Igm отрицательный igg положительный: Экспресс-тест на наличие антител к SARS CoV-2 (COVID-19) IgM / IgG

alexxlab Разное

Содержание

Суммарные антитела (IgM, IgG) к SARS-CoV-2

Все зависит от страны, у каждой свои требования к путешественникам, которые меняются в зависимости от эпидемиологической ситуации. Обычно на границе просят справку об отрицательном результате ПЦР-теста на COVID-19, сделанном максимум за три дня до въезда. Точные и актуальные сведения о правилах въезда в конкретную страну лучше узнавать в официальных источниках — посольство, консульство и т.д.

Кроме того, после посещения заграницы гражданин РФ должен в течение трех календарных дней сдать ПЦР-тест и загрузить его результат на портал Госуслуг. Если результат ПЦР-теста окажется положительным, путешественник должен пройти 14-дневный карантин по месту жительства.

Граждане РФ, переболевшие коронавирусом менее 6 месяцев назад или прошедшие полный курс вакцинации менее 12 месяцев назад и загрузившие данные об этом на портал Госуслуг, могут не сдавать ПЦР-тест.

Иностранные граждане при въезде в Россию должны предъявить справку с отрицательным результатом ПЦР-теста на COVID-19. Тест нужно сдать не ранее, чем за 3 дня до пересечения границы.

Анализ на COVID-19 проводит лаборатория, допущенная к исследованиям на новую коронавирусную инфекцию (ООО «АВК-Мед». Лицензия № ЛО-52-01-006961 от 27.02.2020). Лаборатория аккредитована Роспотребнадзором. При сдаче ПЦР теста внимательно проверяйте все персональные данные, так как они передаются в Роспотребнадзор в течение 24 часов с момента готовности результата ПЦР-теста.

Обратите внимание: у МЦ «РУСМЕД» нет информации о статусе передачи данных. Мы не несем ответственности, если данные невозможно передать по причине ненадлежащей работы портала Госуслуг.

На каждой справке размещен уникальный QR-код, подтверждающий ее подлинность. При необходимости справка может быть переведена на английский язык.

Чем отличаются анализы на COVID-19

Ростовская область, 28 июля 2020. DON24.RU. Для выявления COVID-19 пациенты могут сдать несколько вариантов тестов. При этом недостоверный результат можно получить из-за неправильного выбора анализа. 

Вскоре после контакта с зараженным определить, попал ли новый коронавирус в организм человека, поможет метод ПЦР (полимеразной цепной реакции). На сегодняшний день он считается наиболее точным, пишут «Аргументы и факты». В биоматериале, взятом из носо- или ротоглотки, при помощи метода ПЦР можно обнаружить даже небольшое количество РНК (рибонуклеиновой кислоты) вируса. Такой анализ проводят пациентам с симптомами ОРВИ, пневмонией, а также тем, кто контактировал с заболевшими COVID-19. Ложноотрицательным ПЦР-тест может быть, если с момента заражения прошло продолжительное время и вирус опустился в легкие. 

В венозной крови новый коронавирус появляется позднее, чем на слизистых оболочках. Для его выявления используют ИФА и ИХЛА  (иммуноферментный и иммунохемилюминесцентный) анализы. Наличие антител IgM говорит о том, что человек болеет коронавирусом. Если определяются антитела IgG — у больного начал формироваться иммунитет. 

Такое тестирование позволяет выявить бессимптомных носителей, пациентов, у которых с момента заражения прошло больше двух недель, а также переболевших COVID-19. Его часто применяют вместе с КТ (компьютерной томограммой) легких, чтобы оценить ситуацию и назначить правильное лечение. 

Экспресс-тесты ИХА могут показать наличие и отсутствие антител, но не смогут определить их титр. То есть при отрицательном анализе будет понятно, что организм не сталкивался с инфекцией, а при положительном останется неизвестно, болен ли пациент в настоящее время или он встречался с инфекцией в прошлом. 

Если у пациента берут кровь на антитела и проводят ПЦР- исследование, истолковать их результаты можно следующим образом: 

  • ПЦР, IgM, IgG отрицательные — человек не заражен и иммунитета у него нет;
  • ПЦР положительный, IgM, IgG отрицательные — начальная стадия заболевания, возможно, инкубационный период;
  • ПЦР и IgM положительные,  IgG отрицательный — активная стадия болезни;
  • ПЦР отрицательный, IgM, IgG положительные — поздняя стадия заболевания или выздоровление;
  • ПЦР и IgM отрицательные,  IgG положительный — человек здоров, но в прошлом он переболел COVID-19 и у него выработался иммунитет. 

 

Власти Москвы массово проводят тесты на антитела к коронавирусу. Зачем?

  • Олег Болдырев
  • Би-би-си

Автор фото, Sergei Fadeichev/TASS

Власти Москвы проводят массовое тестирование москвичей на антитела к новому коронавирусу. О программе забора образцов крови сообщил на прошлой неделе мэр Сергей Собянин: по его словам, каждую неделю в 30 поликлиниках столицы будут собираться до 70 тысяч анализов.

Конкретные последствия этого тестирования остаются туманными, но судя по обнаруженному документу, тем, у кого антитела найдутся, грозит самоизоляция. Как это сочетается с заявлениями мэра Собянина о том, что антитела свидетельствуют об иммунитете — непонятно.

Би-би-си попыталась выяснить, какую пользу может дать эта программа, и чьи тесты используются.

Что московские власти надеются выяснить?

Ответим словами московского мэра Сергея Собянина: «Мы будем точно знать, какая доля москвичей переболела коронавирусом и приобрела иммунитет, сколько человек инфицированы или имеют подозрение на коронавирус. И главное — какова реальная динамика распространения инфекции».

Рассказывая о начале программы на сайте mos.ru, столичный мэр подчеркивает, что тест на антитела дополнит картину, которую давали тесты собственно на ковид, которые собирали у тех, чьи симптомы проявлялись открыто. И он неоднократно употребляет слово «иммунитет».

Между тем вот именно с иммунитетом к новому коронавирусу все еще совсем далеко от ясности. И тесты на антитела эту ясность пока внести не могут.

Что такое антитела? Если их нашли у меня, значит я больна?

Антитела — свидетельство того, что ваш организм уже сталкивался с инфекцией. Как и почти со всем, что связано с новым коронавирусом, сейчас нельзя сказать точно, какую именно роль играли антитела в общем ответе организма на Covid-19. Являлись ли они просто реакцией на встречу с вирусом или же имеют защитную функцию — неизвестно.

Но, анализируя тест, обращают внимание на присутствие иммуноглобулинов двух типов — IgM и IgG. Упрощая, можно сказать, что присутствие IgM говорит о том, что инфекция была перенесена недавно, IgG — о том, что со времени заражения уже прошло какое-то время.

Вот как эту разницу объясняет Михаил Фаворов, эпидемиолог и президент американской компании DiaPrep System: наличие маркера IgG говорит о том, что был контакт с вирусом. А IgМ является маркером периода болезни. «Если у Вас оба маркера (IgG, IgМ), то вы переболели (большинство без симптомов), и это было недавно (1-3 месяца, но у некоторых до 6-ти). Если у вас только IgG, то Вы уже реконвалесцент (выздоровевший — ред.) и могли встретиться с вирусом какое-то время назад», — пишет Фаворов.

Что ждет тех, у кого скрининг выявит антитела?

В заявлении мэра говорится и о том, что «потенциальные носители инфекции должны будут брать больничный и проходить самоизоляцию». Как конкретно это будет определяться, не говорилось. Но некоторую ясность внес документ, появившийся на сайте «Федерации лабораторной медицины». Это — решение «Клинического комитета по Covid-19» от 12 мая.

Судя по решению «Клинического комитета», власти нервирует любое обнаружение антител. Как тех, что свидетельствуют о недавно перенесенной болезни, так и тех, что относятся к сравнительно давнему иммунному ответу.

В решении «Клинического комитета» содержится таблица интерпретации диагностических тестов. Данные по маркерам IgM равные или больше 1,0 и IgG с любым значением будут говорить о «стадии иммунологического ответа на вирус SARS-CoV-2». И могут повлечь за собой самоизоляцию на две недели, а «с учетом особенностей клинического процесса до 3 недель». Показатели IgM меньше 1,0 и IgG равных или больше 10,0 означают «наличие иммунологической памяти на контакт с вирусом SARS-CoV-2» и, если нет информации о ранее перенесенной новой коронавирусной инфекции, тоже могут означать самоизоляцию на 2 недели.

И лишь только низкие показатели (IgM меньше 1,0 IgG меньше 10,0 ) говорят об «отсутствии контакта с вирусом SARS-CoV-2 или отсутствии антител в диагностически значимом количестве». Тем у кого такие результаты, рекомендовано «соблюдение общих правил по предотвращению инфицирования».

Би-би-си попыталась связаться с президентом «Федерации лабораторной медицины», руководителем отдела лабораторной диагностики института им. Склифосовского Михаилом Годковым, который значился одним из участников совещания 12 мая. Годков был недоступен, а вскоре документ исчез с сайта Федерации.

Вскоре после публикации этой статьи департамент здравоохранения Москвы заявил, что никаких мер, о которых повествует таблица интерпретации диагностических тестов, не существует. «Информация не соответствует действительности. Якобы утвержденных алгоритмов, о которых говорится в материалах, не существует. Пациентам, у которых выявлены иммуноглобулины G, говорящие об иммунитете к вирусу, никакие постановления или предписания о самоизоляции не выдаются», — утверждает департамент.

Просьбы Би-би-си уточнить происхождение документа и суть принятых решений, направленные в депздрав перед публикацией статьи, пока ожидают ответа. Интересно, что слово «алгоритм» не использовано в этой статье, но содержится как раз в упомянутом решении.

Так я не понял. Если у меня нашли антитела, то я уже не заболею ковидом?

Вопрос, что называется, на миллиард долларов, если учесть экономические потери от пандемии. Но ответить на него однозначно пока никто не может. «Есть антитела просто как свидетель того, что контакт с инфекцией был, но они не обладают нейтрализующей активностью», — подчеркивает автор одного из зарегистрированных недавно тестов на антитела, российский ученый Григорий Ефимов из НМИЦ гематологии минздрава РФ.

Специалисты предполагают (однако и это не 100-процентная уверенность), что наличие достаточной концентрации антител в первые недели после выздоровления существенно уменьшает шансы на повторное заражение. Однако как долго они сохраняют защитную функцию, неизвестно. «В настоящий момент нет никаких свидетельств того, что люди, которые выздоровели от Covid-19 и имеют антитела, защищены от повторного инфицирования», — заявила Всемирная организация здравоохранения.

В исследованиях пациентов, переболевших другой коронавирусной инфекцией, атипичной пневмонией SARS 2003 года, отмечалось, что с годами антитела к вирусу исчезали и организм переставал узнавать его. Есть и другие коронавирусы, иммунитета к которым наш организм не приобретает.

Ой. Еще коронавирусы? А тесты хорошо отличают одни от других?

С учетом нового 2019-nCoV, коронавирусов, способных заразить человека, сейчас известно семь. Взять хотя бы банальную простуду — ее тоже могут вызывать коронавирусы, только других видов.

Часть проблемы с тестированием — в том, что иммунный ответ на прочие коронавирусы и на другие инфекции может давать ложное указание на наличие антител к 2019-nCoV, снижая, таким образом, специфичность теста. Эти ложные срабатывания на другие следы завышают показатель ложно-положительности в тесте.

Его недостаточная чувствительность, напротив, упускает тех, кто действительно носит в себе следы инфицирования новым коронавирусом. А значит, будет много ложно-отрицательных. В идеальном тесте не должно быть ложно-положительных или ложно-отрицательных срабатываний.

Но идеальных тестов нет. А что считать хорошим тестом?

Уже через несколько недель после начала пандемии в разных странах стали появляться тесты на антитела к новому вирусу. И специфичность, и точность многих из них не выдерживали критики. Опрошенные специалисты сходятся в том, что показатели чувствительности и специфичности ниже 96-94% нельзя считать приемлемыми.

Проблема еще и в том, что многие производители не указывают отдельных показателей по ложно-положительным и ложно-отрицательным срабатываниям в своей продукции. Да к тому же рекламируемая точность отнюдь не всегда является реальной. Но даже если точность и не дотягивает всего три-четыре процента до абсолютной, простор для ошибки статистически весьма велик, подчеркивают те, кто скептически относятся к идее массового тестирования на антитела.

95 из 100? Какой может быть скепсис?

Спросите математиков. Объяснение упирается в концепцию Положительной прогностической ценности (Positive Prediction Value): в огромной группе исследуемых с низким количеством реально переболевших (предполагают, что это все-таки считаные проценты от общего числа жителей) даже небольшие доли погрешности в тестах в итоге очень сильно размывают определенность результата.

В условной группе из 100 тысяч тестируемых с 1% переболевших тест с 95-процентными показателями чувствительности и специфичности приведет к тому, что вероятность верного результата у каждого протестированного сведется всего к 16%. Специалисты подчеркивают, что такой тест точно нельзя делать тем, кто, скажем, отправляется работать в «красную зону», надеясь, что выявленные антитела к коронавирусу гарантируют им защиту.

Проблема в том, что для таких критических расчетов хорошо бы представлять процент переболевших. А московские власти говорят, что не представляют. И поэтому делают это массовое обследование, так как другого способа выяснить нет. Круг замыкается.

Хватит теории. Чем тестируют москвичей в этом скрининге?

Еще один хороший вопрос без четкого ответа. Несколько опрошенных специалистов в Москве уверены, что речь идет о двух тестах китайской компании Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd., продукцию которой в России представляет компания «Миндрей медикал рус». Об этом свидетельствует и «Решение клинического комитета». Документ говорит «о запуске тестирования на количественное определение IgM- и IgG-антител к SARS-CoV-2 методом ИХЛА (иммунохемилюминисцентного анализа — ред.) с использованием оборудования Mindray».

Две ее системы для определения антител по маркерам IgM и IgG методом иммунохемилюминисцентного анализа были зарегистрированы Росздравнадзором 7 мая. Кроме этого должны были быть закуплены анализаторы крови этой же компании. О закупке анализаторов для скрининга московские власти сообщали в начале мая. Однако поставщиков не называли.

Но специалисты указывают, что большинство других тест-систем не нуждаются в особом, за пределами стандартного, оборудовании для анализа, а тесты «Миндрей» собираются в кассеты, которые затем вставляются в анализатор этой фирмы. Правда, это предположение не согласуется с заявлением мэра Москвы, который сказал, что тестирование будет идти методом иммуноферментного анализа. Такой анализ обычно не требует каких-то необычных анализаторов для исследования взятых образцов крови.

Департамент здравоохранения столицы переадресовал вопросы о производителе тест-систем в московский оперативный штаб по борьбе с коронавирусом. На момент публикации ни оперштаб, ни «Миндрей медикал рус» не ответили на вопрос о том, действительно ли эти тесты обеспечивают массовую проверку москвичей. В системе госзакупок не удалось обнаружить никаких контрактов, связанных с этим.

Хм. Ну, предположим «Миндрей». И как он?

Как говорится, все сложно. Показатели в англоязычной документации на оба теста дают чувствительность в 98% и специфичность в 96%. Но в появившихся в сети снимках русскоязычной сопроводительной брошюры показатели иные — 97% чувствительности и 93,1% — специфичности.

Екатерина Померанцева, научный консультант центра генно-репродуктивной медицины Genetico, только что зарегистрировавшего свой тест на антитела к коронавирусу, находит это странным. Она считает, что с какой-то погрешностью теста можно мириться, но для этого она должна быть точно известна. «Если ты очень хорошо знаешь, какая ошибка у системы, то ты можешь получить какую-то цифру (на исследованиях — ред.), а потом просто вычесть эти четыре процента из полученного результата. Для этого важна твоя точность представлений об этом тесте. Поэтому очень большой вопрос, насколько точно мы знаем аналитические характеристики этого теста», — говорит она.

Запрос в представительство «Миндрей медикал рус» о том, с чем может быть связано это изменение и проходили ли тесты независимую оценку, на момент публикации остается без ответа. Такая независимая оценка сейчас в ходу.

Президент DiaPrep System Михаил Фаворов сообщил, что его компания недавно исследовала шесть экспресс-тестов на антитела к коронавирусу по заказу властей «одной из стран бывшего СССР». Три из них, по словам специалиста, полностью провалились — не смогли выявить антитела вообще. И это — несмотря на заявленные в документации высокие показатели, сравнимые с теми, что дает китайская компания.

О расхождениях между заявленными в документациях и реальными показателями некоторых изученных на заказ тестов сказала и Екатерина Померанцева из Genetico.

Если на самом деле точность теста ниже, то чем мы рискуем? И для чего это вообще?

Этот вопрос впрямую связан с тем, какие цели ставят московские власти. Во-первых, Сергей Собянин говорит о принятии «управленческих решений, связанных с планированием работы медицинской системы и сохранением либо смягчением действующих ограничений».

«Это необходимо, чтобы адекватно принимать решения, связанные с ограничительными мерами, работой предприятий сферы промышленности, строительства, науки, торговли, услуг и так далее, чтобы мы понимали, куда мы идем, на какой стадии сложности находимся, оперативно и адекватно принимали необходимые меры», — сказал он в одном из недавних интервью.

Би-би-си попросила московские власти пояснить, какие конкретно решения могут быть связаны с теми или иными численными показателями московского скрининга, но ответа пока не получила. Официальные заявления Сергея Собянина пока ничего не проясняют: до сих пор все решения по ослаблению карантина ставились в зависимость от уменьшения динамики заражений на ежедневной основе, а новые данные об уже перенесенных заболеваниях не сопоставляются с ними напрямую.

В любом случае, и тут Москва пока ведет себя более консервативно, чем другие регионы. Какие конкретно эпидемиологические выводы власти намерены сделать на основе массового скрининга, пока неясно. Речь точно не идет о каких-либо дополнительных послаблениях или расширенных свободах для тех, у кого антитела найдут, и никаких «паспортов переболевших» этот скрининг не подразумевает.

Скорее наоборот. Из «таблицы интерпретации результатов» следует, что ложно-положительные срабатывания теста будут означать неудобства для тех, кого ошибочно могут отправить на карантин. Правда, Собянин оговаривается, что таким людям будут сделаны стандартные ПЦР-тесты на коронавирус. Однако и их результатов, как показывают два месяца эпидемии, иногда надо ждать долго и они также не точны.

Собянин говорит, что Москва в таких тестах — впереди планеты всей. Это так?

Норвежец Хенрик Ярлов ведет открытый подсчет всех массовых тестирований на антитела к коронавирусу. Пока что в его базе данных из 74 экспериментов с тестированием упоминаний о московском нет, а самой массовой следует считать программу тестирования в Испании с упоминанием о 60 тысячах участников. Если Москва обеспечит хотя бы половину из заявленных 70 тысяч в неделю до конца мая, это исследование будет самым значительным по масштабу среди других.

Данные о пропорции положительных результатов в закончившихся обследованиях варьируются чрезвычайно — в одном из экспериментов в Италии, как следует из данных сводной ведомости, у 50% обследованных были найдены антитела. Подавляющее большинство проведенных кампаний по тестированию показывают куда меньшее количество переболевших — от долей процента до 3-4%.

Однако объяснений и трактовок полученным результатам масса, и многие комментаторы говорят о неправильной методологии и сомнительном качестве самих тестов. Ясности пока очень мало. Гарантировать, что московский скрининг обогатит мировые знания о заболеваемости коронавирусом, никто пока не берется.

Каких-либо конкретных решений, которые бы проистекали из тестирования на антитела, ни в одной стране пока не принимали. Впрочем, власти в разных странах не исключают, что они могут помочь. В Великобритании замминистра здравоохранения заявил, что тесты могут стать поворотным моментом в борьбе с коронавирусом. Это произошло после того, как Public Health England — одно из исполнительных подразделений минздрава — одобрило к использованию тест на антитела производства компании Roche. Однако пока правительство не закупало этот тест для массового использования. Британские власти «обожглись» на закупке огромной партии экспресс-тестов на антитела, точность которых оказалась очень низкой.

