понятие регионального распространения было поддержано кластерной статистикой, которая проецировала окна за пределы национальных границ для этого набора данных (таблица 6). Степень неожиданности, которая указывает на значимость каждого кластера, выражается логарифмическим отношением правдоподобия (LLR). Большинство региональных кластеров выходили за пределы национальных границ, и 74% всех изолятов, обнаруженных в этих кластерах, были MRSA. Наиболее значительный кластер был выявлен в Испании и состоял из spa типа t067 (t067/ST5&125/SCC mec IV).Северный балканско-адриатический кластер, состоящий из spa type t041 (t041/ST228/SCC mec I), был обнаружен в Австрии, Венгрии, Словении, Хорватии, северной и центральной Италии. В Великобритании и Ирландии t032 (t032/ST22/SCC mec IV), известный как эпидемический MRSA 15 (EMRSA-15), был доминирующим типом и представлял собой третий по значимости кластер. Дополнительное скопление spa типа t032, хотя и менее значительное и гораздо меньшее, располагалось в районе Бранденбурга в Германии.Центральная Германия, Чехия и западная Польша были включены в крупный региональный кластер spa типа t003 (t003/ST225/SCC mec II), который был географически сосредоточен в Саксонии и имел радиус примерно 400 км, соответствующий в немецкие больницы, участвующие в исследовании. На рис. 4 представлена ​​географическая иллюстрация этих кластеров. Крупнейший по размеру и численности кластер (радиус 930 км, 119 изолятов) состоял из spa типа t008 и располагался в центре южной Франции.Этот кластер состоял из ST8 и содержал разные субклоны, поскольку он включал как MSSA, так и MRSA, а изоляты MRSA демонстрировали два разных элемента SCCmec ( SCCmec I и IV). Меньший кластер, занимающий шестое место по значимости, располагался во Фландрии на бельгийско-голландской границе и состоял из spa type t740 (t740/ST45/SCC mec IV). Интересно, что региональные кластеры spa с перекрывающимся географическим ареалом часто состояли из типов spa , которые принадлежали к одному и тому же комплексу spa , что ясно указывает на то, что локальное распространение сопровождается локальной эволюцией быстро развивающегося локуса spa .Кластеры с наименьшим размером (0 км) включали кластеры, представленные отдельными лабораториями, которые, скорее всего, отражали вспышки в отдельных больницах. Три региональных кластера состояли только из MSSA. Они были обнаружены в Латвии (t435/ST425), Польше (t127/ST1) и Дании (t230/ST45), что указывает на то, что региональное распространение S. aureus не ограничивается одним MRSA.

    Рисунок 4. Расположение лабораторий, выделяющих S. aureus из spa типов t067, t041, t032 и t003, которые являются четырьмя наиболее значительными региональными кластерами на SRL-картах.

    Цифры внутри каждой метки представляют количество изолятов, а цвета представляют фенотипы резистентности: красный — MRSA; зеленый, МССА; желтый, смесь MRSA и MSSA.

    https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1000215.g004

    SRL-карты

    Веб-приложение SRL-Maps (http://www.spatialepidemiology.net/srl-maps) предоставляет общественный инструмент для исследования географического распространения различных видов spa . Все лаборатории и регионы по всей Европе представлены в виде меток на карте Google.При нажатии на метку под картой отображаются все спа-типов , идентифицированных в этом месте (и их частота), а также количество изолятов (и количество географических местоположений), найденных в других местах (если таковые имеются) для каждого из этих спа-. типов (рис. 5). Затем можно отобразить европейское распространение любого типа spa , а метки на карте имеют цветовую маркировку в зависимости от того, являются ли изоляты в каждом месте все MSSA (зеленые), все MRSA (красные) или представляют собой смесь MSSA и MRSA (желтые) с количеством изолятов внутри метки.Отображаются графические диаграммы, показывающие spa типоспецифическую пропорцию MRSA/MSSA, смертность от всех причин через 14 дней и возрастное распределение среди случаев (рис. 5). Этот метод позволяет идентифицировать и картировать штаммы, имеющие особое значение для общественного здравоохранения, и поощряется дальнейшее исследование научным сообществом.