В конце апреля тесты на антитела начались в двух городах Южной Кореи. Как и в России, представители системы здравоохранения заявили, что исследование поможет определить процент переболевших коронавирусом. Заявлено, что программу обследования на антитела, вероятно, распространят в масштабах всей страны, но о конкретных последствиях тоже пока не говорят.

Так все-таки надо обследовать огромные группы людей или пользы в этом нет?

Многие из исследований на антитела к коронавирусу за рубежом проводились на ограниченных социальных или профессиональных группах, иногда числом всего в несколько сотен человек. Претензии к одному из первых и широко обсуждавшихся исследований такого рода — тестированию 3300 жителей графства Санта-Клара в Калифорнии в апреле — сводились к критике выборки тестируемых и доли ложно-положительных результатов в использованном тесте.

При этом многие утверждают, что именно ограниченное тестирование в отдельных группах — скажем, среди врачей — может дать какую-то полезную пищу для размышлений. Автор одной из тест-систем, недавно зарегистрированных и используемых в коммерческой лаборатории, Григорий Ефимов из НМИЦ гематологии говорит, что для полноценных выводов не подходят, к примеру, данные коммерческих лабораторий.

«Там выборка не будет репрезентативной — пришли те люди, которые имеют основание думать, что они переболели, и это будет очень сильно искажать статистику. Для того, чтобы получать настоящую статистику, надо действительно брать случайных людей», — считает он. Ефимов не видит вреда в том, что, пусть и с какой-то вероятностью статистических ошибок, такое массовое тестирование состоится.

Михаил Фаворов из DiaPrep System говорит, что системного подхода к тестированию на антитела нет. «Популяционные исследования иммунитета к респираторным вирусам — хорошо известная вещь. Они должны проводиться на основе выборки групп населения и методов научно обоснованной статистики. Но это должны делать специалисты аналитической эпидемиологии, которых в России не готовили даже в позднейший период, не говоря уж о временах СССР». Он подчеркивает необходимость создания национального органа по сертификации тестов на антитела, но говорит, что это вступит в противоречие с коммерческими и научными интересами тех, кто заинтересован в продвижении своих разработок.

В условиях беспрецедентной пандемии безусловную ценность московского скрининга на антитела отмечает вирусолог, доктор биологических наук Алексей Аграновский. «Это большие числа. Это все же дает картину того, сколько человек переболели в популяции. И другого способа получить ее не существует. Пускай даже и будет ошибка в три-четыре процента, я не считаю ее фатальной. Массовый скрининг даст возможность, принимая во внимание большую надежность иммунологического теста в сравнении с ПЦР (тот самый мазок у больных в активной фазе — ред.), установить реальный процент переболевших, эффективность принятых мер. Что нам ждать, насколько высока прослойка иммунной защиты в популяции. Эти данные можно получить только «в поле», их нельзя вычислить».

Но в скрининг я, по статистической вероятности, не попаду. А что у частных лабораторий, чьи тесты лучше?

В России зарегистрировано около 20 тестов на антитела к коронавирусу, как иностранных, так и российского производства. Их авторы и владельцы, естественно, подчеркивают надежность и точность своей технологии. К примеру, на совещании по генетическим исследованиям с президентом Путиным директор Института молекулярной биологии им. Энгельгардта академик Макаров заявил, что в глобальном исследовании тест-систем на антитела к коронавирусу «была и наша система. Хочу отметить, что она заняла хорошее место, первое-второе поделила».

Никаких ссылок на это исследование академик не привел, и понадобилось некоторое время, чтобы понять, что речь идет об антигенах, переданных из университета Маунт-Синай в США в Россию, на которых ИМБ теперь делает свои наработки.

Помимо бесплатного московского скрининга услуги по выявлению антител к коронавирусу предлагают несколько коммерческих лабораторий («Хеликс», Genetico, «Инвитро», «Гемотест», KDL, GMS Moscow, Hadassa). Не все из них указывают, чьи тесты используются.

Оплатив такой тест, вы сможете с какой-то вероятностью утверждать, что переболели новым коронавирусом. Гарантировать, что вы не заболеете им снова, сейчас не возьмется ни один из многих тысяч ученых, работающих по всему миру над разгадкой тайн 2019-nCoV.

При участии Николая Воронина и Светланы Рейтер

Антитела к лямблиям IgA,IgM,lgG, Giardia lamblia IgA,IgM,IgG колич.

Антитела к лямблиям lgG, Giardia lamblia IgG количественный — количественное определение антител lgM, lgG к лямблиям, показатель инфицирования лямблиями.

Лямблиоз (гиардиаз) — широко распространённое заболевание, вызываемое одноклеточным паразитом — кишечной лямблией Giardia lamblia, поражающее тонкий кишечник и печень.

Источник инвазии — человек, инфицированный лямблиями.

Путь передачи — алиментарный, то есть посредством зараженных пищевых продуктов, и воды, а также контактный.

На пищевых продуктах длительность жизненного цикла цист лямблий от 6 часов до 2 дней. Зачастую инфицирование происходит при употреблении плохо очищенной водопроводной воды или воды из открытых водоёмов.

Лямблии способны вызывать серьёзные кишечные заболевания людей, как в форме эпидемий, так и в виде спорадических случаев. Заболевание, зачастую, поражает детей.

Поражение слизистой оболочки тонкого кишечника может иметь различные клинические проявления: без каких-либо проявлений до аллергических симптомов и диарейного синдрома, особенно тяжело протекающего при выраженном иммунодефиците. Инфекция лямблиями может спонтанно исчезнуть через 6 недель, а может персистировать годами. Колонизируя слизистую тонкой кишки, трофозоиды лямблий проникают внутрь эпителия, и вызывают системный иммунный ответ.

По данным ВОЗ, ежегодно лямблиями заражаются около 200 млн. человек.

Лямблии существуют в двух формах. В виде вегетативной формы (трофозоиды) — они находятся преимущественно в верхних отделах тонкой кишки, а при попадании в толстую кишку превращаются в цисты (споровая форма), которые с фекалиями удаляются во внешнюю среду. Лямблии в форме цист могут длительно находиться в «законсервированном» состоянии и только при наступлении благоприятных условий превращаться в трофозоиды.

Проникая в кишечник, лямблии превращаются в трофозоиды, прикрепляясь к поверхностным клеткам слизистой оболочки и отсасывая из нее питательные вещества. Длительность жизненного цикла трофозоидов составляет 3–40 дней. За этот короткий период, заболевание может протекать очень длительно, так как всё время происходит повторное самозаражение. В результате длительного существования лямблий в организме, формируется синдром хронической эндогенной интоксикации. При сниженной иммунной защите это может привести к повреждению практически всех органов и систем организма.

Длительность инкубационного периода от 7 дней до 3 недель. Зачастую, лямблиоз протекает бессимптомно. При большом количестве паразитов внутри человеческого организма, заболевание протекает с выраженной клинической симптоматикой и имеет острое или хроническое течение.

Клиническая картина при лямблиозе
Основные клинические проявления на острой стадии заболевания: жидкий водянистый стул без примесей слизи и крови, боли в подложечной области, образование газа, раздувающего кишечник, отрыжка, тошнота, рвота, потеря аппетита, незначительное повышение температуры.

У большинства заболевших проявления болезни исчезают самопроизвольно в течение 1–4 недель. Затем болезнь переходит в хроническую форму, которая периодически проявляется вздутием живота, болями в подложечной области, разжиженным стулом.

У всех больных лямблиозом отмечаются признаки недостаточности витаминов: бледность кожи, синева под глазами, ангулярный стоматит (заеды), аллергические высыпания.

Лямблиоз значительно чаще поражает детей дошкольного возраста (заражено около 30% детей) и протекает тяжелее, чем у взрослых. Симптоматика у детей не специфична, схожа с другими заболеваниями, что затрудняет диагностику заболевания.

Мигрируя в кишечник ребёнка, лямблии начинают активно размножаться, используя питательные вещества, необходимые ребенку для роста. В конечном итоге это приводит к нехватке витаминов в организме, что тормозит нормальное развитие ребёнка.

Лямблии выделяют токсические вещества, что приводит к сильной аллергизации организма и подавляет иммунитет ребенка. Основные симптомы лямблиоза у детей: атопический дерматит, бронхиальная астма, хронический сухой кашель и частые простуды.

Осложнения лямблиоза
Лямблиоз может отягощать течение любых других, сочетающихся с ним заболеваний желудочно-кишечного тракта. Он маскирует их и способствует возникновению аллергических реакций.

Достаточно распространены ситуации, когда за диагнозом лямблиоз скрываются такие хронические заболевания желудочно-кишечного тракта, как воспаление поджелудочной железы, дискенезия (нарушение двигательной активности) желчного пузыря, воспаление кишечника различного характера и т.д.

Часто страдает нервная система. Больные жалуются на общую слабость, утомляемость, раздражительность, неглубокий сон, тревожные сновидения, головные боли, головокружения. Возможно развитие гипотонических кризов с обморочными состояниями. Достаточно распространены вегето-сосудистая дистония и аритмия.

На хронической стадии лямблиоза проявляются поражения кожных покровов: бледность, неравномерная окраска кожи («разноцветная кожа»), поражение красной каймы губ. Степень выраженности поражений бывает различной: от лёгкого шелушения и сухости до выраженного хейлита с трещинами, заедами.

В связи с обнаружением у ребёнка лямблий в кале и появлении у него характерных жалоб, требуется дополнительное обследование с целью выявления скрыто протекающих хронических воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Антитела при лямблиозе
В ответ на инфицирование Giardia lamblia иммунной системой вырабатываются обеспечивающие иммунный ответ специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG.

Серологические исследования иммуноглобулинов классов IgM, IgG к антигенам лямблий, являются косвенным методом лабораторной диагностики лямблиоза. Могут использоваться как дополнительный диагностический метод, позволяющий определить иммунный ответ организма на внедрение возбудителя.

Исследование антител к лямблиям IgM, lgG целесообразно дополнять методами, которые направлены на выявление лямблий в кале. Тест рационально проводить через 1–2 недели после проявления симптомов заболевания, если исследования кала в более ранний период не дали результата.

Как показывает практика, антитела к антигенам лямблий обнаруживаются у 39–42% больных с патологией желудочно-кишечного тракта. У 89–92% из них, лямблиоз подтверждается положительным результатом тестирования образцов фекалий или дуоденального содержимого на наличие цист лямблий. Существует проблема перекрёстных реакций антигенов лямблий с другими паразитарными и соматическими антигенами, которые дают ложноположительные результаты, поэтому для повышения надёжности и достоверности диагностики лямблиоза необходимо комплексное обследование.

Показания
В комплексе с другими методами исследования при диагностике лямблиоза. Серологическое тестирование целесообразно проводить через 1–2 недели от появления клинической симптоматики, если повторные исследования кала в более ранний период не дали результата.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 11 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Единицы измерения: УЕ*

Положительный результат будет сопровождаться дополнительным комментарием с указанием коэффициента позитивности пробы (КП*):

  • КП >= 11,0 — положительно; 
  • КП <= 9,0 — отрицательно;
  • КП 9,0–11,0 — сомнительно.
Положительный результат:

  • текущая или имевшая место в прошлом инфекция Lamblia intestinalis;
  • ложноположительный результат вследствие перекрёстных реакций (редко).
Отрицательный результат:

  • отсутствие инфицирования; 
  • серонегативные пациенты.
Сомнительный результат:

  • пограничное значение, которое не позволяет достоверно (с вероятностью более 95%) отнести результат к «Положительно» или «Отрицательно». Следует учитывать, что такой результат возможен при очень низком уровне антител, который может иметь место, в частности, при слабо выраженном гуморальном иммунном ответе, сывороточной интерференции или в начальный период заболевания. В зависимости от клинической ситуации может быть полезным повторное исследование уровня антител через 10–14 дней для оценки динамики или применение альтернативных видов исследований. 
Примечание. Иммунный ответ и концентрация антител варьируют в зависимости от локализации гельминтов, состояния слизистой оболочки кишечника, формы патологического процесса. Отрицательный или повторно сомнительный результат не всегда исключают вероятность инфицирования. Серологические тесты являются дополнением к таким лабораторным тестам, как исследование кала на простейшие и антигенный тест кала.

*Коэффициент позитивности (КП) — это отношение оптической плотности пробы пациента к пороговому значению. КП — коэффициент позитивности, является универсальным показателем, применяемым в иммуноферментных тестах. КП характеризует степень позитивности исследуемой пробы и может быть полезен врачу для правильной интерпретации полученного результата. Поскольку коэффициент позитивности не коррелирует линейно с концентрацией антител в пробе, не рекомендуется использовать КП для динамического наблюдения за пациентами, в том числе контроля эффективности лечения.

Иммунохимические методы диагностики COVID-19 / КонсультантПлюс

Иммунохимические методы диагностики COVID-19

Выявление антигенов SARS-CoV-2 проводится иммунохроматографическими методами (ИФА, ИХЛ или иммунохроматографии). Экспресс-тесты для определения антигенов (с применением иммунохроматографии) позволяют получить результат за 10 — 30 минут. Диагностическая чувствительность и специфичность экспресс-тестов на антиген SARS-CoV-2 могут быть ниже, чем у тестов на основе МАНК.

Положительные результаты тестов на антиген SARS-CoV-2 могут ожидаться в тот же период развития заболевания, что и выявление РНК вируса: за 2 дня до и на протяжении 5 — 7 дней после появления симптомов. Положительный результат теста может рассматриваться как подтверждение диагноза COVID-19, отрицательный результат не позволяет исключить COVID-19.

Иммунохроматографические тесты могут применяться для экспресс-диагностики COVID-19 в ситуациях, когда проведение молекулярно-генетического тестирования МАНК невозможно, в том числе в удаленных и малонаселенных регионах. Необходимо иметь в виду, что тест на антиген SARS-CoV-2 при малой распространенности заболевания имеет более низкую прогностическую ценность положительного результата.

Выявление антител к SARS-CoV-2 проводится с помощью методов ИФА, ИХЛ или иммунохроматографии. Разработанные методы ИФА и ИХЛ позволяют получать качественные, полуколичественные (коэффициент позитивности) и количественные результаты. Для определения уровней иммноглобулинов к SARS-CoV-2 необходимо использовать наборы реагентов для количественного определения антител, а результаты исследований представлять с использованием условных единиц измерения BAU/мл (binding antibody units, «единицы связывающих антител»),

Иммунохроматографические методы — быстрые диагностические тесты, рассматриваются как тесты «у постели больного» (время получения результата — 10 — 30 минут). Иммунохроматографические тесты являются качественными тестами и позволяют определить наличие антител к SARS-CoV-2 (IgM, IgG, суммарные антитела).

С помощью выявления отдельных классов антител к SARS-CoV-2 (IgA/IgM, IgG) возможно определение различных фаз инфекционного процесса:

— серонегативная фаза — антитела могут не выявляться в первичном образце, но выявляются во взятых через несколько дней образцах;

— активная фаза — при определении диагностически значимого уровня IgA и/или IgM в одном образце или значимого нарастания уровня IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом в 2 — 4 недели;

— фаза реконвалесценции — концентрация IgA и IgM, как правило, существенно снижается (падение титра в 2 — 4 раза) во время выздоровления, при сохраняющихся IgG через 2 недели после курса лечения и позднее;

— перенесенная инфекция — персистенция IgG без роста его уровня в парных сыворотках и отсутствие IgA и IgM.

Определение IgG к SARS-CoV-2 через 4 недели после вакцинации позволяет подтвердить наличие поствакцинального иммунитета. Длительность периода детектируемого наличия антител не определена, но в настоящее время рассматривается как период не менее 3 месяцев.

Открыть полный текст документа

Тест на карантин – Картина дня – Коммерсантъ

Московским властям предложили обязать людей с выявленным в результате теста иммунитетом к коронавирусной инфекции соблюдать двухнедельную самоизоляцию. Такие рекомендации содержатся в решениях Клинического комитета по борьбе с коронавирусом, который работает при департаменте здравоохранения Москвы. Выявляться наличие иммунитета будет при выборочном массовом тестировании на антитела, которое московские власти запустили с 15 мая. Причины рекомендаций к самоизоляции у людей с антителами в документе не объясняются, однако оговаривается, что такая мера должна применяться по отношению к людям, у которых отсутствуют сведения о ранее перенесенном COVID-19. Опрошенные “Ъ” эксперты разошлись во мнении о необходимости такой меры: одни считают ее избыточной, другие полагают, что власти перестраховываются из-за недостатка данных о заразности коронавируса.

Обновление. Позднее департамент здравоохранения Москвы опроверг сообщения о двухнедельной изоляции для людей с выявленным иммунитетом к COVID-19. «Якобы утвержденных алгоритмов, о которых говорится в материалах, не существует,— заявляют в департаменте.— Пациентам, у которых выявлены иммуноглобулины G, говорящие об иммунитете к вирусу, никакие постановления или предписания о самоизоляции не выдаются». «При этом есть риск, что вирус в организме может еще какое-то время присутствовать»,— говорится в опубликованном разъяснении. Также там приводится комментарий главного внештатного специалиста по ВИЧ-инфекции, руководителя Московского городского центра профилактики и борьбы со СПИД Алексея Мазуса, который заявил, что «пациенты, у которых выявлены антитела, могут некоторое время представлять опасность для окружающих. Поэтому им рекомендуется временно минимизировать контакты»: «Это профилактическая мера, и решение о необходимости самоизоляции принимает сам человек».

15 мая московские власти запустили исследование популяционного иммунитета жителей столицы — тестирование (скрининг) на наличие антител к новой коронавирусной инфекции. Как заявил 14 мая в своем официальном блоге мэр Москвы Сергей Собянин, ежедневно в столице проводится 40 тыс. ПЦР-тестов, которые делают федеральные, городские и частные лаборатории и сеть КТ-лабораторий, «которые провели уже около 100 тыс. исследований легких для выявления вирусной пневмонии». Однако «этих методов недостаточно», отметил мэр: «Они не позволяют понять, сколько людей уже переболели, в том числе бессимптомно, у скольких людей выработался иммунитет к коронавирусу».

7 мая Сергей Собянин, ссылаясь на результаты скрининговых исследований, показавших, что носителями инфекции могут являться 2–2,5% жителей Москвы, заявил, что «реально больных (COVID-19.— “Ъ”) в городе около 300 тыс. человек». В тот день общее число выявленных пациентов с коронавирусной инфекцией составляло 92 676 человек, по данным на 20 мая, это число выросло до 152 306. Московские власти планируют тестировать на антитела примерно 70 тыс. человек в неделю, рассылая приглашения пройти тестирование в одной из 30 поликлиник, где будет делаться такой анализ.

8 апреля в Москве при московском департаменте здравоохранения был создан Клинический комитет по борьбе с коронавирусом, куда вошли главные внештатные специалисты ведомства и главврачи стационаров, определенных под размещение больных коронавирусной инфекцией и пневмонией. Задачами комитета, в частности, является «выбор оптимальных технологий профилактики, диагностики, лечения и реабилитации пациентов с положительным тестом на COVID-19». Решения Клинического комитета не публикуются в открытом доступе.

20 мая Федерация лабораторной медицины (российская ассоциация специалистов и организаций лабораторной службы) и издание о молекулярной диагностике PCR News опубликовали протокол решений комитета от 12 мая. Документ есть в распоряжении “Ъ”, в департаменте здравоохранения оперативно подтвердить подлинность документа не смогли.

В решении комитета говорится, что инфекция COVID-19 может быть обнаружена «косвенно путем определения иммунного ответа хозяина на SARS-CoV-2».

«Диагностика позволяет выявить бессимптомное вирусоносительство и особенно важна для пациентов с легкой и средней тяжестью течения заболевания, которые могут обратиться за помощью поздно, уже по прошествии двух недель от начала заболевания,— говорится в решении.— Кроме того, результаты таких исследований являются особенно важным инструментом для оценки распространенности COVID-19 в популяции». В документе отмечается, что исследование проводится с целью сдерживания эпидемического процесса и определения роли и значения бессимптомного носительства в распространении инфекции.

В документе говорится о необходимых действиях пациентов в зависимости от результатов тестирования. Так, если получен отрицательный результат (отсутствие контакта с вирусом или отсутствие антител в диагностически значимом количестве), то пациенту рекомендуется соблюдение общих правил по предотвращению инфицирования. Если показатель IgM (свидетельствует о носительстве вируса) оказывается больше единицы, что говорит о «стадии иммунологического ответа на вирус SARS-CoV-2», то пациент должен «соблюдать самоизоляцию две недели, с учетом особенности процесса до трех недель». Если же показатель IgM меньше единицы, а показатель IgG (показатель иммунитета к вирусу после перенесенной болезни) больше или равен 10, то также рекомендуется «самоизоляция на две недели, если нет информации о ранее перенесенной новой коронавирусной инфекции».

Главный врач медцентра «Лидер-Медицина» инфекционист Евгений Тимаков отметил, что его «смущает» пункт о необходимости соблюдать самоизоляцию при обнаружении IgG: «По факту если нет IgM, а есть IgG, то это говорит о перенесенной инфекции как минимум месяц назад, то есть иммунитет сформировался. И человек, который имеет параметры IgG больше 10 и не имеет IgM, является тем, кого можно кидать и в огонь, и в воду. И я не понимаю смысла изоляции в две недели для людей с выраженным IgG». Господин Тимаков отметил, что «по хорошему такие люди, например врачи, имеют право работать в очагах инфекции, так как переболели и имеют иммунитет».

«Что же, получается, что мы посадим всю страну, которая уже переболела, снова на изоляцию?» — недоумевает эксперт.

Что касается указанного показателя IgM выше единицы и рекомендации соблюдать самоизоляцию, то господин Тимаков заявил, что «это логично»: такие показатели говорят о том, что «процесс еще активен, человек болел две-три недели назад и еще может выделять вирус».

Еще один эксперт на условиях анонимности отметил в разговоре с “Ъ”, что основным в последнем пункте о необходимости самоизоляции при выявленном иммунном ответе является пометка об отсутствии сведений о ранее перенесенной коронавирусной инфекции: «В одной из статей китайских специалистов говорилось, что РНК вируса может обнаруживаться до 50 дней. И если это так, то действительно может быть так, что у человека уже есть IgG и почти нет IgM, а РНК вируса еще обнаруживается. При этом РНК вируса — это еще не сам вирус, поэтому неизвестно, насколько в этой ситуации человек заразен».

Валерия Мишина

Памятка экспресс-тест на коронавирус

ПАМЯТКА

 

Что такое экспресс-тест на коронавирус?

Экспресс-тест представляет собой одноразовое пластиковое устройство со встроенной тест-полоской, на которую нанесены несколько реагентов. Для тестирования не требуется сложного оборудования. На анализ берется кровь из пальца. Все инструменты абсолютно стерильные и одноразовые. Результат можно получить в течение 15 минут. Процедура выглядит следующим образом.


Можно ли поставить диагноз с помощью экспресс-теста?

Принцип теста основан на определении в крови антител классов IgG/IgM, к коронавирусу SARS-CoV-2 (COVID-19). Первыми через 7-10 дней после инфицирования вырабатываются антитела класса IgM. Они свидетельствуют об острой стадии заболевания. Далее, через 2-3 недели после инфицирования вырабатываются антитела класса IgG, которые говорят о перенесенной инфекции и сформировавшемся иммунном ответе.

ВАЖНО! С помощью экспресс-теста диагноз коронавирусной инфекции не ставится, так как он не обнаруживает вирус в организме, а только оценивает реакцию иммунной системы.

ВАЖНО! Тест не применяется для лиц с острыми явлениями респираторной инфекции (высокая температура, кашель, одышка, боли в горле и т.п.), потому что антитела класса IgM начинают вырабатываться позже, чем появляются первые симптомы и результат может оказаться отрицательным.

Как могут выглядеть результаты экспресс-теста?

 

Что делать, если экспресс-тест положительный?

Возможны 2 варианта:

·         Если обнаружены положительные антитела класса IgM (или оба класса антител положительные IgM и  IgG), то инфицирование произошло около 7-14 дней назад. Пациенту необходимо надеть маску, самоизолироваться и вызвать врача на дом по номеру 2-11-12 для осмотра и отбора респираторного мазка из зева и носа для ПЦР-анализа.

·         Если обнаружены положительные антитела класса IgG – это означает, что пациент ранее имел контакт с коронавирусом либо перенес данную инфекцию с выработкой иммунного ответа. В настоящее время нет четких данных о том, формируется ли стойкий иммунитет и как долго возможно носительство вируса, поэтому при получении такого результата следует самоизолироваться и вызвать врача на дом по номеру 2-11-12 для осмотра и отбора респираторного мазка из зева и носа для ПЦР-анализа.

Что делать, если тест отрицательный?

Отрицательный тест может быть в 2-х случаях:

1.      Инфекция отсутствует;

2.      Инфицирование произошло недавно и антитела еще не успели образоваться. Такое носительство вируса может быть опасным для окружающих, поэтому если пациент находится на карантине, ему следует оставаться в изоляции и соблюдать все профилактические меры.

ВАЖНО! Основным методом подтверждения диагноза является ПЦР мазка из носоглотки с обнаружением РНК коронавируса.

 

Общие сведения о тестировании на антитела к COVID-19

Abstract

Ортопедическое сообщество стало свидетелем того, как пандемия COVID-19 уничтожила плановые хирургические операции в большинстве регионов. Пациенты и основные работники, такие как поставщики медицинских услуг, по-прежнему справедливо обеспокоены тем, как должным образом вернуться к работе и общественной деятельности безопасным и ответственным образом. Многие считают, что массовое тестирование на наличие антител может способствовать принятию решений, основанных на фактических данных, как в индивидуальном, так и в общественном масштабе.Много информации и такое же количество дезинформации было получено при тестировании на антитела. Информация о роли и науке такого тестирования критически важна для эффективного понимания программ и управления ими.

Ключевые слова: COVID-19, COVID, коронавирус, антитела, антитела, тестирование, ПЦР, скрининг. Пациенты и основные работники, такие как поставщики медицинских услуг, по-прежнему справедливо обеспокоены тем, как должным образом вернуться к работе и общественной деятельности безопасным и ответственным образом.Возможно, скрининг всего персонала и тестирование всех предоперационных плановых пациентов на наличие вируса с помощью молекулярного тестирования поможет свести к минимуму второй всплеск заболевания. Многие считают, что массовое тестирование на наличие антител может способствовать принятию решений, основанных на фактических данных, как в индивидуальном, так и в общественном масштабе. Много информации и такое же количество дезинформации было получено при тестировании на антитела. Мы считаем, что такое тестирование иммунного ответа имеет реальную ценность, но также знаем, что просвещение о роли и науке такого тестирования критически важно для эффективного понимания программ и управления ими.

31 декабря 2019 г. в городе Ухань, провинция Хубэй, Китай, было выявлено 27 случаев пневмонии неизвестной этиологии [[1], [2]]. В конечном итоге возбудитель был идентифицирован из образцов мазка из горла, проведенного Китайским центром по контролю и профилактике заболеваний в январе 2020 года, и впоследствии был назван коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2). Всемирная организация здравоохранения упростила название болезни до COVID-19 [3]. На сегодняшний день у многих пациентов с COVID-19 развились легкие симптомы, такие как сухой кашель, боль в горле и лихорадка.В большинстве случаев заболевание разрешилось спонтанно, и многие инфицированные пациенты оказались полностью бессимптомными. Однако у некоторых развились различные фатальные осложнения, включая органную недостаточность, септический шок, отек легких, тяжелую пневмонию и атипичный острый респираторный дистресс-синдром [[4], [5], [6]]. Как правило, пациенты, нуждающиеся в интенсивной терапии, были старше и имели множественные сопутствующие заболевания, включая сердечно-сосудистые, цереброваскулярные, эндокринные, пищеварительные и респираторные заболевания [7].

В настоящее время существует несколько исследований, определяющих патофизиологические характеристики COVID-19, и существует большая неопределенность в отношении механизма его распространения.Текущие знания в значительной степени основаны на аналогичных коронавирусах, которые передаются от человека к человеку через респираторные фомиты [8]. Как правило, респираторные вирусы наиболее заразны, когда у пациента есть симптомы. Тем не менее, появляется все больше доказательств того, что передача от человека человеку может происходить во время бессимптомного инкубационного периода COVID-19, который, по оценкам, составляет от 2 до 10 дней («Как коронавирус распространяется | CDC, й) [9,10].

По состоянию на 12 апреля 2020 г. было подтверждено 1 853 155 случаев заболевания COVID-19, и примерно треть случаев приходится на США.В Соединенных Штатах 22 071 из 114 247 смертей во всем мире были вызваны этой болезнью [11]. Важно отметить, что эти цифры, вероятно, сильно занижены, поскольку представленные данные отражают только лабораторно подтвержденные диагнозы. В Соединенных Штатах действуют строгие правила в отношении тяжести клинических симптомов до прохождения теста на COVID-19, что, безусловно, недооценивает фактическую нагрузку. Распространение COVID-19 можно остановить за счет раннего выявления, изоляции, оперативного лечения и внедрения надежной системы отслеживания контактов [12].Другие стратегические цели включают средства определения клинической тяжести, степени передачи и оптимизации вариантов лечения. Кроме того, Соединенные Штаты приостановили въезд всех иммигрантов и неиммигрантов, побывавших в зонах высокого риска, с целью остановить дальнейшее распространение вируса [13]. Ключевая цель, не связанная с медицинскими результатами, заключается также в том, чтобы свести к минимуму экономические последствия вируса. Часть управления возвращением к общественной деятельности, а также минимизация риска повторного всплеска случаев заболевания включает в себя надежные стратегии тестирования как для инфицированных пациентов, так и для тех, у кого в определенной степени появился иммунитет из-за предыдущего контакта.

Что касается диагностического тестирования, многие компании со всего мира выпустили наборы для тестирования на COVID-2019 [14,15]. В каждой широкой категории тестов есть несколько типов тестов, подходящих для различных вариантов использования. Один тип, который сейчас становится все более доступным, — это молекулярно-диагностическое тестирование, которое выявляет присутствие вирусного генома. Эти тесты особенно полезны для диагностики и сортировки пациентов, наблюдения за распространением болезни, выявления штаммов и мутаций (включая секвенирование нового поколения) и проверки текущего статуса инфекции среди сотрудников.Это тестирование с помощью полимеразной цепной реакции позволяет выявить наличие генетического материала вируса (РНК) в мазке из носа или горла, а в последнее время и в слюне. Эти тесты могут определить, есть ли у кого-то активная текущая инфекция. Эти тесты предназначены не для количественной оценки наличия вирусной нагрузки, а для амплификации присутствия любого вирусного материала для определения наличия или отсутствия вируса в образцах.

Другой тип теста оценивает развитие иммунного ответа на вирус у пациентов путем выявления присутствия 3 типов антител (например, IgG, IgM и IgA), которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию.Тесты на иммунный ответ не обеспечивают такого же уровня обнаружения, как диагностика вирусного генома при ранней инфекции, поскольку организму требуется время, чтобы отреагировать на антигенную вирусную инвазию. Хотя эти антитела менее полезны для мониторинга при немедленном ответе и не показаны при диагностике и скрининге активной ранней инфекции, они будут необходимы в случае вторичного рецидива вируса в сообществе. Поскольку вирусный геном больше не обнаруживается после выздоровления пациента, иммунный статус и статус данной популяции, связанный с их способностью заражаться или сопротивляться инфекции, будут основываться на их статусе антител.Этот тип теста представляет собой серологический тест (кровь) и документирует наличие антител, вырабатываемых иммунной системой против SARS-CoV-2. Для более традиционных лабораторных тестов может потребоваться традиционный забор крови, тогда как для более новых систем требуются только образцы крови, взятые из пальца. Учитывая характер этих тестов и текущую потребность в наращивании тестирования, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США выдает разрешение на экстренное использование методов тестирования, включая латеральный иммуноанализ на COVID-19.Врачам важно понимать, что для большинства продаваемых продуктов в этой категории сегодня по-прежнему требуется лабораторная сертификация в соответствии с Поправками об улучшении клинической лаборатории для проведения тестов средней или высокой сложности, и, несмотря на их простоту, их нельзя проводить в обычном частном кабинете [16]. ]. Детали процесса авторизации аварийного использования и его последствия выходят за рамки этой статьи и быстро меняются. Тем не менее, руководство Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов легко найти в Интернете с обновлениями в режиме реального времени.

Помогая выявлять иммунитет подвергшегося воздействию населения, отслеживать распространение заболевания, проверять статус инфекции среди рабочей силы и изучать прогрессирование заболевания, данные можно использовать для принятия обоснованных решений о карантине и социальном дистанцировании на региональном или местном уровне. и может использоваться для стратификации рисков поставщиков медицинских услуг, полиции, пожарных, коммунальных служб и других основных работников. Тестирование также может обеспечить душевное спокойствие хирургам, которые не уверены, подвергались ли они воздействию вируса и вырабатывался ли у них когда-либо иммунитет к вирусу.Знание этих фактов может помочь принять решение о необходимости средств индивидуальной защиты и готовности работать с пациентами с COVID-19 в факультативных условиях.

Функция антитела

Антитело, также называемое иммуноглобулином, представляет собой защитный белок, вырабатываемый иммунной системой в ответ на присутствие чужеродного вещества (антигена), такого как патоген. Антитела распознают и фиксируются на антигенах, чтобы удалить их из организма. Антитела представляют собой белки, продуцируемые и секретируемые В-клетками (лимфоцитами) [17].

Поскольку основной функцией В-лимфоцитов является выработка антител, важно понимать характерные особенности этих защитных молекул и описывать их различные изотипы или классы. Антитела представляют собой гликозилированные белковые молекулы, присутствующие на поверхности В-клеток (поверхностные иммуноглобулины), которые служат рецепторами антигенов или секретируются во внеклеточное пространство, где они могут связывать и нейтрализовать свои антигены-мишени [17]. Одна молекула антитела состоит из 4-х белковых цепей: 2-х «тяжелых» (Н-цепи) и 2-х «легких» (L-цепей), связанных друг с другом дисульфидными связями.N-концевые области тяжелой и легкой цепей, которые в совокупности составляют сайт связывания антигена, являются местом, где находится вариабельность между одной молекулой антитела и другой, что определяет специфичность. Важной особенностью является то, что каждое антитело распознает определенный антиген, явление, называемое «специфичностью антител». Например, антитело, которое распознает вирус паротита, не может распознавать вирус кори и может распознавать только один конкретный сайт связывания на вирусе паротита. Скорее всего, будет несколько антител к нескольким различным сайтам связывания на антигене, таком как вирус.Например, некоторые антитела к COVID-19 будут нацеливаться на сайты связывания на белках внешней оболочки, в то время как некоторые могут нацеливаться на сайты связывания нуклеиновых кислот, но каждое из них будет специфичным и уникальным. Перекрёстная реактивность возникает только тогда, когда 2 разных, но похожих вируса имеют одинаковую структуру. Например, если несколько штаммов коронавируса сохранили участки нуклеиновой кислоты, которые не подверглись мутации, антитело, нацеленное на этот участок в одном, может воздействовать на идентичный участок в другом. И наоборот, антитело, которое распознает вирус кори, обычно не может распознавать вирус эпидемического паротита.

Существует пять изотипов или классов антител (IgM, IgD, IgG, IgA и IgE), которые различаются по С-концевым областям тяжелых цепей, которые являются постоянными и, следовательно, не участвуют в антигенной привязка. Вместо этого эти области (обозначенные Fc) важны для общих эффекторных функций антител, средств, с помощью которых антитела устраняют патогены или, альтернативно, вызывают повреждение тканей. Следует отметить, что существует 4 подкласса или изотипа антител IgG (IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4), разграничение которых выходит за рамки данного обсуждения.Антитела выполняют эффекторные функции тремя основными способами [17]:

Антитела обнаруживаются в плазме и внеклеточной жидкости. Антитела выполняют 3 основные функции.

  • 1)

    Антитела секретируются в кровь и слизистые оболочки, где они связываются с чужеродными веществами, такими как патогены и токсины, и инактивируют их (нейтрализация). Нейтрализация антител важна для защиты от вирусов, поскольку она может помешать вирусу проникнуть в клетки и заразить их.Он также важен для связывания с бактериальными токсинами и является основным механизмом защиты, обеспечиваемым успешной вакцинацией.

  • 2)

    Антитела способствуют фагоцитозу чужеродных веществ фагоцитирующими клетками (опсонизация). Связывание антител, например, не предотвратит репликацию бактерий. Скорее, в этих условиях механизм усиленной защиты за счет опсонизации будет усиливать фагоцитоз макрофагами и нейтрофилами.

  • 3)

    Третья функция – активация антителами системы комплемента для уничтожения патогенов посредством лизиса и усиления хемотаксиса.

После инфекции клетки, продуцирующие специфические антитела к патогенам, размножаются и увеличиваются пропорционально. В результате организм защищен от повторного заражения. Эта особенность называется «иммунологической памятью». Одной из наиболее важных особенностей иммунного ответа является его способность сохранять память о предыдущих инфекциях, и это также лежит в основе эффективности прививок. Это защищает людей от повторного заражения и ограничивает распространение инфекции в обществе.Иммунная память может быть очень долговечной; Иммунологическая память о коревой инфекции у взрослых угасает так медленно, что потребуется более 3000 лет, чтобы уменьшить ее наполовину. Следовательно, это выходит далеко за рамки пожизненной защиты для этого конкретного антигена. Эти устойчивые долговременные изменения являются причиной того, что при вакцинации получаемая в результате защита дает долгосрочные преимущества. Внутри человека иммунная память должна быть распределена по всему телу. Циркулирующие антитела перемещаются в крови, достигая всех мест кровообращения, включая внеклеточное пространство и выделения.Естественные клетки-киллеры (NK) могут оставаться на страже в тканях «в боевой готовности», но не активироваться, готовые к быстрой атаке в случае повторного заражения. NK-клетки активируются в ответ на происходящие из макрофагов цитокины и служат для сдерживания вирусных инфекций, в то время как адаптивный иммунный ответ генерирует антиген-специфические цитотоксические Т-клетки, которые могут устранить инфекцию. NK-клетки борются с вирусными инфекциями, секретируя гамма-интерферон и TNFα, а также стимулируя близлежащие NK-клетки такими выделениями и разрушая физиологически нездоровые клетки из-за вирусной инфекции или злокачественных новообразований с помощью сложных механизмов, выходящих за рамки этого обзора.

Наконец, некоторые инфекции настолько сильно влияют на вид, что на дереве эволюции можно увидеть отпечаток отдельных патогенов. Если инфекция смертельна, выживут только те особи, у которых есть гены, кодирующие эффективную резистентность, и они произведут следующее поколение, тем самым стимулируя коллективный иммунитет за счет естественного отбора, а не вакцинации или инфекции. Современные методы анализа наследственности продемонстрировали, как коэволюция хозяина и инфекции сформировала структуру иммунной системы и рецепторов, которые она использует для распознавания патогенов и борьбы с ними.

Структура и характеристики изотипов антител

Прежде чем обсуждать тесты на антитела, стоит понять, как человеческие антитела классифицируются на 5 изотипов (IgM, IgD, IgG, IgA и IgE) в соответствии с их Н-цепями, которые обеспечивают каждый изотип Отличительные черты и роли.

IgG

IgG является наиболее распространенным изотипом антител в крови (плазме), на его долю приходится от 70 до 75% человеческих иммуноглобулинов (антител). IgG связывает антиген и управляет распознаванием комплексов антиген-антитело лейкоцитами и макрофагами.IgG передаются плоду через плаценту и защищают младенца до тех пор, пока его собственная иммунная система не начнет функционировать. IgG в значительной степени отвечает за долговременный иммунитет после инфекции или вакцинации.

IgM

IgM обычно циркулируют в крови и составляют около 10% иммуноглобулинов человека. IgM обычно имеет пентамерную структуру, в которой 5 основных молекул Y-образной формы связаны вместе. В-клетки сначала продуцируют IgM в ответ на микробную инфекцию/инвазию антигена. Это иммуноглобулины ранней фазы, которые сначала развиваются во время острой инфекции.Хотя IgM имеет более низкое сродство к антигенам, чем IgG, он обладает более высокой авидностью к антигенам из-за своей пентамерной структуры. IgM, связываясь с рецептором клеточной поверхности, также активирует клеточные сигнальные пути.