    Рисунок 5. Расположение лабораторий, выделяющих S. aureus spa типа t067 (как показано на рисунке 4), вид с использованием SRL-Maps. Показаны изоляты

    из LAB ES056 в Мадриде, Испания, и распределение всех других изолятов t067 ( n  = 62).Каждая метка указывает, являются ли изоляты MSSA (зеленый), MRSA (красный) или смесью (желтый), а выбранная лаборатория выделена синим цветом. Номера изолятов указаны внутри метки. На круговых диаграммах справа показана доля MRSA/MSSA и смертности от всех причин через 14 дней, а на гистограмме показано распределение пациентов по возрасту.

    https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1000215.g005

    Наблюдения за конкретными

    spa Типами

    Как для изолятов MSSA, так и для MRSA не было обнаружено связи между специфическими типами spa и смертностью от всех причин через 14 дней, что указывает на то, что ни один тип spa не был связан с гипервирулентностью.Из десяти изолятов CO-MRSA, которые оказались положительными на PVL, три были отнесены к spa типа t044 (t044/ST80/SCC mec IV), так называемому европейскому внебольничному (CA)–MRSA. , а еще три имели spa тип t008 (t008/ST8/SCC mec IV) и неотличимы от USA300 CA-MRSA. Из четырех других PVL-положительных CO-MRSA два принадлежали к t622 ( spa комплекс 8/ST8/SCC mec IV), один к t529 (ST1043/SCC mec V) и один к t437 (не дополнительно охарактеризовать).MRSA, относящийся к ST398, недавно появился в нескольких европейских странах и рассматривается как связанный с домашним скотом (LA-MRSA). Из всех типов spa , обычно связанных с этим клоном, типов spa t011, t034, t571, t1255 и t2383 были идентифицированы в 12 случаях (1,3%) в восьми странах во время этого исследования. Однако ни один из этих изолятов не проявлял фенотипа MRSA и не содержал гена mecA .

    Обсуждение

    Преобладающие виды spa показали широкое географическое распространение.Среднее расстояние между местами, из которых были отобраны образцы видов spa , было меньше для изолятов MRSA, чем для изолятов MSSA, что свидетельствует о более высокой степени географической кластеризации MRSA. Более того, генетическое разнообразие инвазивного MRSA было намного ниже, чем MSSA, и значительно различалось между странами. Статистика пространственного сканирования подтвердила фундаментальное различие между MRSA и MSSA в отношении регионального распространения. Большинство изолятов, сформировавших региональные кластеры, были MRSA, и 13 из 15 основных типов MRSA spa (определяемых как более десяти изолятов в базе данных) встречались в географических кластерах.Как правило, они приобретались в больнице, и в одном и том же регионе накладывалось не более трех кластеров. И наоборот, из 27 основных типов MSSA spa только пять показали значительную географическую кластеризацию и только три состояли только из MSSA. Таким образом, инвазивные клоны MRSA в Европе проявляют типичное эпидемическое поведение и имеют преимущественно региональное распространение. Чтобы выяснить динамику распространения этих эпидемических MRSA, необходимо повторять данный тип обследования каждые несколько лет.

    Появление MRSA происходит в результате приобретения детерминанты устойчивости к метициллину (SSC mec ) штаммами MSSA.Штаммы MRSA обычно возникают из наиболее распространенных штаммов MSSA, и это редкое явление, хотя новые данные свидетельствуют о том, что это происходит чаще, чем первоначально предполагалось [26], [27]. Таким образом, существует меньше клонов MRSA по сравнению с клонами MSSA, и они очень молоды в эволюционных масштабах (менее 50 лет) и у них было мало времени для диверсификации с момента их возникновения, тогда как MSSA намного старше и, следовательно, более разнообразны. Клоны MRSA также размножаются из-за селективных сил, вызванных интенсивным использованием антибиотиков в больницах, и условий, способствующих передаче внутри и между больницами, что ограничивает их разнообразие.Напротив, MSSA будут подвергаться гораздо более слабому отбору, что приведет к нейтральному генетическому дрейфу, который сохранит их разнообразие. Географическому распространению клонов MRSA будут способствовать повторные госпитализации и направления к специалистам носителей MRSA [28], которые обычно принадлежат к более старому и, следовательно, менее мобильному сегменту населения. Более широкое распространение клонов MSSA может отражать распространение хозяевами с иными схемами передвижения, чем у носителей MRSA, а также более длительное время, в течение которого клоны MSSA должны были распространяться.