IgA

IgA в изобилии содержится в сыворотке, слизи носа, слюне, грудном молоке и кишечной жидкости и составляет от 10 до 15% иммуноглобулинов человека. IgA образует димеры (т.е. 2 мономера IgA, соединенные вместе).

IgE

IgE присутствует в незначительных количествах, составляя не более 0.001% иммуноглобулинов человека. Его основная функция заключается в защите от паразитов. В регионах, где паразитарная инфекция встречается редко, IgE в первую очередь участвует в развитии аллергии.

IgD

IgD составляют менее 1% иммуноглобулинов человека. IgD может участвовать в индукции продукции антител в В-клетках, но его точная функция остается неизвестной.

Молекулярное тестирование на вирусную РНК

Методы молекулярного тестирования считаются единственным надежным средством диагностики активного случая COVID-19, особенно на ранних стадиях течения инфекции, и являются единственным средством определения того, заразен ли пациент для других.Обнаружив присутствие вирусного генетического материала в носовых, ротовых и дыхательных путях, можно определить, активно ли пациент выделяет вирус, который может передаваться другим. Эти тесты, возможно, наиболее полезны на ранних стадиях инфекции, поскольку они могут подтвердить наличие вируса за 2 дня до появления симптомов. Учитывая, что антитела могут быть обнаружены только через 6-7 дней после появления симптомов, молекулярные тесты могут ускорить диагностическое окно до 9 дней. Продолжительность выделения вируса может сильно различаться и зависеть от тяжести симптомов, продолжительности болезни и специфического иммунного ответа пациента.Как правило, выделение вируса невозможно обнаружить через 21–35 дней после появления симптомов или через 3–5 дней после исчезновения симптомов у пациента. В конце течения болезни вирусная нагрузка в конечном итоге становится неопределяемой, и поэтому молекулярный тест не выявляет предшествующую инфекцию, даже недавно разрешившуюся. Хотя молекулярные тесты на SARS-CoV-2 становятся все более доступными и дают результаты быстрее, для всех доступных в настоящее время тестов требуется платформа лабораторного анализатора, которая, как правило, находится в дефиците и не заказана в течение нескольких месяцев.Во многих лабораториях по-прежнему не хватает образцов для молекулярного тестирования, и должностные лица общественного здравоохранения ввели строгие правила, требующие наличия тяжелых симптомов для получения права на получение молекулярного теста.

Таким образом, очевидно, что тестирование на антитела играет важную роль в диагностическом наборе инструментов для COVID-19. Тестирование на антитела может дать людям важную информацию об их функциональном иммунитете к продолжающейся пандемии, дать душевное спокойствие и помочь в принятии решений о возвращении к общественной деятельности и работе.Эти тесты также предоставляют должностным лицам органов здравоохранения ценную информацию о распространении вируса в различных сообществах, особенно в свете большого количества зарегистрированных бессимптомных случаев. Кроме того, хотя статус антител никогда не является основным диагностическим инструментом, его можно использовать для помощи в клинической диагностике подозреваемых некритических случаев, которые проявляются через 7 дней или более после появления симптомов. В этих случаях использование простых, экономичных кассетных систем с антителами по месту оказания медицинской помощи может снизить нагрузку на пропускную способность молекулярного тестирования, чтобы сделать эти ресурсы более доступными для остробольных и критических пациентов.

Принцип анализа антител

В связи с быстрым распространением пандемии COVID-19 возникла необходимость в разработке тестов, которые могут определять наличие антител, вырабатываемых организмом в ответ на воздействие/инфекцию SARS-CoV- 2 вирус. Эти методологии тестирования основаны на аффинности связывания антиген-антитело, описанной ранее. Принцип теста основан на рекомбинантном антигене, полученном в лаборатории, который предназначен для имитации специфических структур вируса, заставляя любые антитела, присутствующие в цельной крови или сыворотке, с аффинностью связывания связываться с антигеном.Специфичность теста может сильно зависеть от выбранного антигена-мишени, поскольку некоторые вирусные структуры могут быть в высокой степени консервативными в широком семействе вирусов, а другие могут быть в высокой степени производными и специфичными для данного штамма. Поэтому важно понимать перекрестную реактивность используемого теста на другие вирусы, чтобы избежать неправильной интерпретации ложноположительного результата, который может свидетельствовать об обнаружении антигена аналогичного вируса, но не дает иммунитета к SARS-CoV-2. . Эти тесты делятся на 2 широкие категории: лабораторные иммуноанализы, для которых требуется считыватель или анализатор для обнаружения реакции, и системы на основе кассет, которые можно считывать в месте оказания медицинской помощи по изменению цвета индикаторной области, видимой невооруженным глазом. глаз.

Лабораторные иммуноанализы имеют ряд технических преимуществ по сравнению с кассетными системами. Поскольку они считываются чувствительными лабораторными приборами, а контролируемая аликвота доставляется в тест-систему, их можно считать количественными или полуколичественными тестами. Следовательно, они могут определить, сколько данного антитела (уровень титра) присутствует в единице объема сыворотки, и при работе на границе обнаружения их чувствительность и специфичность могут быть выше, чем у систем на основе кассет.Однако у этих систем есть реальные недостатки. Затраты на инфраструктуру, требования к венозной пункции, дополнительные этапы обработки образцов, время для получения результатов и практические проблемы с пропускной способностью являются проблематичными и существенно увеличивают стоимость одного теста.

Кассетные системы основаны на изменении цвета, которое видно человеческому глазу и больше подходит для использования в местах оказания медицинской помощи с почти немедленными результатами, доступными для медицинских работников и пациентов. Кассетные системы используют принцип латерального иммуноанализа или иммунохроматографии.Кассета содержит неглубокую лунку, в которую помещают примерно 10–15 мкл (например, 2 маленькие капли из пальца) цельной крови, сыворотки или плазмы вместе с небольшим количеством буфера, характерного для набора для тестирования. Кровь и буфер впитываются в пористую тест-полоску, пропитанную рекомбинантными вирусными антигенами, легированными индикатором (например, коллоидным золотом, частицами латекса, европием или квантовыми точками). Антитела из сыворотки связываются с антигенами на тест-полоске и распределяются по всей длине тест-полоски.В индикаторных областях тест-набора античеловеческие антитела, иммобилизованные на тест-полоске, будут связываться с комплексом антиген-антитело и удерживать их в индикаторной области. Коллоидное золото или другой краситель накапливается в области индикатора, что приводит к видимому изменению цвета вдоль узкой полосы впитывающей подложки. Может быть одна или несколько индикаторных областей с античеловеческими антителами, специфичными к IgM, IgG или другим иммуноглобулинам. Все тесты также должны содержать «контрольную» индикаторную линию, чтобы подтвердить, что испытуемый образец надлежащим образом испарился по всей длине анализа, а антигены в тест-наборе остаются жизнеспособными, тем самым подтверждая действительную процедуру тестирования ( ).Весь этот процесс, от нанесения пальца до результата, занимает менее 15 минут.

Типичная кассета для иммуноанализа с латеральным потоком с контрольной полосой «С» и двумя индикаторами антител. Полоса «М» указывает на присутствие IgM, а полоса «G» указывает на обнаружение IgG. Чтобы тест считался действительным, должна присутствовать контрольная полоса. Следовательно, тест-кассета слева будет считаться отрицательным результатом теста (контрольная полоса и отсутствие полос антител), тогда как кассета справа будет считаться недействительным результатом (отсутствие контрольной полосы, несмотря на присутствие обеих полос антител).

Эти тест-кассеты по месту оказания медицинской помощи предназначены для считывания бинарного результата (наличие/отсутствие) для каждой индикаторной области антител. Хотя степень изменения цвета может быть индикатором количества антител, присутствующих в образце, вариабельность между концентрациями антител в цельной крови, плазме и сыворотке, а также буфер, который добавляется «каплями», делает ненадежной попытку интерпретации результатов. интенсивность изменения цвета с помощью большинства доступных в настоящее время технологий. Наборы, в которых используются флуоресцентные индикаторы, могут давать полуколичественные результаты при использовании ручного или настольного ридера и соответствующих методов подготовки проб, но не могут считываться на глаз.Преимущества наборов для иммуноанализа с латеральным потоком заключаются в том, что их можно производить по низкой цене и в больших количествах, их можно использовать в пунктах оказания медицинской помощи с образцами цельной крови, взятыми из пальца, они требуют низкого использования человеческих ресурсов и ресурсов и могут обеспечить очень быстрое тестирование. результатов — пока пациент остается на месте. Это делает кассеты для иммуноанализа с латеральным потоком идеальным выбором для отбора проб на уровне населения и выборки рабочей силы для малых и крупных работодателей, как обсуждается далее.

Интерпретация результатов тестов на антитела в месте оказания медицинской помощи

Поскольку большинство тестовых наборов содержат индикаторные линии как для антител IgM, так и для антител IgG, может возникнуть несколько различных комбинаций и соответствующих интерпретаций результатов.Сами результаты всегда следует интерпретировать в соответствии с листком-вкладышем и инструкциями по использованию конкретного используемого тестового набора, но следующее обсуждение полезно для связывания бинарных результатов типичного теста на антитела с клиническим значением и предоставления обоснованных рекомендаций для пациентов и рабочая сила. Как обсуждалось ранее, антитела IgM продуцируются вскоре после заражения, тогда как IgG продуцируются в более отдаленные сроки. Использование обоих выгодно [[18], [19], [20]].В недавнем исследовании из 535 образцов плазмы, взятых у 173 пациентов с SARS-CoV-2, среднее время сероконверсии для общего количества антител (Ab), IgM, а затем IgG составляло 11-й, 12-й и 14-й день отдельно. Наличие антител было <40% среди пациентов в течение 1 недели после начала заболевания и быстро увеличивалось до 100,0% (Ab), 94,3% (IgM) и 79,8% (IgG) через 15 дней после начала заболевания. Напротив, обнаруживаемость РНК снизилась с 66,7% в образцах, собранных до 7-го дня, до 45,5% в течение 15-39 дней. Сочетание обнаружения РНК и антител значительно повысило чувствительность патогенной диагностики COVID-19 ( P < .001), даже на ранней стадии через 1 неделю после начала заболевания ( P  = 0,007). Более того, более высокий титр антител был независимо связан с худшей клинической классификацией ( P  = 0,006), что согласуется с пониманием того, что более симптоматические пациенты, вероятно, будут иметь в среднем более высокий ответ антител и более высокие маркеры воспаления. Используя коронавирус SARS в качестве примера, антитела IgM обычно превышают определяемый порог для этих тестов по месту оказания медицинской помощи примерно через 5–7 дней после первоначального появления симптомов (при условии, что у пациента действительно появляются симптомы после инфекции).Затем IgM остается выше порога обнаружения в течение 14–21 дня с момента появления симптомов. Примерно в середине подъема и падения продукции IgM, примерно на 14-й день после появления симптомов, уровень IgG превысит уровни обнаружения. Продукция IgG, как правило, продолжает расти в течение 28–35 дней после появления симптомов, достигая пика в период клинического выздоровления или после него. IgG обычно имеет длительный период полураспада и остается выше определяемого порога в течение месяцев или даже лет после разрешения инфекции.

Клинический уровень функционального иммунитета, обеспечиваемый антителами IgG к SARS-CoV-2, и пороговые значения их критической концентрации для этого вируса не определены.Поэтому рекомендации должны основываться на сходных вирусах и знаниях об иммунной системе. В конечном счете, эта информация будет доступна, и количественные тесты будут полезны для определения титров иммунитета через месяцы и годы после заражения COVID-19 или вакцинации, как только вакцины появятся. Основываясь на опыте с другими вирусами, если повторное заражение происходит тем же патогеном, можно ожидать, что тяжесть и продолжительность симптомов будут значительно снижены из-за врожденной памяти иммунной системы.Кроме того, ожидается, что гипериммунный ответ, который приводит к острому респираторному дистресс-синдрому и связан с высокой смертностью от этого вируса, может быть смягчен наличием предшествующего иммунного ответа.

Для интерпретации результатов с целью дать реципиентам тестирования содержательные рекомендации относительно поведения в обществе, необходимо учитывать несколько факторов:

  • 1.

    Наличие у субъекта симптомов или их отсутствие на момент тестирования на антитела ?

  • 2.

    Если есть симптомы, через какое время они появились?

  • 3.

    IgM положительный или отрицательный?

  • 4.

    IgG положительный или отрицательный?

Интерпретация результатов, когда субъект не имеет симптомов во время тестирования

И IgM, и IgG отрицательны

Иммунная система субъекта не вырабатывала никаких антител к целевому вирусному антигену, и у него нет подозрений на наличие COVID-19 ( , левое изображение).Маловероятно, что у субъекта была инфекция в прошлом, и у субъекта нет иммунитета к заражению в будущем. Этот результат не исключает того, что субъект недавно подвергся воздействию вируса и еще не вырабатывает антитела. Субъект, который недавно подвергся воздействию вируса, может распространить заболевание, даже если этот тест отрицательный и у него нет симптомов. Пока вирус распространяется в обществе, субъект должен продолжать практиковать социальное дистанцирование или текущие правила, чтобы защитить себя и окружающих.Если у субъекта действительно появляются симптомы, ему следует обратиться за медицинской помощью и повторить тестирование с учетом будущего потенциального воздействия или симптомов.

Положительный результат IgG и отрицательный результат IgM

Иммунная система субъекта выработала антитела длительного действия к целевому вирусному антигену ( ). Субъект, вероятно, заразился несколько недель назад, даже если симптомов не было. Субъект имеет некоторую степень функционального иммунитета к вирусу. В зависимости от времени, прошедшего с момента заражения, маловероятно, что субъект распространяет вирус.Для исключения выделения вируса можно использовать молекулярный тест (более подробно это обсуждается в следующем разделе).

Кассета для иммуноанализа латерального потока с положительным IgG. В обеих кассетах обнаруживается полоса IgG и присутствует контрольная полоса. Это указывает на действительный тест, подтверждающий наличие IgG к целевому антигену. Интенсивность цвета не следует интерпретировать количественно, и оба изображения считаются положительным результатом.

IgM положительный, а IgG отрицательный

Этот результат теста указывает на то, что иммунная система активно вырабатывает антитела к недавней инфекции ( ).Субъекта следует немедленно изолировать от здоровых людей и обратиться за медицинской помощью в случае появления симптомов. Этот субъект, вероятно, может заразить других, даже если он протекает бессимптомно. Субъект может оставаться бессимптомным, испытывать незначительные симптомы или ухудшать симптомы по мере прогрессирования заболевания. Субъект должен проявлять бдительность и обращаться за медицинской помощью в соответствии с симптомами, которые он испытывает. По крайней мере, через 14–21 день субъекту следует рассмотреть возможность повторного тестирования, чтобы подтвердить, что его статус антител IgG стал положительным, и он находится за пределами ожидаемого окна для выделения вируса, прежде чем вернуться к нормальной деятельности.Если требуется более быстрое возвращение к общественной деятельности, например, для критически важных промышленных рабочих, следует провести молекулярный тест для оценки статуса выделения вируса.

Кассета для иммуноанализа латерального потока с положительным IgM. В обеих кассетах обнаруживается полоса IgM и присутствует контрольная полоса. Это указывает на действительный тест, подтверждающий наличие IgM к целевому антигену. Интенсивность цвета не следует интерпретировать количественно, и оба изображения считаются положительным результатом.

И IgM, и IgG положительны

Иммунная система субъекта активно вырабатывает антитела к продолжающейся инфекции, которая, вероятно, началась более 14 дней назад ( ). Субъекта следует немедленно изолировать от здоровых людей и обратиться за медицинской помощью в случае появления симптомов. Субъект, вероятно, страдает бессимптомным течением болезни, но все еще может передавать болезнь другим. Рассмотрите возможность повторного тестирования через 7–14 дней, чтобы подтвердить статус только IgG, прежде чем вернуться к нормальной деятельности.Если требуется более быстрое возвращение к общественной деятельности, например, для критически важных промышленных рабочих, следует провести молекулярный тест для оценки статуса выделения вируса.

Кассета для иммуноанализа с латеральным потоком, положительная как на IgM, так и на IgG. На этой кассете показан случай, когда в дополнение к контрольной полосе присутствуют полосы как IgM, так и IgG. Это достоверный тест, обнаруживающий присутствие двух разных антигенов, один с аффинностью к IgM, а второй с аффинностью к антителам IgG.

Интерпретация результатов при наличии симптомов на момент тестирования

И IgM, и IgG отрицательны

Иммунная система субъекта не вырабатывала антитела к целевому вирусному антигену. Если с момента появления лихорадки или других симптомов прошло более 7 дней, маловероятно, что заболевание связано с COVID-19, но можно провести полнопанельный тест, включая COVID-19, грипп и бактериальный бронхит, если он доступен и рекомендован. на основании анамнеза и симптомов. Если с момента появления симптомов прошло менее 7 дней, COVID-19 нельзя исключить только с помощью тестирования на антитела.Субъект должен быть изолирован от других и может повторить тестирование на антитела по крайней мере через 7 дней после появления симптомов, если молекулярный тест не был доступен для подтверждения. Если симптомы тяжелые и подозрение на COVID-19 основано на клинических признаках, показан молекулярный тест для обнаружения вирусного генетического материала в образцах из дыхательных путей. Субъект не должен возвращаться к нормальной деятельности до тех пор, пока инфекция SARS-CoV-2 не будет исключена с помощью альтернативных диагнозов, молекулярного тестирования или повторного тестирования на антитела, или пока не пройдет соответствующее время после развития симптомов, чтобы исключить продолжающееся выделение вируса (выделение может происходить примерно до 31 день после заражения).

Положительный результат IgG и отрицательный результат IgM

Иммунная система субъекта выработала антитела к целевому вирусному антигену. Субъект, вероятно, находится на более поздних стадиях течения болезни, но все еще может быть заразен для других и способен распространять вирус. Субъект должен оставаться изолированным от отрицательного населения в течение как минимум 14 дней, чтобы свести к минимуму вероятность распространения вируса. Если требуется более быстрое возвращение к общественной деятельности, например, для критически важных промышленных рабочих, следует провести молекулярный тест для оценки статуса выделения вируса.

IgM положительный, IgG отрицательный

Иммунная система субъекта активно вырабатывает антитела к недавней инфекции целевым вирусом. Субъекта следует немедленно изолировать от здоровых людей и обратиться за медицинской помощью, соответствующей тяжести симптомов, которые он испытывает. Субъект может заразить других на этом этапе развития болезни. По крайней мере, через 14–21 день субъекту следует рассмотреть возможность повторного тестирования для определения статуса IgG, прежде чем вернуться к нормальной деятельности.

И IgM, и IgG положительны

Иммунная система субъекта активно вырабатывает антитела к продолжающейся инфекции, которая, вероятно, началась более 14 дней назад. Субъекта следует немедленно изолировать от здоровых людей и обратиться за дальнейшей медицинской помощью, соответствующей тяжести симптомов, которые он испытывает. Субъект, вероятно, все еще может передавать болезнь другим. Рассмотрите возможность повторного тестирования через 7–14 дней, чтобы подтвердить статус только IgG, прежде чем вернуться к нормальной деятельности. Если требуется более быстрое возвращение к общественной деятельности, например, для критически важных промышленных рабочих, следует провести молекулярный тест для оценки статуса выделения вируса.