    Настоящее исследование создало несколько прецедентов в области молекулярной эпидемиологии S. aureus . Во-первых, он объединил референс-лаборатории из 26 европейских стран, приняв стандартизированный метод типирования на основе последовательности ДНК с контролем качества; во-вторых, он предоставил одновременный и всеобъемлющий снимок популяции изолятов S. aureus от инвазивного заболевания с использованием согласованной основы выборки; в-третьих, он использовал современную статистику пространственного сканирования для выявления географической кластеризации; в-четвертых, он предоставил первый общедоступный интерактивный картографический веб-инструмент для будущих исследований в области общественного здравоохранения; и, наконец, он укрепил рамки сотрудничества для продолжения этой важной европейской инициативы по наблюдению.

    Все государства-члены Европейского Союза, за исключением Эстонии, Литвы, Люксембурга и Словакии, приняли участие и в разной степени добились регистрации диагностических лабораторий по всей стране. В преддверии этого исследования были предприняты успешные усилия по согласованию единого подхода к молекулярному типированию для расширения возможностей типирования и улучшения оценки качества путем введения проверки квалификации для SRL, предназначенных для участия в передовых исследованиях S. aureus. наблюдение. Эти усилия послужили основой для выполнения взаимно согласованного протокола с использованием стандартизированной структуры выборки и подхода генетического типирования с контролируемым качеством [12], [15], основанного на секвенировании вариабельной области S.aureus spa (типирование spa ) [11]. Многолокусное типирование последовательностей (MLST) также было проведено для многих штаммов, что позволило связать большинство распространенных типов spa с типами последовательностей MLST. Тем не менее, учитывая масштабы и амбициозность этого исследования, неудивительно, что исследование все же страдало несколькими операционными недостатками.

    Чтобы объем работы для участвующих SRL был управляемым, было решено включить около 20 лабораторий, демографически и географически репрезентативных для каждой из участвующих стран.Это число является произвольным и не может в равной степени представлять малые и большие страны. Таким образом, точность статистики пространственного сканирования снижается в районах с низкой плотностью лабораторий. Зачисление в лабораторию на основе размера населения обеспечило бы более подходящую стратегию выборки, но также потребовало бы пропорционального и часто неприемлемого объема работы над SRL в больших странах, если бы размер выборки из малых стран оставался значимым. Даже страны среднего размера, такие как Болгария, Финляндия, Греция и Румыния, не смогли зарегистрировать предполагаемое количество лабораторий в основном по техническим и логистическим причинам.Естественно, количество лабораторий и изолятов варьировалось в зависимости от страны, и геодемографическое представление могло бы быть улучшено в будущих исследованиях. Первоначальное намерение состояло в том, чтобы собрать одинаковое количество последовательных MSSA и MRSA во всех лабораториях в течение 6-месячного интервала отбора проб; это оказалось нереальным, особенно в странах с низким уровнем MRSA. В результате Норвегия и Исландия не смогли предоставить ни одного MRSA, тогда как Швеция, Дания и Нидерланды предоставили менее десяти изолятов каждая.На Кипре и Мальте была только одна участвующая лаборатория, но, поскольку обе они обеспечивают микробиологическую службу для всего соответствующего островного населения (для Кипра только Республика Кипр), они имели право представить до 20 изолятов. Тем не менее, даже принимая во внимание эти потенциальные проблемы, одновременный сбор 2890 изолятов от пациентов с инвазивной инфекцией S. aureus , пролеченных в 450 больницах в течение 6-месячного интервала исследования, не имеет себе равных и остается непревзойденным в предыдущих исследованиях, которые привлекли их внимание. выводы из удобных образцов преимущественно MRSA, собранных лабораториями по различным клиническим или биологическим причинам.Текущая коллекция включает одну треть MRSA и, таким образом, чрезмерно представляет естественную популяцию MRSA, вызывающих инвазивные заболевания, которая в 2007 г. в Европейском Союзе составляла 22% [24]. Все изоляты были собраны в лабораториях и больницах, участвующих в EARSS, для которых известны оценки общей популяции охвата. Таким образом, нынешняя выборка больниц обслуживала около 22 миллионов человек, что составляет 4,4% граждан, проживающих в Европейском Союзе.