Как указывалось ранее, независимо от методологии тестирования, используемой для обнаружения антител, эти тесты не предназначены для использования в качестве средства диагностики активной инфекции. В первую очередь это связано с тем, что 1) существует временная задержка между воздействием вируса и выработкой антител иммунной системой и 2) антитела будут сохраняться еще долго после того, как организм избавится от инфекции. Эти тесты являются отличным инструментом, который можно использовать параллельно с молекулярным тестированием, историей болезни и клинической картиной у пациентов с симптомами или использовать у бессимптомных пациентов в течение периода, чтобы понять рекомендации по возвращению к активности.Временные рамки, связанные с воздействием, появлением симптомов, выработкой IgM и IgG, исчезновением симптомов и выделением вируса на протяжении всего заболевания, не были точно определены количественно для SARS-CoV-2. В настоящее время большинство данных и рекомендаций были экстраполированы из исследований, проведенных при первой вспышке атипичной пневмонии в начале 21 века. Также важно понимать, что молекулярное тестирование также несовершенно: в некоторых сериях до 30% ложноотрицательных результатов.Поэтому, рассматривая чувствительность и специфичность тестирования на антитела, нужно быть достаточно академичным, чтобы признать недостатки, присущие использованию такого теста для оценки другого теста. Будет трудно понять, означает ли положительный тест на антитела у пациента с отрицательным молекулярным тестом, что первый тест был ложноположительным, или второй был ложноотрицательным. Врачи должны быть по-настоящему усердны с этими продуктами и должны быть удовлетворены данными, а также послужным списком компании, занимающейся их маркетингом.Мы ожидаем, что в течение следующих 6–18 месяцев в рецензируемой литературе появится гораздо больше информации, которая улучшит интерпретацию и полезность тестов на антитела.

Долгосрочный иммунитет — существует ли он при COVID-19?

Исследование, проведенное после SARS, аналогичного коронавируса, вызвавшего эпидемию в 2003 году, показало, что у выживших сохранялись нейтрализующие антитела в среднем в течение 2 лет, после чего количество антител снижалось. Другие коронавирусы, циркулирующие среди людей, также приводят к частичному иммунитету на какой-то период.Согласно недавней публикации в журнале Science, вопрос об иммунитете имеет значение для того, следует ли COVID-19 годовому циклу, подобному сезонному гриппу, или он становится бездействующим на несколько лет, а затем снова вспыхивает. Авторы отметили, что 2 других циркулирующих коронавируса (OC43 и HKU1), которые вызывают простуду, в среднем обеспечивают около 45 недель иммунитета. Они обнаружили, что если новый вирус будет следовать этой схеме, он, вероятно, будет вызывать ежегодные вспышки [21]. Однако, вообще говоря, чем хуже вы становитесь из-за инфекции и сильной реакции иммунной системы на нее, тем более сильный иммунитет вырабатывается.Следовательно, можно предположить, что те люди, которые больше всего болеют, имеют самый длительный и эффективный иммунитет после повторного контакта с тем же вирусом. В исследовании Callow et al. [22], людям добровольно вводили в ноздри коронавирус 229E, который также вызывает симптомы простуды. Десять заразились, у восьми появились симптомы простуды. Через год все, кроме одного, снова заразились. Большинство заразились повторно, но у тех, кто переболел ранее, симптомы простуды не проявлялись. Более того, период, в течение которого пациенты выделяли вирус и были потенциально заразны, был короче.Новый вирус, SARS-CoV-2, генетически подобен первому вирусу SARS (отсюда и «2»), но по-разному влияет на людей. Он не так смертелен, как оригинальный SARS, но более легко распространяется (R O выше) [23]. У многих инфицированных людей симптомы вообще не проявляются, но они потенциально могут передавать вирус другим людям.

В совсем недавнем отчете из Китая, который еще не прошел рецензирование, был обнаружен широкий спектр антител среди людей с легкими случаями вируса. Самое поразительное, что после болезни у молодых людей было меньше антител, а у 30% обследованных были низкие уровни.У некоторых людей не было следов антител. Это подняло вопрос о том, может ли человек с легкой или бессимптомной инфекцией, подтвержденной чувствительным тестом полимеразной цепной реакции, быть восприимчивым ко второй инфекции. Титры нейтрализующих антител положительно коррелировали с уровнями СРБ в плазме, но отрицательно коррелировали с количеством лимфоцитов у пациентов во время госпитализации, что указывает на связь между степенью гуморального ответа и клеточным иммунным ответом.Однако люди с легкой формой заболевания, у которых не вырабатывается высокий уровень антител, могут подвергаться повышенному риску повторного заражения, но у них вряд ли появятся серьезные симптомы, хотя они могут быть заразными. Таким образом, с теми, у кого не вырабатываются антитела, вероятно, следует обращаться так, как если бы они никогда не болели болезнью с точки зрения социального дистанцирования, даже если их положительный результат был подтвержден с помощью молекулярного тестирования.

Понимание тестирования на антитела к COVID-19

Abstract

Ортопедическое сообщество стало свидетелем того, как пандемия COVID-19 сократила объемы плановых хирургических вмешательств в большинстве регионов.Пациенты и основные работники, такие как поставщики медицинских услуг, по-прежнему справедливо обеспокоены тем, как должным образом вернуться к работе и общественной деятельности безопасным и ответственным образом. Многие считают, что массовое тестирование на наличие антител может способствовать принятию решений, основанных на фактических данных, как в индивидуальном, так и в общественном масштабе. Много информации и такое же количество дезинформации было получено при тестировании на антитела. Информация о роли и науке такого тестирования критически важна для эффективного понимания программ и управления ими.

Ключевые слова: COVID-19, COVID, коронавирус, антитела, антитела, тестирование, ПЦР, скрининг. Пациенты и основные работники, такие как поставщики медицинских услуг, по-прежнему справедливо обеспокоены тем, как должным образом вернуться к работе и общественной деятельности безопасным и ответственным образом. Возможно, скрининг всего персонала и тестирование всех предоперационных плановых пациентов на наличие вируса с помощью молекулярного тестирования поможет свести к минимуму второй всплеск заболевания.Многие считают, что массовое тестирование на наличие антител может способствовать принятию решений, основанных на фактических данных, как в индивидуальном, так и в общественном масштабе. Много информации и такое же количество дезинформации было получено при тестировании на антитела. Мы считаем, что такое тестирование иммунного ответа имеет реальную ценность, но также знаем, что просвещение о роли и науке такого тестирования критически важно для эффективного понимания программ и управления ими.

31 декабря 2019 г. в городе Ухань, провинция Хубэй, Китай, было выявлено 27 случаев пневмонии неизвестной этиологии [[1], [2]].В конечном итоге возбудитель был идентифицирован из образцов мазка из горла, проведенного Китайским центром по контролю и профилактике заболеваний в январе 2020 года, и впоследствии был назван коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2). Всемирная организация здравоохранения упростила название болезни до COVID-19 [3]. На сегодняшний день у многих пациентов с COVID-19 развились легкие симптомы, такие как сухой кашель, боль в горле и лихорадка. В большинстве случаев заболевание разрешилось спонтанно, и многие инфицированные пациенты оказались полностью бессимптомными.Однако у некоторых развились различные фатальные осложнения, включая органную недостаточность, септический шок, отек легких, тяжелую пневмонию и атипичный острый респираторный дистресс-синдром [[4], [5], [6]]. Как правило, пациенты, нуждающиеся в интенсивной терапии, были старше и имели множественные сопутствующие заболевания, включая сердечно-сосудистые, цереброваскулярные, эндокринные, пищеварительные и респираторные заболевания [7].

В настоящее время существует несколько исследований, определяющих патофизиологические характеристики COVID-19, и существует большая неопределенность в отношении механизма его распространения.Текущие знания в значительной степени основаны на аналогичных коронавирусах, которые передаются от человека к человеку через респираторные фомиты [8]. Как правило, респираторные вирусы наиболее заразны, когда у пациента есть симптомы. Тем не менее, появляется все больше доказательств того, что передача от человека человеку может происходить во время бессимптомного инкубационного периода COVID-19, который, по оценкам, составляет от 2 до 10 дней («Как коронавирус распространяется | CDC, й) [9,10].

По состоянию на 12 апреля 2020 г. было подтверждено 1 853 155 случаев заболевания COVID-19, и примерно треть случаев приходится на США.В Соединенных Штатах 22 071 из 114 247 смертей во всем мире были вызваны этой болезнью [11]. Важно отметить, что эти цифры, вероятно, сильно занижены, поскольку представленные данные отражают только лабораторно подтвержденные диагнозы. В Соединенных Штатах действуют строгие правила в отношении тяжести клинических симптомов до прохождения теста на COVID-19, что, безусловно, недооценивает фактическую нагрузку. Распространение COVID-19 можно остановить за счет раннего выявления, изоляции, оперативного лечения и внедрения надежной системы отслеживания контактов [12].Другие стратегические цели включают средства определения клинической тяжести, степени передачи и оптимизации вариантов лечения. Кроме того, Соединенные Штаты приостановили въезд всех иммигрантов и неиммигрантов, побывавших в зонах высокого риска, с целью остановить дальнейшее распространение вируса [13]. Ключевая цель, не связанная с медицинскими результатами, заключается также в том, чтобы свести к минимуму экономические последствия вируса. Часть управления возвращением к общественной деятельности, а также минимизация риска повторного всплеска случаев заболевания включает в себя надежные стратегии тестирования как для инфицированных пациентов, так и для тех, у кого в определенной степени появился иммунитет из-за предыдущего контакта.

Что касается диагностического тестирования, многие компании со всего мира выпустили наборы для тестирования на COVID-2019 [14,15]. В каждой широкой категории тестов есть несколько типов тестов, подходящих для различных вариантов использования. Один тип, который сейчас становится все более доступным, — это молекулярно-диагностическое тестирование, которое выявляет присутствие вирусного генома. Эти тесты особенно полезны для диагностики и сортировки пациентов, наблюдения за распространением болезни, выявления штаммов и мутаций (включая секвенирование нового поколения) и проверки текущего статуса инфекции среди сотрудников.Это тестирование с помощью полимеразной цепной реакции позволяет выявить наличие генетического материала вируса (РНК) в мазке из носа или горла, а в последнее время и в слюне. Эти тесты могут определить, есть ли у кого-то активная текущая инфекция. Эти тесты предназначены не для количественной оценки наличия вирусной нагрузки, а для амплификации присутствия любого вирусного материала для определения наличия или отсутствия вируса в образцах.

Другой тип теста оценивает развитие иммунного ответа на вирус у пациентов путем выявления присутствия 3 типов антител (например, IgG, IgM и IgA), которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию.Тесты на иммунный ответ не обеспечивают такого же уровня обнаружения, как диагностика вирусного генома при ранней инфекции, поскольку организму требуется время, чтобы отреагировать на антигенную вирусную инвазию. Хотя эти антитела менее полезны для мониторинга при немедленном ответе и не показаны при диагностике и скрининге активной ранней инфекции, они будут необходимы в случае вторичного рецидива вируса в сообществе. Поскольку вирусный геном больше не обнаруживается после выздоровления пациента, иммунный статус и статус данной популяции, связанный с их способностью заражаться или сопротивляться инфекции, будут основываться на их статусе антител.Этот тип теста представляет собой серологический тест (кровь) и документирует наличие антител, вырабатываемых иммунной системой против SARS-CoV-2. Для более традиционных лабораторных тестов может потребоваться традиционный забор крови, тогда как для более новых систем требуются только образцы крови, взятые из пальца. Учитывая характер этих тестов и текущую потребность в наращивании тестирования, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США выдает разрешение на экстренное использование методов тестирования, включая латеральный иммуноанализ на COVID-19.Врачам важно понимать, что для большинства продаваемых продуктов в этой категории сегодня по-прежнему требуется лабораторная сертификация в соответствии с Поправками об улучшении клинической лаборатории для проведения тестов средней или высокой сложности, и, несмотря на их простоту, их нельзя проводить в обычном частном кабинете [16]. ]. Детали процесса авторизации аварийного использования и его последствия выходят за рамки этой статьи и быстро меняются. Тем не менее, руководство Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов легко найти в Интернете с обновлениями в режиме реального времени.

Помогая выявлять иммунитет подвергшегося воздействию населения, отслеживать распространение заболевания, проверять статус инфекции среди рабочей силы и изучать прогрессирование заболевания, данные можно использовать для принятия обоснованных решений о карантине и социальном дистанцировании на региональном или местном уровне. и может использоваться для стратификации рисков поставщиков медицинских услуг, полиции, пожарных, коммунальных служб и других основных работников. Тестирование также может обеспечить душевное спокойствие хирургам, которые не уверены, подвергались ли они воздействию вируса и вырабатывался ли у них когда-либо иммунитет к вирусу.Знание этих фактов может помочь принять решение о необходимости средств индивидуальной защиты и готовности работать с пациентами с COVID-19 в факультативных условиях.

Функция антитела

Антитело, также называемое иммуноглобулином, представляет собой защитный белок, вырабатываемый иммунной системой в ответ на присутствие чужеродного вещества (антигена), такого как патоген. Антитела распознают и фиксируются на антигенах, чтобы удалить их из организма. Антитела представляют собой белки, продуцируемые и секретируемые В-клетками (лимфоцитами) [17].

Поскольку основной функцией В-лимфоцитов является выработка антител, важно понимать характерные особенности этих защитных молекул и описывать их различные изотипы или классы. Антитела представляют собой гликозилированные белковые молекулы, присутствующие на поверхности В-клеток (поверхностные иммуноглобулины), которые служат рецепторами антигенов или секретируются во внеклеточное пространство, где они могут связывать и нейтрализовать свои антигены-мишени [17]. Одна молекула антитела состоит из 4-х белковых цепей: 2-х «тяжелых» (Н-цепи) и 2-х «легких» (L-цепей), связанных друг с другом дисульфидными связями.N-концевые области тяжелой и легкой цепей, которые в совокупности составляют сайт связывания антигена, являются местом, где находится вариабельность между одной молекулой антитела и другой, что определяет специфичность. Важной особенностью является то, что каждое антитело распознает определенный антиген, явление, называемое «специфичностью антител». Например, антитело, которое распознает вирус паротита, не может распознавать вирус кори и может распознавать только один конкретный сайт связывания на вирусе паротита. Скорее всего, будет несколько антител к нескольким различным сайтам связывания на антигене, таком как вирус.Например, некоторые антитела к COVID-19 будут нацеливаться на сайты связывания на белках внешней оболочки, в то время как некоторые могут нацеливаться на сайты связывания нуклеиновых кислот, но каждое из них будет специфичным и уникальным. Перекрёстная реактивность возникает только тогда, когда 2 разных, но похожих вируса имеют одинаковую структуру. Например, если несколько штаммов коронавируса сохранили участки нуклеиновой кислоты, которые не подверглись мутации, антитело, нацеленное на этот участок в одном, может воздействовать на идентичный участок в другом. И наоборот, антитело, которое распознает вирус кори, обычно не может распознавать вирус эпидемического паротита.

Существует пять изотипов или классов антител (IgM, IgD, IgG, IgA и IgE), которые различаются по С-концевым областям тяжелых цепей, которые являются постоянными и, следовательно, не участвуют в антигенной привязка. Вместо этого эти области (обозначенные Fc) важны для общих эффекторных функций антител, средств, с помощью которых антитела устраняют патогены или, альтернативно, вызывают повреждение тканей. Следует отметить, что существует 4 подкласса или изотипа антител IgG (IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4), разграничение которых выходит за рамки данного обсуждения.Антитела выполняют эффекторные функции тремя основными способами [17]:

Антитела обнаруживаются в плазме и внеклеточной жидкости. Антитела выполняют 3 основные функции.

  • 1)

    Антитела секретируются в кровь и слизистые оболочки, где они связываются с чужеродными веществами, такими как патогены и токсины, и инактивируют их (нейтрализация). Нейтрализация антител важна для защиты от вирусов, поскольку она может помешать вирусу проникнуть в клетки и заразить их.Он также важен для связывания с бактериальными токсинами и является основным механизмом защиты, обеспечиваемым успешной вакцинацией.

  • 2)

    Антитела способствуют фагоцитозу чужеродных веществ фагоцитирующими клетками (опсонизация). Связывание антител, например, не предотвратит репликацию бактерий. Скорее, в этих условиях механизм усиленной защиты за счет опсонизации будет усиливать фагоцитоз макрофагами и нейтрофилами.

  • 3)

    Третья функция – активация антителами системы комплемента для уничтожения патогенов посредством лизиса и усиления хемотаксиса.

После инфекции клетки, продуцирующие специфические антитела к патогенам, размножаются и увеличиваются пропорционально. В результате организм защищен от повторного заражения. Эта особенность называется «иммунологической памятью». Одной из наиболее важных особенностей иммунного ответа является его способность сохранять память о предыдущих инфекциях, и это также лежит в основе эффективности прививок. Это защищает людей от повторного заражения и ограничивает распространение инфекции в обществе.Иммунная память может быть очень долговечной; Иммунологическая память о коревой инфекции у взрослых угасает так медленно, что потребуется более 3000 лет, чтобы уменьшить ее наполовину. Следовательно, это выходит далеко за рамки пожизненной защиты для этого конкретного антигена. Эти устойчивые долговременные изменения являются причиной того, что при вакцинации получаемая в результате защита дает долгосрочные преимущества. Внутри человека иммунная память должна быть распределена по всему телу. Циркулирующие антитела перемещаются в крови, достигая всех мест кровообращения, включая внеклеточное пространство и выделения.Естественные клетки-киллеры (NK) могут оставаться на страже в тканях «в боевой готовности», но не активироваться, готовые к быстрой атаке в случае повторного заражения. NK-клетки активируются в ответ на происходящие из макрофагов цитокины и служат для сдерживания вирусных инфекций, в то время как адаптивный иммунный ответ генерирует антиген-специфические цитотоксические Т-клетки, которые могут устранить инфекцию. NK-клетки борются с вирусными инфекциями, секретируя гамма-интерферон и TNFα, а также стимулируя близлежащие NK-клетки такими выделениями и разрушая физиологически нездоровые клетки из-за вирусной инфекции или злокачественных новообразований с помощью сложных механизмов, выходящих за рамки этого обзора.

Наконец, некоторые инфекции настолько сильно влияют на вид, что на дереве эволюции можно увидеть отпечаток отдельных патогенов. Если инфекция смертельна, выживут только те особи, у которых есть гены, кодирующие эффективную резистентность, и они произведут следующее поколение, тем самым стимулируя коллективный иммунитет за счет естественного отбора, а не вакцинации или инфекции. Современные методы анализа наследственности продемонстрировали, как коэволюция хозяина и инфекции сформировала структуру иммунной системы и рецепторов, которые она использует для распознавания патогенов и борьбы с ними.

Структура и характеристики изотипов антител

Прежде чем обсуждать тесты на антитела, стоит понять, как человеческие антитела классифицируются на 5 изотипов (IgM, IgD, IgG, IgA и IgE) в соответствии с их Н-цепями, которые обеспечивают каждый изотип Отличительные черты и роли.

IgG

IgG является наиболее распространенным изотипом антител в крови (плазме), на его долю приходится от 70 до 75% человеческих иммуноглобулинов (антител). IgG связывает антиген и управляет распознаванием комплексов антиген-антитело лейкоцитами и макрофагами.IgG передаются плоду через плаценту и защищают младенца до тех пор, пока его собственная иммунная система не начнет функционировать. IgG в значительной степени отвечает за долговременный иммунитет после инфекции или вакцинации.

IgM

IgM обычно циркулируют в крови и составляют около 10% иммуноглобулинов человека. IgM обычно имеет пентамерную структуру, в которой 5 основных молекул Y-образной формы связаны вместе. В-клетки сначала продуцируют IgM в ответ на микробную инфекцию/инвазию антигена. Это иммуноглобулины ранней фазы, которые сначала развиваются во время острой инфекции.Хотя IgM имеет более низкое сродство к антигенам, чем IgG, он обладает более высокой авидностью к антигенам из-за своей пентамерной структуры. IgM, связываясь с рецептором клеточной поверхности, также активирует клеточные сигнальные пути.

IgA

IgA в изобилии содержится в сыворотке, слизи носа, слюне, грудном молоке и кишечной жидкости и составляет от 10 до 15% иммуноглобулинов человека. IgA образует димеры (т.е. 2 мономера IgA, соединенные вместе).

IgE

IgE присутствует в незначительных количествах, составляя не более 0.001% иммуноглобулинов человека. Его основная функция заключается в защите от паразитов. В регионах, где паразитарная инфекция встречается редко, IgE в первую очередь участвует в развитии аллергии.

IgD

IgD составляют менее 1% иммуноглобулинов человека. IgD может участвовать в индукции продукции антител в В-клетках, но его точная функция остается неизвестной.