    Несмотря на вышеуказанные ограничения, образец дает реалистичное представление об эпидемиологии S.aureus , в настоящее время вызывающий инвазивную инфекцию в Европе. Возрастное распределение и смертность от всех причин соответствовали ожидаемому диапазону [29], [30]. Установлена ​​высокая частота инвазивных инфекций в самых маленьких (младенцы и дети до 5 лет) и старших возрастных группах, при этом мужчины явно более подвержены риску, чем женщины. Пациенты с MRSA были старше, чем пациенты с MSSA, и у них в 2,4 раза выше вероятность того, что их инфекция была связана с госпитализацией ( p <0,0001).Инвазивный MRSA вызывал более высокую смертность от всех причин через 14 дней. Этот вывод, скорее всего, сбивает с толку множество переменных, которые принципиально отличают пациентов с MRSA от пациентов с MSSA. Смертность от всех причин не зависела от типа spa , что указывает на то, что в этом исследовании не было выявлено какого-либо одного типа spa , который выделялся бы в отношении гипервирулентности или других факторов, которые могли бы увеличить риск летального исхода через 14 дней. В то время как лабораторное перекрестное исследование имеет ограниченную способность контролировать многие важные искажающие факторы, такие как сопутствующие заболевания и оценки тяжести заболевания, и, следовательно, может не обнаруживать тонкие различия в свойствах вирулентности между различными клональными линиями на уровне пациента, эта выборка дает непредвзятую оценку частот конкретных типов spa , которые, как ранее сообщалось, вызывали вспышки и привлекали значительное внимание общественного здравоохранения.Немногие изоляты MRSA несут гены токсина PVL, и это может указывать на то, что многие CO-MRSA изначально были приобретены в больнице. Только шесть из PVL-положительных изолятов CO-MRSA, которые составляли 0,5% от общей выборки, имели типов spa , соответствующих клонам CA-MRSA, наиболее часто регистрируемым в Европе (t008/ST8/SCC mec IV и t044/ST80/SCC mec IV) [31]. Эти значения по сравнению с общим числом MRSA невелики, но все же требуют внимания, поскольку PVL-положительные CA-MRSA чаще связаны с инфекциями кожи и мягких тканей и редко обнаруживаются при инфекциях кровотока [31], из которых большинство образцы изолятов были взяты.Ассоциированные с домашним скотом типы spa , принадлежащие к типу последовательности MLST ST398 [32], составили 0,4% от общей выборки. Однако ни один из них не обладал устойчивостью к метициллину, что свидетельствует о низкой частоте системных инфекций человека, вызванных вариантами MRSA этого клона, несмотря на растущий интерес и озабоченность по поводу таких изолятов со стороны органов здравоохранения.

    Принимая решение использовать типирование spa в качестве общей платформы для изучения географической распространенности клонов S. aureus , необходимо принять во внимание различные потенциальные проблемы, которые могут повлиять на наблюдения.Во-первых, одна последовательность примерно из 280 пар оснований при потенциальном иммунном отборе может быть относительно слабым индикатором генетического фона генома, который примерно в 10 000 раз больше, даже у таких видов, как S. aureus , которые эволюционируют. преимущественно клональным путем. Кроме того, конвергентная эволюция может происходить в результате высокой мутабельности повторяющейся области гена spa , используемого при типировании spa [26], [33]. Наконец, типирование spa само по себе может быть недостаточно дискриминационным для различения изолятов MRSA, учитывая, что только пять типов spa составляют почти половину (48.1%) из всех 967 изолятов MRSA, исследованных в этом обзоре. Региональные кластеры, обнаруженные в этом исследовании, дают хорошее указание на то, что гомоплазия не является серьезной проблемой, препятствующей распознаванию клонального распространения в географическом масштабе. Более того, при сравнении профилей agr типа, SCC mec , гена токсина и чувствительности к антибиотикам внутри и между различными типами spa наблюдается значительная согласованность внутри типа spa и несоответствие между типами spa . поддерживает мнение, что в большинстве случаев типирование spa обеспечивает удобный и достоверный маркер для основных клонов и клональных линий [34].

    Чтобы изучить географическое распространение различных видов spa , а также генетические и фенотипические детали изолятов в европейской выборке, читателю предлагается изучить специально разработанное интерактивное веб-приложение SRL-Maps по адресу http:/ /www.spatialepidemiology.net/srl-maps/. Это приложение содержит общедоступные данные, предоставленные научному сообществу и общественному здравоохранению всеми SRL, участвовавшими в исследовании. Это также иллюстрирует потенциал такой коммуникационной платформы.Базовая база данных полностью доступна для поиска, а приложение на основе карты является шаблоном для будущего добавления дополнительной эпидемиологической и биологической информации. Мы считаем, что этот подход к пространственной эпидемиологии станет богатым ресурсом для будущих исследований динамики популяций инфекционных агентов и их эволюции.

    В заключение мы приводим доказательства того, что основные клоны MRSA в Европе встречаются преимущественно в географических кластерах. Это также указывает на то, что MRSA не распространяется свободно в обществе, а распространяется через региональные сети здравоохранения.Этот важный вывод свидетельствует о том, что усилия по контролю, направленные на прекращение распространения внутри медицинских учреждений и между ними, могут быть не только осуществимыми, но и в конечном итоге успешными, и поэтому их следует всячески поощрять. Мы также показали, что международная сеть эпиднадзора, совместно использующая результаты децентрализованного типирования на веб-платформе, может предоставить клиницистам, микробиологам-диагностам и группам инфекционного контроля важную информацию о динамике распространения S. aureus и особенно о распространении изолятов MRSA. , чтобы обеспечить раннее предупреждение о возникающих штаммах, трансграничном распространении и завозе путем путешествий.

    Благодарности

    Авторы хотели бы поблагодарить Каролу Шинкель из RIVM и Tomorrow’s Events за организацию ежегодных семинаров по обучению и планированию; и Роэля Коутиньо, директора Центра инфекционного контроля RIVM, за его поддержку и поддержку организационных усилий в рамках этой инициативы.

    Членами рабочей группы Европейской референс-лаборатории по стафилококкам являются: Hajo Grundmann, David M Aanensen, Cees C.ван ден Вейнгаард, Артур Дж. Сабат, Ян Муилвейк, Йос Монен, Адриана Тами, Тджиббе Донкер, Хельмут Миттермайер, Карина Крживанек, Сабина Штумволл, Вальтер Коллер, Оливье Дени, Марк Стрюленс, Димитр Нашев, Ана Будмир, Смилья Каленик, Деспо Пьериду -Багацуни, Владислав Якубу, Хелена Землячкова, Хенрик Вест, Марит Сёрум, Роберт Сков, Фредерик Лоран, Джером Эттьен, Биргит Стромменгер, Вольфганг Витте, София Вурли, Алкис Ватопулос, Анни Вайнио, Яана Вуопио-Варкила, Миклош Фузи, Эрика Унгвари, Стефан Мурчан, Анджела Россни, Эдвинс Миклашевичс, Арта Балоде, Гуннштейнн Харальдссон, Карл Г.Кристинссон, Моника Монако, Аналиса Пантости, Майкл Борг, Марга ван Сантен-Верхеувель, Ксандер Хьюсденс, Лилиан Марштейн, Тронд Якобсен, Гуннар Сков Симонсен, Марта Айрес-де-Соуза, Эрминия де Ленкастре, Агнешка Лучак-Кадлубовска, Валерия Гриневич, Моника Страут, Ирина Кодита, Мария Перес-Васкес, Оскар Куэвас, Весна Цвиткович Спик, Маника Мюллер-Премру, Сара Хегман, Барбро Олсен-Лильеквист, Мэтью Эллингтон, Анджела Кернс, Робин Кёк, Александр Меллманн, Карстен Беккер, Ульрих Фогель, Брайан Джи .Спратт, Даг Хармсен и Александр В. Фридрих. Принадлежности и контактная информация для этих членов перечислены в тексте S1. Авторский вклад этих членов указан в тексте S2.