Молекулярное тестирование на вирусную РНК

Методы молекулярного тестирования считаются единственным надежным средством диагностики активного случая COVID-19, особенно на ранних стадиях течения инфекции, и являются единственным средством определения того, заразен ли пациент для других.Обнаружив присутствие вирусного генетического материала в носовых, ротовых и дыхательных путях, можно определить, активно ли пациент выделяет вирус, который может передаваться другим. Эти тесты, возможно, наиболее полезны на ранних стадиях инфекции, поскольку они могут подтвердить наличие вируса за 2 дня до появления симптомов. Учитывая, что антитела могут быть обнаружены только через 6-7 дней после появления симптомов, молекулярные тесты могут ускорить диагностическое окно до 9 дней. Продолжительность выделения вируса может сильно различаться и зависеть от тяжести симптомов, продолжительности болезни и специфического иммунного ответа пациента.Как правило, выделение вируса невозможно обнаружить через 21–35 дней после появления симптомов или через 3–5 дней после исчезновения симптомов у пациента. В конце течения болезни вирусная нагрузка в конечном итоге становится неопределяемой, и поэтому молекулярный тест не выявляет предшествующую инфекцию, даже недавно разрешившуюся. Хотя молекулярные тесты на SARS-CoV-2 становятся все более доступными и дают результаты быстрее, для всех доступных в настоящее время тестов требуется платформа лабораторного анализатора, которая, как правило, находится в дефиците и не заказана в течение нескольких месяцев.Во многих лабораториях по-прежнему не хватает образцов для молекулярного тестирования, и должностные лица общественного здравоохранения ввели строгие правила, требующие наличия тяжелых симптомов для получения права на получение молекулярного теста.

Таким образом, очевидно, что тестирование на антитела играет важную роль в диагностическом наборе инструментов для COVID-19. Тестирование на антитела может дать людям важную информацию об их функциональном иммунитете к продолжающейся пандемии, дать душевное спокойствие и помочь в принятии решений о возвращении к общественной деятельности и работе.Эти тесты также предоставляют должностным лицам органов здравоохранения ценную информацию о распространении вируса в различных сообществах, особенно в свете большого количества зарегистрированных бессимптомных случаев. Кроме того, хотя статус антител никогда не является основным диагностическим инструментом, его можно использовать для помощи в клинической диагностике подозреваемых некритических случаев, которые проявляются через 7 дней или более после появления симптомов. В этих случаях использование простых, экономичных кассетных систем с антителами по месту оказания медицинской помощи может снизить нагрузку на пропускную способность молекулярного тестирования, чтобы сделать эти ресурсы более доступными для остробольных и критических пациентов.

Принцип анализа антител

В связи с быстрым распространением пандемии COVID-19 возникла необходимость в разработке тестов, которые могут определять наличие антител, вырабатываемых организмом в ответ на воздействие/инфекцию SARS-CoV- 2 вирус. Эти методологии тестирования основаны на аффинности связывания антиген-антитело, описанной ранее. Принцип теста основан на рекомбинантном антигене, полученном в лаборатории, который предназначен для имитации специфических структур вируса, заставляя любые антитела, присутствующие в цельной крови или сыворотке, с аффинностью связывания связываться с антигеном.Специфичность теста может сильно зависеть от выбранного антигена-мишени, поскольку некоторые вирусные структуры могут быть в высокой степени консервативными в широком семействе вирусов, а другие могут быть в высокой степени производными и специфичными для данного штамма. Поэтому важно понимать перекрестную реактивность используемого теста на другие вирусы, чтобы избежать неправильной интерпретации ложноположительного результата, который может свидетельствовать об обнаружении антигена аналогичного вируса, но не дает иммунитета к SARS-CoV-2. . Эти тесты делятся на 2 широкие категории: лабораторные иммуноанализы, для которых требуется считыватель или анализатор для обнаружения реакции, и системы на основе кассет, которые можно считывать в месте оказания медицинской помощи по изменению цвета индикаторной области, видимой невооруженным глазом. глаз.

Лабораторные иммуноанализы имеют ряд технических преимуществ по сравнению с кассетными системами. Поскольку они считываются чувствительными лабораторными приборами, а контролируемая аликвота доставляется в тест-систему, их можно считать количественными или полуколичественными тестами. Следовательно, они могут определить, сколько данного антитела (уровень титра) присутствует в единице объема сыворотки, и при работе на границе обнаружения их чувствительность и специфичность могут быть выше, чем у систем на основе кассет.Однако у этих систем есть реальные недостатки. Затраты на инфраструктуру, требования к венозной пункции, дополнительные этапы обработки образцов, время для получения результатов и практические проблемы с пропускной способностью являются проблематичными и существенно увеличивают стоимость одного теста.

Кассетные системы основаны на изменении цвета, которое видно человеческому глазу и больше подходит для использования в местах оказания медицинской помощи с почти немедленными результатами, доступными для медицинских работников и пациентов. Кассетные системы используют принцип латерального иммуноанализа или иммунохроматографии.Кассета содержит неглубокую лунку, в которую помещают примерно 10–15 мкл (например, 2 маленькие капли из пальца) цельной крови, сыворотки или плазмы вместе с небольшим количеством буфера, характерного для набора для тестирования. Кровь и буфер впитываются в пористую тест-полоску, пропитанную рекомбинантными вирусными антигенами, легированными индикатором (например, коллоидным золотом, частицами латекса, европием или квантовыми точками). Антитела из сыворотки связываются с антигенами на тест-полоске и распределяются по всей длине тест-полоски.В индикаторных областях тест-набора античеловеческие антитела, иммобилизованные на тест-полоске, будут связываться с комплексом антиген-антитело и удерживать их в индикаторной области. Коллоидное золото или другой краситель накапливается в области индикатора, что приводит к видимому изменению цвета вдоль узкой полосы впитывающей подложки. Может быть одна или несколько индикаторных областей с античеловеческими антителами, специфичными к IgM, IgG или другим иммуноглобулинам. Все тесты также должны содержать «контрольную» индикаторную линию, чтобы подтвердить, что испытуемый образец надлежащим образом испарился по всей длине анализа, а антигены в тест-наборе остаются жизнеспособными, тем самым подтверждая действительную процедуру тестирования ( ).Весь этот процесс, от нанесения пальца до результата, занимает менее 15 минут.

Типичная кассета для иммуноанализа с латеральным потоком с контрольной полосой «С» и двумя индикаторами антител. Полоса «М» указывает на присутствие IgM, а полоса «G» указывает на обнаружение IgG. Чтобы тест считался действительным, должна присутствовать контрольная полоса. Следовательно, тест-кассета слева будет считаться отрицательным результатом теста (контрольная полоса и отсутствие полос антител), тогда как кассета справа будет считаться недействительным результатом (отсутствие контрольной полосы, несмотря на присутствие обеих полос антител).

Эти тест-кассеты по месту оказания медицинской помощи предназначены для считывания бинарного результата (наличие/отсутствие) для каждой индикаторной области антител. Хотя степень изменения цвета может быть индикатором количества антител, присутствующих в образце, вариабельность между концентрациями антител в цельной крови, плазме и сыворотке, а также буфер, который добавляется «каплями», делает ненадежной попытку интерпретации результатов. интенсивность изменения цвета с помощью большинства доступных в настоящее время технологий. Наборы, в которых используются флуоресцентные индикаторы, могут давать полуколичественные результаты при использовании ручного или настольного ридера и соответствующих методов подготовки проб, но не могут считываться на глаз.Преимущества наборов для иммуноанализа с латеральным потоком заключаются в том, что их можно производить по низкой цене и в больших количествах, их можно использовать в пунктах оказания медицинской помощи с образцами цельной крови, взятыми из пальца, они требуют низкого использования человеческих ресурсов и ресурсов и могут обеспечить очень быстрое тестирование. результатов — пока пациент остается на месте. Это делает кассеты для иммуноанализа с латеральным потоком идеальным выбором для отбора проб на уровне населения и выборки рабочей силы для малых и крупных работодателей, как обсуждается далее.

Интерпретация результатов тестов на антитела в месте оказания медицинской помощи

Поскольку большинство тестовых наборов содержат индикаторные линии как для антител IgM, так и для антител IgG, может возникнуть несколько различных комбинаций и соответствующих интерпретаций результатов.Сами результаты всегда следует интерпретировать в соответствии с листком-вкладышем и инструкциями по использованию конкретного используемого тестового набора, но следующее обсуждение полезно для связывания бинарных результатов типичного теста на антитела с клиническим значением и предоставления обоснованных рекомендаций для пациентов и рабочая сила. Как обсуждалось ранее, антитела IgM продуцируются вскоре после заражения, тогда как IgG продуцируются в более отдаленные сроки. Использование обоих выгодно [[18], [19], [20]].В недавнем исследовании из 535 образцов плазмы, взятых у 173 пациентов с SARS-CoV-2, среднее время сероконверсии для общего количества антител (Ab), IgM, а затем IgG составляло 11-й, 12-й и 14-й день отдельно. Наличие антител было <40% среди пациентов в течение 1 недели после начала заболевания и быстро увеличивалось до 100,0% (Ab), 94,3% (IgM) и 79,8% (IgG) через 15 дней после начала заболевания. Напротив, обнаруживаемость РНК снизилась с 66,7% в образцах, собранных до 7-го дня, до 45,5% в течение 15-39 дней. Сочетание обнаружения РНК и антител значительно повысило чувствительность патогенной диагностики COVID-19 ( P < .001), даже на ранней стадии через 1 неделю после начала заболевания ( P  = 0,007). Более того, более высокий титр антител был независимо связан с худшей клинической классификацией ( P  = 0,006), что согласуется с пониманием того, что более симптоматические пациенты, вероятно, будут иметь в среднем более высокий ответ антител и более высокие маркеры воспаления. Используя коронавирус SARS в качестве примера, антитела IgM обычно превышают определяемый порог для этих тестов по месту оказания медицинской помощи примерно через 5–7 дней после первоначального появления симптомов (при условии, что у пациента действительно появляются симптомы после инфекции).Затем IgM остается выше порога обнаружения в течение 14–21 дня с момента появления симптомов. Примерно в середине подъема и падения продукции IgM, примерно на 14-й день после появления симптомов, уровень IgG превысит уровни обнаружения. Продукция IgG, как правило, продолжает расти в течение 28–35 дней после появления симптомов, достигая пика в период клинического выздоровления или после него. IgG обычно имеет длительный период полураспада и остается выше определяемого порога в течение месяцев или даже лет после разрешения инфекции.

Клинический уровень функционального иммунитета, обеспечиваемый антителами IgG к SARS-CoV-2, и пороговые значения их критической концентрации для этого вируса не определены.Поэтому рекомендации должны основываться на сходных вирусах и знаниях об иммунной системе. В конечном счете, эта информация будет доступна, и количественные тесты будут полезны для определения титров иммунитета через месяцы и годы после заражения COVID-19 или вакцинации, как только вакцины появятся. Основываясь на опыте с другими вирусами, если повторное заражение происходит тем же патогеном, можно ожидать, что тяжесть и продолжительность симптомов будут значительно снижены из-за врожденной памяти иммунной системы.Кроме того, ожидается, что гипериммунный ответ, который приводит к острому респираторному дистресс-синдрому и связан с высокой смертностью от этого вируса, может быть смягчен наличием предшествующего иммунного ответа.

Для интерпретации результатов с целью дать реципиентам тестирования содержательные рекомендации относительно поведения в обществе, необходимо учитывать несколько факторов:

  • 1.

    Наличие у субъекта симптомов или их отсутствие на момент тестирования на антитела ?

  • 2.

    Если есть симптомы, через какое время они появились?

  • 3.

    IgM положительный или отрицательный?

  • 4.

    IgG положительный или отрицательный?

Интерпретация результатов, когда субъект не имеет симптомов во время тестирования

И IgM, и IgG отрицательны

Иммунная система субъекта не вырабатывала никаких антител к целевому вирусному антигену, и у него нет подозрений на наличие COVID-19 ( , левое изображение).Маловероятно, что у субъекта была инфекция в прошлом, и у субъекта нет иммунитета к заражению в будущем. Этот результат не исключает того, что субъект недавно подвергся воздействию вируса и еще не вырабатывает антитела. Субъект, который недавно подвергся воздействию вируса, может распространить заболевание, даже если этот тест отрицательный и у него нет симптомов. Пока вирус распространяется в обществе, субъект должен продолжать практиковать социальное дистанцирование или текущие правила, чтобы защитить себя и окружающих.Если у субъекта действительно появляются симптомы, ему следует обратиться за медицинской помощью и повторить тестирование с учетом будущего потенциального воздействия или симптомов.

Положительный результат IgG и отрицательный результат IgM

Иммунная система субъекта выработала антитела длительного действия к целевому вирусному антигену ( ). Субъект, вероятно, заразился несколько недель назад, даже если симптомов не было. Субъект имеет некоторую степень функционального иммунитета к вирусу. В зависимости от времени, прошедшего с момента заражения, маловероятно, что субъект распространяет вирус.Для исключения выделения вируса можно использовать молекулярный тест (более подробно это обсуждается в следующем разделе).

Кассета для иммуноанализа латерального потока с положительным IgG. В обеих кассетах обнаруживается полоса IgG и присутствует контрольная полоса. Это указывает на действительный тест, подтверждающий наличие IgG к целевому антигену. Интенсивность цвета не следует интерпретировать количественно, и оба изображения считаются положительным результатом.

IgM положительный, а IgG отрицательный

Этот результат теста указывает на то, что иммунная система активно вырабатывает антитела к недавней инфекции ( ).Субъекта следует немедленно изолировать от здоровых людей и обратиться за медицинской помощью в случае появления симптомов. Этот субъект, вероятно, может заразить других, даже если он протекает бессимптомно. Субъект может оставаться бессимптомным, испытывать незначительные симптомы или ухудшать симптомы по мере прогрессирования заболевания. Субъект должен проявлять бдительность и обращаться за медицинской помощью в соответствии с симптомами, которые он испытывает. По крайней мере, через 14–21 день субъекту следует рассмотреть возможность повторного тестирования, чтобы подтвердить, что его статус антител IgG стал положительным, и он находится за пределами ожидаемого окна для выделения вируса, прежде чем вернуться к нормальной деятельности.Если требуется более быстрое возвращение к общественной деятельности, например, для критически важных промышленных рабочих, следует провести молекулярный тест для оценки статуса выделения вируса.

Кассета для иммуноанализа латерального потока с положительным IgM. В обеих кассетах обнаруживается полоса IgM и присутствует контрольная полоса. Это указывает на действительный тест, подтверждающий наличие IgM к целевому антигену. Интенсивность цвета не следует интерпретировать количественно, и оба изображения считаются положительным результатом.

И IgM, и IgG положительны

Иммунная система субъекта активно вырабатывает антитела к продолжающейся инфекции, которая, вероятно, началась более 14 дней назад ( ). Субъекта следует немедленно изолировать от здоровых людей и обратиться за медицинской помощью в случае появления симптомов. Субъект, вероятно, страдает бессимптомным течением болезни, но все еще может передавать болезнь другим. Рассмотрите возможность повторного тестирования через 7–14 дней, чтобы подтвердить статус только IgG, прежде чем вернуться к нормальной деятельности.Если требуется более быстрое возвращение к общественной деятельности, например, для критически важных промышленных рабочих, следует провести молекулярный тест для оценки статуса выделения вируса.

Кассета для иммуноанализа с латеральным потоком, положительная как на IgM, так и на IgG. На этой кассете показан случай, когда в дополнение к контрольной полосе присутствуют полосы как IgM, так и IgG. Это достоверный тест, обнаруживающий присутствие двух разных антигенов, один с аффинностью к IgM, а второй с аффинностью к антителам IgG.

Интерпретация результатов при наличии симптомов на момент тестирования

И IgM, и IgG отрицательны

Иммунная система субъекта не вырабатывала антитела к целевому вирусному антигену. Если с момента появления лихорадки или других симптомов прошло более 7 дней, маловероятно, что заболевание связано с COVID-19, но можно провести полнопанельный тест, включая COVID-19, грипп и бактериальный бронхит, если он доступен и рекомендован. на основании анамнеза и симптомов. Если с момента появления симптомов прошло менее 7 дней, COVID-19 нельзя исключить только с помощью тестирования на антитела.Субъект должен быть изолирован от других и может повторить тестирование на антитела по крайней мере через 7 дней после появления симптомов, если молекулярный тест не был доступен для подтверждения. Если симптомы тяжелые и подозрение на COVID-19 основано на клинических признаках, показан молекулярный тест для обнаружения вирусного генетического материала в образцах из дыхательных путей. Субъект не должен возвращаться к нормальной деятельности до тех пор, пока инфекция SARS-CoV-2 не будет исключена с помощью альтернативных диагнозов, молекулярного тестирования или повторного тестирования на антитела, или пока не пройдет соответствующее время после развития симптомов, чтобы исключить продолжающееся выделение вируса (выделение может происходить примерно до 31 день после заражения).

Положительный результат IgG и отрицательный результат IgM

Иммунная система субъекта выработала антитела к целевому вирусному антигену. Субъект, вероятно, находится на более поздних стадиях течения болезни, но все еще может быть заразен для других и способен распространять вирус. Субъект должен оставаться изолированным от отрицательного населения в течение как минимум 14 дней, чтобы свести к минимуму вероятность распространения вируса. Если требуется более быстрое возвращение к общественной деятельности, например, для критически важных промышленных рабочих, следует провести молекулярный тест для оценки статуса выделения вируса.

IgM положительный, IgG отрицательный

Иммунная система субъекта активно вырабатывает антитела к недавней инфекции целевым вирусом. Субъекта следует немедленно изолировать от здоровых людей и обратиться за медицинской помощью, соответствующей тяжести симптомов, которые он испытывает. Субъект может заразить других на этом этапе развития болезни. По крайней мере, через 14–21 день субъекту следует рассмотреть возможность повторного тестирования для определения статуса IgG, прежде чем вернуться к нормальной деятельности.

И IgM, и IgG положительны

Иммунная система субъекта активно вырабатывает антитела к продолжающейся инфекции, которая, вероятно, началась более 14 дней назад. Субъекта следует немедленно изолировать от здоровых людей и обратиться за дальнейшей медицинской помощью, соответствующей тяжести симптомов, которые он испытывает. Субъект, вероятно, все еще может передавать болезнь другим. Рассмотрите возможность повторного тестирования через 7–14 дней, чтобы подтвердить статус только IgG, прежде чем вернуться к нормальной деятельности. Если требуется более быстрое возвращение к общественной деятельности, например, для критически важных промышленных рабочих, следует провести молекулярный тест для оценки статуса выделения вируса.

Как указывалось ранее, независимо от методологии тестирования, используемой для обнаружения антител, эти тесты не предназначены для использования в качестве средства диагностики активной инфекции. В первую очередь это связано с тем, что 1) существует временная задержка между воздействием вируса и выработкой антител иммунной системой и 2) антитела будут сохраняться еще долго после того, как организм избавится от инфекции. Эти тесты являются отличным инструментом, который можно использовать параллельно с молекулярным тестированием, историей болезни и клинической картиной у пациентов с симптомами или использовать у бессимптомных пациентов в течение периода, чтобы понять рекомендации по возвращению к активности.Временные рамки, связанные с воздействием, появлением симптомов, выработкой IgM и IgG, исчезновением симптомов и выделением вируса на протяжении всего заболевания, не были точно определены количественно для SARS-CoV-2. В настоящее время большинство данных и рекомендаций были экстраполированы из исследований, проведенных при первой вспышке атипичной пневмонии в начале 21 века. Также важно понимать, что молекулярное тестирование также несовершенно: в некоторых сериях до 30% ложноотрицательных результатов.Поэтому, рассматривая чувствительность и специфичность тестирования на антитела, нужно быть достаточно академичным, чтобы признать недостатки, присущие использованию такого теста для оценки другого теста. Будет трудно понять, означает ли положительный тест на антитела у пациента с отрицательным молекулярным тестом, что первый тест был ложноположительным, или второй был ложноотрицательным. Врачи должны быть по-настоящему усердны с этими продуктами и должны быть удовлетворены данными, а также послужным списком компании, занимающейся их маркетингом.Мы ожидаем, что в течение следующих 6–18 месяцев в рецензируемой литературе появится гораздо больше информации, которая улучшит интерпретацию и полезность тестов на антитела.