    Авторские вклады

    Критерии авторства ICMJE прочитаны и выполнены: HG DMA CCvdW BGS DH AWF. Согласитесь с результатами и выводами рукописи: HG DMA CCvdW BGS DH AWF. Дизайн экспериментов/исследований: HG DH. Проанализированы данные: HG CCvdW BGS AWF. Собраны данные/проведены эксперименты для исследования: HG.Написал первый черновик статьи: HG. В написании статьи участвовали: HG CCvdW BGS DH AWF. Разработан общедоступный интерактивный картографический веб-инструмент: DMA. Проведена статистика пространственного сканирования: CCvdW. Предоставление научных рекомендаций, совместно разработанные картографические инструменты, совместное редактирование рукописи: BGS. Разработал программное обеспечение SpaTyper, участвовал в организации семинаров по наращиванию потенциала, поддерживал и обслуживал SpaServer: DH. Поддерживал базу данных SeqNet.org, участвовал в организации семинаров по наращиванию потенциала, отвечал за проверку квалификации, выполнял BURP-кластеризацию: AWF.

    Каталожные номера

    1. 1. Lowy FD (1998) Staphylococcus aureus инфекций. N Engl J Med 339: 520–532.
    2. 2. Morgan M (2008) Метициллин-резистентный Staphylococcus aureus и животные: зооноз или гуманоз? J Antimicrob Chemother 62: 1181–1187.
    3. 3. Wertheim HF, Melles DC, Vos MC, van Leeuwen W, van Belkum A, et al. (2005) Роль назального носительства в инфекциях Staphylococcus aureus .Ланцет Infect Dis 5: 751–762.
    4. 4. Trilla A, Miro JM (1995)Выявление пациентов с высоким риском инфекций Staphylococcus aureus : инфекции кожи и мягких тканей. Дж. Чемотер 7: S37–S43.
    5. 5. Gold LC, Barbour SD, Guerrero-Tiro LM, Koopot R, Lewis K, et al. (1996) Staphylococcus aureus эндокардит, связанный с инфекцией ветряной оспы у детей. Pediatr Infect Dis J 15: 377–379.
    6. 6. Burgess AM, Gromley CF (1930) Пневмония в связи с эпидемией легкого гриппа с сообщением о трех молниеносных случаях, по-видимому, из-за Staphylococcus aureu s.N Engl J Med 202: 261–264.
    7. 7. Кроз М., Даувальдер О., Думитреску О., Бадью С., Жиллет Ю. и др. (2009)Сывороточные антитела против лейкоцидина Пантона-Валентайна в нормальной популяции и во время инфекции Staphylococcus aureus . Clin Microbiol Infect 15: 144–8.
    8. 8. Tacconelli E, Pop-Vicas AE, D’Agata EM (2006)Увеличение смертности среди пожилых пациентов с бактериемией, устойчивой к метициллину Staphylococcus aureus . J Hosp Infect 64: 251–256.
    9. 9. Feil EJ, Cooper JE, Grundmann H, Robinson DA, Enright MC, et al. (2003) Насколько клональным является Staphylococcus aureus ? J Bacteriol 185: 3307–3316.
    10. 10. Oliveira DC, Tomasz A, de Lencastre H (2002)Секреты успеха человеческого патогена: молекулярная эволюция пандемических клонов метициллин-резистентного Staphylococcus aureus . Ланцет Infect Dis 2: 180–189.
    11. 11. Frénay HM, Bunschoten AE, Schouls LM, van Leeuwen WJ, Vandenbroucke-Grauls CM, et al.(1996) Молекулярное типирование метициллин-резистентного Staphylococcus aureus на основе полиморфизма гена белка А. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 15: 60–64.
    12. 12. Хармсен Д., Клаус Х., Витте В., Ротгангер Дж., Клаус Х. и др. (2003)Типирование метициллин-резистентного Staphylococcus aureus в условиях университетской больницы с использованием нового программного обеспечения для определения спа-повторов и управления базой данных. J Clin Microbiol 41: 5442–5448.
    13. 13.Меллманн А., Фридрих А.В., Розенкеттер Н., Ротгангер Дж., Карч Х. и др. (2006) Автоматизированная система раннего предупреждения на основе последовательности ДНК для обнаружения вспышек метициллин-резистентного Staphylococcus aureus . PLoS Мед 3: e33.
    14. 14. Айрес-де-Соуза М., Бойе К., де Ленкастр Х., Деплано А., Энрайт М.С. и др. (2006)Высокая межлабораторная воспроизводимость типирования бактерий на основе последовательности ДНК в многоцентровом исследовании. J Clin Microbiol 44: 619–621.
    15. 15.Фридрих А.В., Витте В., Хармсен Д., де Ленкастр Х., Гриневич В. и соавт. (2006) SeqNet.org: европейская сеть лабораторий для типирования микробных патогенов на основе последовательностей. Euro Surveill 11(2): pii = 2874. Доступно: http://www.eurosurveillance.org/ViewArticle.aspx?ArticleId=2874. По состоянию на 28 сентября 2009 г.
    16. 16. Фридрих А.В., Меллман А., Хармсен Д. (2004) Спа Домашняя страница последовательного набора. Доступно: http://www.seqnet.org/. По состоянию на 28 сентября 2009 г.
    17. 17. Домашняя страница многолокусного последовательного ввода. Доступно: http://www.mlst.net. По состоянию на 28 сентября 2009 г.
    18. 18. Европейский парламент и Совет ЕС (1998 г.) Решение № 2119/98/ЕС Европейского парламента и Совета от 24 сентября 1998 г.: создание сети эпидемиологического надзора и борьбы с инфекционными заболеваниями в обществе. Официальное Сообщество J Eur L268/1: доступно: http://eur-lex.europa.eu/pri/en/oj/dat/1998/l_268/l_26819981003en00010006.пдф. По состоянию на 28 сентября 2009 г.
    19. 19. Европейская комиссия европейских сообществ (2000 г.) Решение Комиссии от 22 декабря 1999 г. об инфекционных заболеваниях, подлежащих постепенному охвату общественной сетью согласно решению № 2119/98/ЕС Парламента и Совета. Официальный документ J Eur Communities L 28/50: Доступен: http://eur-lex.europa.eu/pri/en/oj/dat/2000/l_028/l_02820000203en00500053.pdf. По состоянию на 28 сентября 2009 г.
    20. 20. Грундманн Х., Хори С., Таннер Г. (2001)Определение доверительных интервалов при измерении генетического разнообразия и дискриминационных способностей методов типирования микроорганизмов.J Clin Microbiol 39: 4190–4192.
    21. 21. Ааненсен Д.М., Спратт Б.Г. (2007) Spatialepidemiology.net. Веб-картографическое приложение для эпидемиологии инфекционных заболеваний. Доступно: http://www.spatialepidemiology.net. По состоянию на 28 сентября 2009 г.
    22. 22. Кулдорф М.А. (1997) Статистика пространственного сканирования. Методы теории общинного государства 26: 1481–96. Доступно: http://www.satscan.org/papers/k-cstm1997.pdf. По состоянию на 28 сентября 2009 г.
    23. 23. Абрамс А.М., Клейнман К.П. (2007) Пакет макросов SaTScan для картографии (SMAC), реализованный с помощью программного обеспечения SAS.Int J Health Geogr 6: 6.
    24. 24. Европейская система антимикробного надзора (EARSS). Годовой отчет за 2007 г. Доступно: http://www.rivm.nl/earss/Images/EARSS%202007_FINAL_tcm61-55933.pdf. По состоянию на 28 сентября 2009 г.