Долгосрочный иммунитет — существует ли он при COVID-19?

Исследование, проведенное после SARS, аналогичного коронавируса, вызвавшего эпидемию в 2003 году, показало, что у выживших сохранялись нейтрализующие антитела в среднем в течение 2 лет, после чего количество антител снижалось. Другие коронавирусы, циркулирующие среди людей, также приводят к частичному иммунитету на какой-то период.Согласно недавней публикации в журнале Science, вопрос об иммунитете имеет значение для того, следует ли COVID-19 годовому циклу, подобному сезонному гриппу, или он становится бездействующим на несколько лет, а затем снова вспыхивает. Авторы отметили, что 2 других циркулирующих коронавируса (OC43 и HKU1), которые вызывают простуду, в среднем обеспечивают около 45 недель иммунитета. Они обнаружили, что если новый вирус будет следовать этой схеме, он, вероятно, будет вызывать ежегодные вспышки [21]. Однако, вообще говоря, чем хуже вы становитесь из-за инфекции и сильной реакции иммунной системы на нее, тем более сильный иммунитет вырабатывается.Следовательно, можно предположить, что те люди, которые больше всего болеют, имеют самый длительный и эффективный иммунитет после повторного контакта с тем же вирусом. В исследовании Callow et al. [22], людям добровольно вводили в ноздри коронавирус 229E, который также вызывает симптомы простуды. Десять заразились, у восьми появились симптомы простуды. Через год все, кроме одного, снова заразились. Большинство заразились повторно, но у тех, кто переболел ранее, симптомы простуды не проявлялись. Более того, период, в течение которого пациенты выделяли вирус и были потенциально заразны, был короче.Новый вирус, SARS-CoV-2, генетически подобен первому вирусу SARS (отсюда и «2»), но по-разному влияет на людей. Он не так смертелен, как оригинальный SARS, но более легко распространяется (R O выше) [23]. У многих инфицированных людей симптомы вообще не проявляются, но они потенциально могут передавать вирус другим людям.

В совсем недавнем отчете из Китая, который еще не прошел рецензирование, был обнаружен широкий спектр антител среди людей с легкими случаями вируса. Самое поразительное, что после болезни у молодых людей было меньше антител, а у 30% обследованных были низкие уровни.У некоторых людей не было следов антител. Это подняло вопрос о том, может ли человек с легкой или бессимптомной инфекцией, подтвержденной чувствительным тестом полимеразной цепной реакции, быть восприимчивым ко второй инфекции. Титры нейтрализующих антител положительно коррелировали с уровнями СРБ в плазме, но отрицательно коррелировали с количеством лимфоцитов у пациентов во время госпитализации, что указывает на связь между степенью гуморального ответа и клеточным иммунным ответом.Однако люди с легкой формой заболевания, у которых не вырабатывается высокий уровень антител, могут подвергаться повышенному риску повторного заражения, но у них вряд ли появятся серьезные симптомы, хотя они могут быть заразными. Таким образом, с теми, у кого не вырабатываются антитела, вероятно, следует обращаться так, как если бы они никогда не болели болезнью с точки зрения социального дистанцирования, даже если их положительный результат был подтвержден с помощью молекулярного тестирования.

Динамика чувствительности и специфичности антител IgM и IgG к SARS-CoV-2 для симптоматического COVID-19 в Японии

и титры IgG и оценивали эффективность диагностических тестов в определенные дни после начала заболевания COVID-19.SARS-CoV-2 имеет четыре основных белка: шип (S), оболочку, мембрану и нуклеокапсид (N). Сообщалось о более высокой чувствительности и более раннем иммунном ответе на белок S, чем на белок N 7 , а антитела против белка S, как сообщается, более специфичны, чем антитела против белка N, из-за более низкой перекрестной реактивности с другими коронавирусами 8 . Таким образом, настоящий метод, который обнаруживает как белок S, так и белок N, будет более полезен для метода скрининга для диагностики COVID-19, чем тесты на антитела, которые обнаруживают любой из них.Кроме того, CLIA может больше подходить для клинического тестирования антител к SARS-CoV-2. В метааналитическом исследовании, в котором оценивались тесты IgM и IgG на основе твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), CLIA, флуоресцентного иммуноанализа и иммуноанализа с латеральным потоком, методы на основе ELISA и CLIA показали более высокую чувствительность (90–96%). чем флуоресцентные иммуноанализы и иммуноанализы с латеральным потоком, чувствительность которых варьировалась от 80 до 89% 8 . Учитывая, что ELISA требует большого количества ручных операций, тогда как CLIA автоматизирован и обычно занимает меньше времени, анализы на основе CLIA могут быть лучше с точки зрения чувствительности, безопасности и производительности.

Мы подтвердили изменение сывороточных антител во времени. Медианный титр IgM увеличивался до 18-го дня после появления симптомов, а затем снижался (рис. 1A), в то время как титр IgG оставался стабильным на уровне выше 400 AU/мл после 13-го дня (рис. 1B). О подобных динамических изменениях сообщалось и в другом исследовании 9 . Время, когда средние титры IgM и IgG превышали пороговое значение, указанное производителем (10 AU/мл), составляло 13–14 и 9–10 дней соответственно, что может быть аналогично времени для тяжелого острого респираторного синдрома, вызванного коронавирусом 1 (SARS-CoV). -1) 10 и несколько раньше, чем для коронавируса ближневосточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ) 11,12 .У 16 из 26 ОТ-ПЦР-позитивных пациентов сероконверсия IgG произошла раньше, чем IgM, при этом сероконверсия IgM произошла раньше в 2 случаях и синхронные сероконверсии наблюдались в 1 случае. В 7 случаях мы не смогли определить время сероконверсии, поскольку титры IgM и IgG уже превышали 10 AU/мл даже в самом раннем доступном образце (дополнительная рис. 1). Ожидается, что при обычном иммунологическом ответе на патогены IgM будут продуцироваться раньше, чем IgG.В соответствии с настоящим отчетом, Long et al. сообщили о десяти субъектах, у которых сероконверсия IgG произошла раньше, чем сероконверсия IgM 13 , о чем также сообщалось в других исследованиях, проведенных в Китае 14,15,16 . Хотя точный основной механизм остается неясным, более ранняя сероконверсия IgG может быть связана с перекрестной реактивностью других коронавирус-специфических антител к целевому антигену, используемому в реагентах. На самом деле, Пинто и др. идентифицировали моноклональное антитело, которое может нейтрализовать SARS-CoV-2, задействуя рецептор-связывающий домен шиповидного гликопротеина из В-клеток памяти человека, перенесшего инфекцию SARS-CoV-1 в 2003 г. 17 .Необходимы дальнейшие исследования для выяснения механизмов, ответственных за более раннюю сероконверсию IgG.

Мы наблюдали один ложноположительный случай в титрах IgM (рис. 1C). Этим субъектом был 2-летний ребенок с врожденными пороками сердца, у которого были симптомы лихорадки и утомляемости, которые напоминали симптомы COVID-19. Результат ОТ-ПЦР был отрицательным, и у субъекта был диагностирован инфекционный эндокардит. Титры IgM субъекта составляли 110,1 AU/мл на 12-й день и 36,4 AU/мл на 24-й день после появления симптомов, тогда как титры IgG равнялись 1.6 AU/мл и 1,4 AU/мл соответственно. Хотя причина ложноположительных результатов IgM оставалась неизвестной, повторные переливания крови могут продуцировать некоторые аутоантитела, которые влияют на анализ на основе CLIA.

Что касается связи между титрами антител и тяжестью течения COVID-19, в группе с тяжелой формой обычно наблюдается более ранняя реакция как на IgM, так и на IgG, чем в группе с легкой и средней степенью тяжести (дополнительная рис. 2). Необходимы дальнейшие исследования с большим количеством субъектов, чтобы выяснить связь между иммунной реакцией на SARS-CoV-2 и тяжестью заболевания.

Затем мы исследовали пороговые значения и динамику диагностических способностей сывороточных титров IgM и IgG анти-SARS-CoV-2. Когда мы выполнили анализ ROC с использованием образцов в определенные дни после появления симптомов, AUC IgM постепенно уменьшалась в зависимости от времени, в то время как AUC IgG приближалась к 1,0. Эти изменения в зависимости от дней после появления симптомов были вызваны различиями во времени динамики титров; IgG постоянно увеличивался, в то время как IgM начал снижаться примерно через 18 дней после начала заболевания.Пороговые значения IgM, рассчитанные на основе настоящего исследования, варьировались от 0,86 до 1,48 AU/мл в течение нескольких дней с начала заболевания, в то время как пороговые значения для IgG были ниже 5 AU/мл. Следовательно, пороговые значения для японской популяции могут быть ниже (1 или 2 AU/мл для IgM и 5 AU/мл для IgG), чем пороговое значение, указанное производителем (10 AU/мл). В предыдущих исследованиях, в которых использовались те же тесты на основе CLIA, частота ложноположительных результатов для тестов IgM и IgG составила 0% (0/33) и 9,1% (3/33) в итальянском исследовании 9 и 9.1% (4/44) и 0% (0/44) в китайском исследовании 18 соответственно, что несколько выше, чем в настоящем исследовании (1,3% [1/79] и 0% [0/79]. ]). Одним из механизмов ложноположительных результатов может быть наличие аутоиммунных заболеваний, а распространенность аутоиммунных заболеваний среди населения различается. Например, распространенность СКВ, которая, как сообщается, вызывает ложноположительные случаи, в Италии, Китае и Японии составляет 40–81, 10–30 , 19 и 3,7–19,1 20 на 100 000 населения соответственно.В этом исследовании отрицательная группа ОТ-ПЦР включала субъектов, осложненных аутоиммунными заболеваниями (табл. 2Б). Самые высокие титры у этих субъектов составляли 1,55 AU/мл для IgM и 4,28 AU/мл для IgG, которые были ниже переопределенных пороговых значений (2 AU/мл для IgM и 5 AU/мл для IgG).

Таблица 2 Характеристики испытуемых.

Что касается изменения чувствительности во времени, то диагностическая способность антител, особенно IgG, увеличивается по мере прохождения времени с момента появления симптомов. Чжао и др.сообщили, что ОТ-ПЦР имела более высокую чувствительность (66,7%), чем IgM (28,7%) и IgG (19,1%), в течение 8 дней с момента появления симптомов, в то время как чувствительность ОТ-ПЦР снизилась до 54,0% после 8-го дня, и что тестов на антитела увеличилось 4 . Соответственно, диагностические характеристики как IgM, так и IgG были недостаточными в моменты времени до 7-8 дней (рис. 3C-F), в то время как на 9-10 день мы получили гораздо более высокую чувствительность при установке более низких пороговых значений; Для IgM чувствительность при пороговом значении 10 AU/мл, 2 AU/мл и 1 AU/мл составляла 36.4%, 54,5% и 81,8% соответственно, а для IgG чувствительность при пороговом значении 10 AU/мл и 5 AU/мл составила 63,6% и 81,8% соответственно. Эти результаты свидетельствуют о том, что установка оптимального порогового значения для населения Японии может сделать тест на антитела в сыворотке более полезным инструментом для диагностики инфекции COVID-19, хотя для подтверждения этой гипотезы необходимы дальнейшие исследования.

Следует отметить, что титры IgG во всех сыворотках, взятых у пациентов с положительным результатом ОТ-ПЦР (n = 26), превышали 10 AU/мл через 15 дней или позже после появления симптомов (рис.1Б), а чувствительность составляла 100%. Несколько субъектов с заболеваниями, не связанными с COVID-19, такими как пневмония, вызванная другими патогенами, или коллагеновые заболевания, могут иметь сходное клиническое течение и результаты КТ, что иногда затрудняет дифференциальную диагностику. Высокая чувствительность IgG после 15-го дня может помочь врачам исключить COVID-19.

Ограничением этого исследования является то, что были обследованы только пациенты с симптомами. Недавно сообщалось, что у бессимптомных субъектов с COVID-19 титры антител ниже пороговых значений 21 .Согласно недавнему отчету, Т-клеточный иммунитет достаточен для исключения SARS-CoV-2 у бессимптомных пациентов 22 . Следовательно, в отношении инфекционного контроля, который требует скрининга бессимптомных субъектов, одного теста на антитела может быть недостаточно, и желательна комбинация с тестом на основе ПЦР. Тем не менее, тесты на антитела могут помочь врачам диагностировать COVID-19 или не-COVID-19 с похожим клиническим течением у субъектов с симптомами.

Таким образом, мы исследовали динамику диагностических характеристик тестов на антитела к SARS-CoV-2 в Японии и обнаружили высокую чувствительность после 9–10 дней.Учитывая высокую чувствительность уровней IgG через 15 дней после появления симптомов, тест на IgG может быть очень полезным диагностическим инструментом для исключения возможности COVID-19.

Наборы Diazyme DZ-Lite SARS CoV-2 IgM и IgG CLIA Часто задаваемые вопросы (FAQ)

  1. О Diazyme Laboratories, Inc.
  2. Что такое SARS-CoV-2 и что такое COVID-19?
  3. Какой инкубационный период у COVID-19?
  4. Каковы рекомендации по тестированию людей на COVID-19?
  5. Что такое IgM и что такое IgG?
  6. Что представляют собой наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  7. Чем полезны диазимные наборы?
  8. Чем наборы диазимов отличаются от RT-qPCR?
  9. Как работают наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  10. Наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA основаны на микропланшетах?
  11. Нужен ли мне специальный анализатор для работы с наборами Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  12. Каковы размеры анализатора Diazyme DZ-Lite 3000 Plus?
  13. Нужны ли анализатору Diazyme DZ-Lite 3000 Plus специальные соединения для воды/сточных вод?
  14. Какова пропускная способность наборов Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  15. Сколько тестов содержится в наборах Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  16. Какие типы образцов можно использовать с наборами Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  17. Как отправить образец для тестирования с помощью наборов Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  18. Каковы условия хранения и профили стабильности для наборов Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  19. Каково предельное значение для представления результатов?
  20. Могу ли я протестировать объединенные образцы?
  21. Каковы профили интерференции и перекрестных реакций наборов Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  22. Включают ли наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA калибраторы и контроли?
  23. Насколько чувствительны наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  24. Насколько специфичны наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA
  25. Каковы профили перекрестной реактивности наборов Diazyme SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  26. Какой антиген SARS-CoV-2 используется в наборах Diazyme IgM/IgG CLIA?
  27. Нормативные акты
  1. О Diazyme Laboratories, Inc.
    Diazyme Laboratories, Inc. (Diazyme) — сертифицированный cGMP и ISO 13485 производитель медицинского оборудования, расположенный в Пауэе, Калифорния. Компания является дочерней компанией General Atomics из Сан-Диего и работает уже 20 лет. Имея дочерние компании в Германии и Китае и более 150 сотрудников, Diazyme разрабатывает удобные в использовании и высокопроизводительные диагностические реагенты, которые можно использовать в автоматических химических анализаторах. Ассортимент продукции Diazyme включает наборы для диагностики сердечно-сосудистых заболеваний, заболеваний печени, маркеров рака, заболеваний почек, диабета, электролитов и инфекционных заболеваний.
     
  2. Что такое SARS-CoV-2 и что такое COVID-19?
    Тяжелый острый респираторный синдром Коронавирус 2 (SARS-CoV-2) — официальное название нового коронавируса, который в настоящее время вызывает всемирную пандемию. COVID-19 — это официальное название респираторного заболевания, вызванного SARS-CoV-2. SARS-CoV-2 очень заразен и передается воздушно-капельным путем и при контакте с зараженными поверхностями. Дополнительную информацию о COVID-19 можно найти на веб-сайте Центра по контролю и профилактике заболеваний CDC: https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/index.html, а также на https://www.coronavirus.gov/
  3. .
  4. Какой инкубационный период у COVID-19?
    Несмотря на то, что несколько исследований все еще продолжаются, согласно исследованию от 10 марта th , 2020, опубликованному в Annals of Internal Medicine, инкубационный период COVID-19, измеренный по публично подтвержденным случаям, выглядит следующим образом 1
  • Медиана Инкубационный период: 5,1 дня (95% доверительный интервал, 4.от 5 до 5,8 дней)
  • 97,5 % тех, у кого разовьются симптомы, появятся в течение 11,5 дней (ДИ от 8,2 до 15,6 дней)
  • По самым скромным оценкам, у 101 случая из 10 000 случаев (99-й процентиль, 482) симптомы разовьются после 14 дней активного наблюдения или карантина.

1 Лауер С.А., Гранц К.Х., Би К., Джонс Ф.К., Чжэн К., Мередит Х.Р., Азман А.С., Райх Н.Г., Лесслер Дж. Инкубационный период коронавирусной болезни 2019 (COVID-19) От Подтвержденные случаи, о которых сообщалось публично: оценка и применение.Энн Интерн Мед. 2020 10 марта.

  1. Каковы рекомендации по тестированию людей на COVID-19?
    CDC постоянно обновляет эту информацию по адресу: https://emergency.cdc.gov/han/2020/han00429.asp

    у пациента есть признаки и симптомы, совместимые с COVID-19, и следует ли пациенту пройти тестирование». Кроме того, приоритетное тестирование должно быть отдано:

    1. Госпитализированным пациентам с признаками и симптомами, совместимыми с COVID-19, для принятия обоснованных решений, связанных с инфекционным контролем.
    2. Лица с другими симптомами, такие как пожилые люди (возраст ≥ 65 лет) и лица с хроническими заболеваниями и/или с ослабленным иммунитетом, которые могут подвергать их повышенному риску неблагоприятных исходов (например, диабет, болезни сердца, прием иммунодепрессантов, хронические заболевания легких, хроническая болезнь почек).
    3. Любые лица, включая медицинский персонал, которые в течение 14 дней после появления симптомов имели тесный контакт с пациентом с подозрением или лабораторно подтвержденным COVID-19
      или которые в анамнезе путешествовали из пораженных географических районов в течение 14 дней после появления симптомов.
  2. Что такое IgM и что такое IgG?
    При заражении вирусом SARS-CoV-2 иммунная система пациента пытается бороться с вирусом, вырабатывая циркулирующие в крови молекулы, известные как антитела. IgM — это класс антител, которые появляются на ранних стадиях инфекции (уже через 3–5 дней). IgM – это первая линия защиты организма от чужеродного антигена. IgG — это еще один класс антител, который появляется позже и постепенно заменяет антитела IgM.Обычно антитела IgG появляются в кровотоке в течение 3-4 недель после первичного инфицирования. Наличие в крови пациента специфических к SARS-CoV-2 антител IgM и/или IgG является убедительным признаком того, что пациент инфицирован вирусом SARS-CoV-2.
     
  3. Что представляют собой наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  • Набор Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM CLIA представляет собой набор реагентов, специально определяющих наличие/отсутствие специфических для COVID-19 антител IgM в крови пациента.
  • Набор Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgG CLIA набор реагентов, который специфически выявляет наличие/отсутствие специфических антител IgG к COVID-19 в крови пациента.
  1. Чем полезны диазимные наборы?
  • Изделие предназначено для использования в качестве средства идентификации лиц с адаптивным иммунный ответ на SARS-CoV-2, указывающий на недавнюю или предшествующую инфекцию. В это время это неизвестно, как долго антитела сохраняются после заражения и есть ли антитела обеспечивают защитный иммунитет.
  • Серологические тесты важны для понимания истинного распространения COVID-19 среди населения болезни, поскольку исследования показывают, что определенный процент населения может не симптоматический. Надлежащее использование серологических тестов позволяет должностным лицам общественного здравоохранения лучше понимать уровень заражения, истинный уровень смертности и понимать риск заболевания возрождение, поскольку более строгие меры изоляции и дистанцирования ослабляются.
  • Серологические тесты Diazyme CLIA предъявляют меньшие преаналитические требования и не включают сложные процедуры экстракции.
  1. Чем наборы диазимов отличаются от RT-qPCR?
    Тесты амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) выявляют наличие вируса SARS-Cov-2, вызвавшего респираторное заболевание COVID-19. Текущий тест на нуклеиновую кислоту для SARS-CoV-2 основан на обнаружении рибонуклеиновой кислоты (РНК) вируса с использованием модифицированной версии метода полимеразной цепной реакции (RT-qPCR). Хотя сам метод чувствителен, тест имеет несколько ограничений, в том числе:
  • Низкая производительность: Первые результаты занимают до 3.5 часов.
  • Высокая сложность: требуется выполнение нескольких ручных операций высококвалифицированным персоналом
  • Вариабельность точности: тест может не выявить инфицированных пациентов, но низкая вирусная нагрузка при взятии мазка.
  • Этапы взятия мазка, транспортировки и извлечения могут быть ошибочными.