    25. 25. Перес-Васкес М., Виндель А., Маркос С., Отео Дж., Куэвас О. и др. (2009) Распространение инвазивного испанского Staphylococcus aureus spa типа t067, связанное с высокой распространенностью гена аминогликозид-модифицирующего фермента ant (4′)-Ia и генов эффлюксного насоса msr A/ msr B .J Antimicrob Chemother 63: 21–31.
    26. 26. Нюбель У., Руманьяк П., Фельдкамп М., Сонг Дж. Х., Ко К. С. и др. (2008)Частое появление и ограниченное географическое распространение метициллин-резистентного Staphylococcus aureus . Proc Natl Acad Sci U S A 105: 14130–14135.
    27. 27. Enright MC, Robinson DA, Randle G, Feil EJ, Grundmann H, Spratt BG (2002)Эволюционная история метициллин-резистентного Staphylococcus aureus (MRSA). Proc Natl Acad Sci U S A 99: 7687–7692.
    28. 28. Robotham JV, Scarff CA, Jenkins DR, Medley GF (2007)Устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA) в больницах и в обществе: модельные прогнозы, основанные на ситуации в Великобритании. J Hosp Infect 65: S293–99.
    29. 29. Джессен О., Розендал К., Бюлов П., Фабер В., Эриксен К.Р. (1969) Изменение стафилококков и стафилококковых инфекций. Десятилетнее изучение бактерий и случаев бактериемии. N Engl J Med 281: 627–635.
    30. 30. Lyytikainen O, Ruotsalainen E, Järvinen A, Valtonen V, Ruutu P (2005) Тенденции и исход внутрибольничных и внебольничных инфекций кровотока, вызванных Staphylococcus aureus , в Финляндии, 1995–2001 гг.Eur J Clin Microbiol Infect Dis 24: 399–404.
    31. 31. Witte W, Strommenger B, Cuny C, Heuck D, Nübel U (2007) Метициллин-резистентный Staphylococcus aureus , содержащий ген лейкоцидина Panton-Valentine, в Германии в 2005 и 2006 годах. J Antimicrob Chemother 60: 1258–1263.
    32. 32. Huijsdens XW, van Dijke BJ, Spalburg E, van Santen-Verheuvel MG, Heck ME, et al. (2006) Внебольничный MRSA и свиноводство. Энн Клин Микробиол Антимикроб 5:26.
    33. 33. Халлин М., Деплано А., Денис О., Де Мендонса Р., Де Рик Р. и др. (2007) Валидация гель-электрофореза в пульсирующем поле и типирования spa для долгосрочных общенациональных эпидемиологических исследований инфекций Staphylococcus aureus . J Clin Microbiol 45: 127–133.
    34. 34. Стромменгер Б., Кеттлиц С., Венигер Т., Хармсен Д., Фридрих А.В. и другие. (2006)Отнесение изолятов Staphylococcus к группам путем типирования spa , макрорестрикционного анализа SmaI и мультилокусного типирования последовательности.

    Похожие записи

    При гормональном сбое можно ли похудеть: как похудеть при гормональном сбое

    Содержание Как похудеть после гормональных таблетокЧто такое гормональные таблеткиПочему прием гормонов ведет к избыточному весу (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({}); […]

    Гипотензивные средства при гиперкалиемии: Гипотензивные средства при гиперкалиемии — Давление и всё о нём

    Содержание Препараты, применяемые для лечения гипертонической болезни | Илларионова Т.С., Стуров Н.В., Чельцов В.В.Основные принципы антигипертензивной терапииКлассификация Агонисты имидазолиновых I1–рецепторов […]

    Прикорм таблица детей до года: Прикорм ребенка — таблица прикорма детей до года на грудном вскармливании и искусственном

    Содержание Прикорм ребенка — таблица прикорма детей до года на грудном вскармливании и искусственномКогда можно и нужно вводить прикорм грудничку?Почему […]

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.