Тесты SARS-CoV-2 IgM CLIA и SARS-CoV-2 IgG CLIA не обнаруживают вирус SARS-Cov-2. Серологические тесты (антитела) определяют иммунный ответ на инфекцию SARS-CoV-2.Особенности включают в себя:

  • Обычные заборы крови
  • Более высокая производительность: первые результаты появляются через 34 минуты, что делает возможным крупномасштабное тестирование целых популяций.
  • Менее сложный процесс: текущие тесты IgM/IgG полностью автоматизированы, и оператор отвечает только за размещение образцов и заказ тестов через компьютерный интерфейс.
  1. Как работают наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  • Набор Diazyme SARS-CoV-2 IgM CLIA представляет собой иммунохемилюминесцентный анализ с захватом.С помощью полностью автоматизированного хемилюминесцентного анализатора образец крови пациента проходит серию обработок различными реагентами для генерации светового сигнала, пропорционального концентрации антител IgM к SARS-CoV-2.
  • Набор Diazyme SARS-CoV-2 IgG CLIA представляет собой непрямой хемилюминесцентный иммуноанализ. С помощью полностью автоматизированного хемилюминесцентного анализатора образец крови пациента проходит серию обработок различными реагентами для генерации светового сигнала, пропорционального концентрации антител IgG к SARS-CoV-2.
  1. Наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA основаны на микропланшетах?
    Нет, в тестах Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA не используются микропланшеты, и они не являются анализами ELISA. Образцы загружаются партиями в хемилюминесцентный анализатор аналогично тому, как это делается в анализаторе общей химии.
  2. Нужен ли мне специальный анализатор для работы с наборами Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
    Да, тесты Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA представляют собой закрытые системы со штрих-кодом, которые работают только на хемилюминесцентном анализаторе Diazyme DZ-Lite 3000 Plus, который Diazyme предоставляет потенциальным клиническим лабораториям.Хемилюминесцентный анализатор Diazyme DZ-Lite 3000 Plus — это прибор, одобренный FDA 510k для клинической диагностики.
  3. Каковы размеры анализатора Diazyme DZ-Lite 3000 Plus?
  • Глубина: 30 дюймов
  • Высота: 60 ​​дюймов (78 дюймов в открытом состоянии)
  • Ширина: 63,5 дюйма

Пожалуйста, свяжитесь с нашей службой технической поддержки по телефону [email protected] для получения информации о требованиях к установке анализатора.

  1. Нужны ли для хемилюминесцентного анализатора Diazyme DZ-Lite 3000 Plus специальные соединения для воды/отходов?
    Нет, хемилюминесцентный анализатор Diazyme DZ-Lite 3000 Plus представляет собой автономную систему воды/сточных вод, и его не нужно подключать к лабораторным водопроводным/сточным системам.

    Пожалуйста, свяжитесь с нашей службой технической поддержки по телефону [email protected] для получения информации о требованиях к установке анализатора.

  2. Какова пропускная способность наборов Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
    При параллельном выполнении тестов на IgM и IgG производительность хемилюминесцентного анализатора Diazyme DZ-Lite 3000 Plus оценивается примерно в 50 тестов в час.Если для теста выделено 100% тестовой емкости прибора, то за один раз можно загрузить реагенты для 2500 тестов.
  3. Сколько тестов содержится в наборах Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
    Оба набора DiazymeDZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA содержат по 100 тестов каждый.
  4. Какие типы образцов можно использовать с наборами Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
  • Образцы сыворотки и плазмы (калий ЭДТА, динатрий ЭДТА и литий-гепарин) можно использовать с анализами Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG.
  • Не открывайте крышку пробирки с пробой до завершения инактивации, чтобы предотвратить воздействие на операторов.
  • Инактивация: Образцы крови необходимо инактивировать путем нагревания образцов в лабораторной водяной бане при 56°C в течение 30 минут перед загрузкой образцов в анализатор.

См. Временное руководство по биобезопасности лабораторий Центра по контролю и профилактике заболеваний при обращении и обработке образцов, связанных с коронавирусным заболеванием 2019 г. (COVID-19): https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/lab-biosafety-guidelines.html, а также требования вашего местного, государственного и федерального правительства.

  1. Как отправить образцы для тестирования с наборами Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA в клинические лаборатории?
    Рекомендуется отправлять образцы при температуре 2-8°C, используя ночные перевозки. В качестве альтернативы образцы могут быть отправлены замороженными. Перед отправкой рекомендуется удалить образцы из сепаратора, эритроцитов или сгустка.Тепловая инактивация должна быть выполнена до удаления из сепаратора эритроцитов или сгустка.

  2. Каковы условия хранения и профили стабильности для наборов Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
    Храните все компоненты набора при температуре 2–8°C.
  • Неоткрытые реагенты стабильны при 2-8°C до истечения срока годности.
  • Наборы реагентов
  • Open стабильны при 2-8°C в течение 6 недель.
  • Бортовые наборы реагентов стабильны при температуре 2-8°C в течение 4 недель.
  1. Каков предельный срок представления результатов?
    Рекомендуемое пороговое значение для наборов Diazyme IgM и IgG CLIA составляет 1,00 AU/мл: сообщаются результаты ниже 1,00 AU/мл (реактивный)
  2. Могу ли я протестировать объединенные образцы?
  3. Каковы профили интерференции и перекрестных реакций наборов Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
    См. листок-вкладыш (IFU).
  4. Включают ли наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA калибраторы и контроли?
    Да, наборы включают два калибратора (один высокий и один низкий) и два контроля: один положительный
    и один отрицательный.
  5. Насколько чувствительны наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
    Клиническая чувствительность определяется как способность правильно идентифицировать тех пациентов, которые были инфицированы.Было проведено несколько исследований с использованием тестовых наборов SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA.

Положительное процентное совпадение (PPA) = [IgG или IgM положительный]/[ОТ-ПЦР положительный]

  • SARS-CoV-2 IgG
    Общий PPA >7 дней после появления симптомов: 96,2% для IgG
    PPA ≥15 дней после появления симптомов: 100% для IgG
  • SARS-CoV-2 IgM
    Общий PPA >7 дней после появления симптомов: 92,1% для IgM
    PPA ≥15 дней после появления симптомов: 93.9% для IgM
  1. Насколько специфичны наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
    Клиническая специфичность определяется как способность правильно идентифицировать тех пациентов, которые не были инфицированы. Было проведено несколько исследований с использованием тестовых наборов SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA.
  • С использованием 852 предположительно отрицательных образцов, собранных до декабря 2019 года, клиническая специфичность теста Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgG CLIA была оценена в 97 баллов.4%.
  • С использованием 302 предположительно отрицательных образцов, собранных до декабря 2019 г., клиническая специфичность теста Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 IgM CLIA была оценена в 98,3%
  1. Каковы профили перекрестной реактивности наборов Diazyme SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA?
    Была протестирована перекрестная реактивность наборов Diazyme SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA с антителами против различных вирусов (включая четыре коронавируса: HKU1, OC43, NL63, 229E) и бактерий.Результаты представлены ниже.

    Результат перекрестной реактивности  

    Грипп A h2N1 IgM/IgG Отрицательный Грипп A h2N1 сезонный IgM/IgG Отрицательный Грипп A h4N2 IgM/IgG Отрицательный Грипп A H5N1 IgM/IgG Отрицательный Грипп A H7N9 IgM/IgG Отрицательный Грипп B Yamagata IgM/IgG Отрицательный Грипп B Victoria IgM/IgG Отрицательный Респираторно-синцитиальный вирус IgM/IgG Отрицательный Риновирус типа А IgM/IgG Отрицательный Риновирус типа B IgM/IgG Отрицательный Риновирус типа C IgM/IgG Отрицательный Аденовирус типа 1 IgM/IgG Отрицательный Аденовирус типа 2 IgM/IgG Отрицательный Аденовирус типа 3 IgM/IgG Отрицательный Аденовирус типа 4 IgM/IgG Отрицательный Аденовирус типа 5 IgM/IgG Отрицательный Аденовирус типа 7 IgM/IgG Отрицательный Энтеровирус типа А IgM/IgG Отрицательный Энтеровирус типа B IgM/IgG Отрицательный Энтеровирус типа C IgM/IgG Отрицательный Энтеровирус типа D IgM/IgG Отрицательный ВЭБ VCA IgM/IgG Отрицательный ВЭБ Н/Д IgG Отрицательный Вирус кори IgM/IgG Отрицательный Цитомегаловирус человека IgM/IgG Отрицательный Ротавирус IgM/IgG Отрицательный Норовирус IgM/IgG Отрицательный Вирус эпидемического паротита IgM/IgG Отрицательный Вирус ветряной оспы IgM/IgG Отрицательный Mycoplasma pneumoniae IgM/IgG Отрицательный SARS-CoV-2 IgM Отрицательный Коронавирус человека HKU1 IgM/IgG Отрицательный Коронавирус человека OC43 IgM/IgG Отрицательный Коронавирус человека NL63 IgM/IgG Отрицательный Коронавирус человека 229E IgM/IgG Отрицательный Вирус парагриппа Отрицательный Вирус кори Отрицательный Chlamydia pneumoniae IgM/IgG Отрицательный Candida albicans Отрицательный АНА Отрицательный
    Кроме того, набор Diazyme SARS-CoV-2 IgM CLIA не давал перекрестной реакции с антителами IgG к SARS-CoV-2, а — наоборот (набор Diazyme SARS-CoV-2 IgG CLIA не давал перекрестной реакции с антителами IgM к SARS-CoV-2).
  2. Какой антиген SARS-CoV-2 используется в наборах Diazyme IgM/IgG CLIA?
    Для обеспечения оптимальной специфичности в наборах Diazyme SARS-CoV-2 IgM и IgG CLIA специально используются белки N и S вируса в качестве антигенов для антител IgM и IgG.
  3. Нормативные акты   
    Наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 CLIA IgG (FDA EUA)
  • Этот тест не был одобрен или одобрен FDA;
  • Этот тест был одобрен FDA в соответствии с EUA для использования уполномоченными лабораториями;
  • Этот тест был разрешен только на наличие антител IgG против SARS-CoV-2, а не на какие-либо другие вирусы или патогены; и
  • Этот тест разрешен только на время действия заявления о наличии обстоятельств, оправдывающих разрешение на экстренное использование диагностики in vitro для обнаружения и/или диагностики COVID-19 в соответствии с разделом 564(b)(1) Закона, 21 U. .§ 360bbb-3(b)(1), если разрешение не будет прекращено или отозвано ранее.
  • Этот тест не предназначен для скрининга донорской крови

Наборы Diazyme DZ-Lite SARS-CoV-2 CLIA IgM (уведомлено разделом IVD. На рассмотрении EUA)

  • Этот тест не был рассмотрен FDA.
  • Отрицательные результаты не исключают заражения SARS-CoV-2, особенно у тех, кто был в контакте с вирусом. Следует рассмотреть вопрос о последующем тестировании с помощью молекулярной диагностики, чтобы исключить инфекцию у этих людей.
  • Результаты тестирования на антитела не должны использоваться в качестве единственного основания для диагностики или исключения инфекции SARS-CoV-2 или для информирования о статусе инфекции.
  • Этот тест не предназначен для скрининга донорской крови

Уведомления FDA теперь перечислены на веб-сайте FDA в разделе «Часто задаваемые вопросы о диагностическом тестировании на SARS-CoV-2»: https://www.fda.gov/medical-devices/emergency-situations-medical-devices/faqs-diagnostic. -тестирование-sars-cov-2

МК 243 Ред.С

Эффективность экспресс-теста COVID19SEROSpeed ​​IgM/IgG, иммунохроматографического анализа для диагностики инфекции SARS-CoV-2: многоцентровое европейское исследование

ВВЕДЕНИЕ диагностическая проблема для медицинского сообщества (1). Широко сообщалось, что эта инфекция может привести к легкой или полностью бессимптомной форме заболевания у большинства людей, хотя она может прогрессировать в тяжелую пневмонию, которая часто требует искусственной оксигенации и/или искусственной вентиляции легких, при этом часть пациентов умирает (2). ).Инкубационный период коронавирусной болезни 2019 (COVID-19) колеблется от 2 до 14 дней, при этом в большинстве случаев заболевание проявляется в течение 3–6 дней. В симптоматических случаях появление симптомов происходит в течение 14 дней после заражения и в среднем через 5 дней (3). образцы из дыхательных путей у пациентов с симптомами в течение нескольких дней до появления симптомов и могут оставаться положительными в течение нескольких недель после исчезновения симптомов (4, 5).Однако, несмотря на то, что эти тесты считаются эталонным методом диагностики инфекции SARS-CoV-2, они дают значительное количество ложноотрицательных результатов в зависимости от стадии инфекции, вирусной нагрузки или качества, а также типа взятия образцов (6–10). Хотя диагностическая ценность определения антител ограничена в первые 2 недели заболевания, период времени, который у многих пациентов совпадает с фазой окна до сероконверсии (8), использование серологических тестов было предложено также в первую неделю. после появления симптомов в качестве дополнительных диагностических инструментов для повышения чувствительности и точности лабораторной диагностики (5, 8, 11, 12).В одном исследовании комбинированное использование теста RT-PCR и IgM ELISA повысило точность диагностики SARS-CoV-2 с 51,9% до 98,6% (13). Таким образом, серологические тесты полезны для выявления предыдущих инфекций, а также для подтверждения наличия текущей инфекции или выявления инфекций, пропущенных с помощью ОТ-ПЦР. Обладая достаточной чувствительностью и специфичностью, серологические тесты также могут быть полезны для программ серологического надзора, особенно в субпопуляциях высокого риска (например, медицинские работники), для сдерживания новых вспышек и в исследованиях распространенности серопозиции (14).В настоящее время уровни антител преимущественно измеряют с помощью технологий твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) и хемилюминесцентного анализа (ХЛИА). Эти методы, хотя и действительны, требуют времени и организации, необходимых для взятия проб из вены, а также специальных, а иногда сложных и дорогостоящих инструментов и квалифицированного персонала. Напротив, тестирование по месту оказания медицинской помощи (POCT) с помощью анализов латерального потока (LFA) может облегчить диагностику SARS-CoV-2. На самом деле, эти тесты разработаны так, чтобы быть быстрыми, чувствительными, очень доступными и легко выполняемыми, требующими лишь небольшого количества крови.На момент написания статьи несколько сотен POCT-кандидатов находились на стадии оценки их применимости для выявления лиц, инфицированных SARS-CoV-2. Было показано, что некоторые из них обеспечивают хорошие аналитические характеристики (15, 16), в то время как многие другие демонстрируют низкое положительное или отрицательное процентное соответствие (17).

Целью этого кросс-европейского исследования с участием 5 лабораторий в Германии, Франции и Италии была оценка диагностической эффективности экспресс-теста COVID19SEROSpeed ​​IgM/IgG (сокращенно «BioS») для обнаружения антител против SARS-CoV- 2 по сравнению с хорошо зарекомендовавшими себя коммерческими тестами ELISA и CLIA, а также для анализа кинетики ответа антител в отношении появления симптомов при тяжелом и нетяжелом течении COVID-19.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

COVID19SEROSpeed ​​IgM/IgG test.

Тест BioS, оцениваемый в этом исследовании, был разработан компанией BioSpeedia (Париж, Франция), дочерней компанией Института Пастера в Париже. Он состоит из иммунохроматографического экспресс-теста LFA, специально разработанного для обнаружения антител, направленных на спайковый белок S1, а также на нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2. Тест можно проводить либо на образце из пальца, либо на образцах сыворотки или плазмы.После внесения 40 мкл образца пациента в тестовый картридж необходимо немедленно добавить одну каплю буфера, входящего в комплект, чтобы начать миграцию образца. Чтение должно быть выполнено визуально в течение 15 мин. В дополнение к контрольной линии, подтверждающей фактическое обнаружение присутствия образца сыворотки, две полосы позволяют раздельно обнаруживать специфические антитела IgM и IgG. Анализ использовался участвующими центрами в соответствии с инструкциями производителя. Результат для каждого класса антител определяли как отрицательный или положительный на основании визуального осмотра.При отсутствии контрольной линии тест интерпретировался как недействительный.

Участвующие центры.

Исследование проводилось с февраля по июнь 2020 года в 5 больницах, расположенных в 3 европейских странах, серьезно пострадавших от пандемии COVID-19, в том числе в трех в Северной Италии (Azienda Socio Sanitaria Territoriale [ASST] Fatebenefratelli-Sacco, University Hospital of Milan; Университетская клиника Падуи; ASST Spedali Civili di Brescia, Университет Брешии), один во Франции (Университетская клиника Сент-Этьена) и один в Хорватии (Университетская клиника Задара), для которых образцы были обработаны в университетской больнице Бонна ( Германия).Протокол исследования был одобрен Этическим комитетом каждого центра.

Образцы сыворотки.

Допандемические образцы сыворотки ( n  = 215) использовались для проверки специфичности теста и включали 21 образец от пациентов с недавним инфицированием различными инфекционными агентами (Toxoplasma gondii, Mycoplasma pneumoniae, вирус кори, цитомегаловирус, ВИЧ и гепатит B) и 20 образцов от пациентов с различными аутоантителами, например, ревматоидными факторами, антителами к миелопероксидазе, протеиназе 3 или нативным или экстрагируемым ядерным антигенам.Эти образцы были собраны в 1999 г. и до использования хранились в замороженном виде при температуре -30°C.

В анализ чувствительности были включены в общей сложности 564 пациента с положительным результатом на РНК SARS-CoV-2 с помощью qRT-PCR, состоящих из 549 симптоматических и 15 бессимптомных образцов. Группы пациентов с симптомами были классифицированы в зависимости от времени (дни) после появления симптомов (PSO) и разделены на пациентов с тяжелыми симптомами (те, которые нуждались в госпитализации) и с легкими симптомами (те, которые находились дома) (рис.1). Образцы сыворотки были собраны с 17 февраля по 21 июня 2020 г., во время госпитализации или после окончания заболевания в легких случаях; их транспортировали при комнатной температуре в течение нескольких часов, центрифугировали по прибытии в лабораторию и хранили при -30°C до использования в соответствии со стандартной процедурой каждого центра. Всего было доступно 215 образцов сыворотки, взятых в разное время у одного и того же пациента для 104 случаев ( n  = 84 из Сент-Этьена, n  = 19 из Задара и n  = 1 из Брешии).

РИС. 1

РИС. 1. Блок-схема серологического исследования для проверки клинической чувствительности теста BioSpeedia COVID19SEROSpeed ​​IgM/IgG. Всего было использовано 710 образцов. Группы зарегистрированных пациентов с РНК SARS-CoV-2 ( n  = 564) были разделены на бессимптомные и симптоматические случаи, а затем подразделены в зависимости от тяжести заболевания и времени появления симптомов (PSO) при взятии проб. Для подгруппы пациентов с симптомами ( n  = 215) чувствительность оценивалась на нескольких последовательных образцах, собранных в разное время PSO.

Коммерческие тесты, используемые для сравнения производительности.

Для оценки эффективности анализа BioS использовали шесть коммерческих тестов. Краткое описание этих тестов вместе с центрами, в которых они использовались, приведены в таблице 1. Тесты проводились в соответствии с рекомендациями каждого производителя. Образцы до пандемии не были проанализированы этими тестами.

Таблица 1

Таблица 1 Характеристики серологических испытаний, которые использовались в этом исследовании A 9088
Производитель Производитель Производитель 0 Имя (аббревиатура) Вирусная мишеня (ы) Antibody
класс (ES )
REGULATIONALTION
STATUS
Технология сайт с использованием
Reagent
0
Abbott Laboratories ABBOTT SARS-COV-2 IgG (ABBOTT) IGLOCAPSID IGG CE-IVD, FDA высокая пропускная способность CLIA Saint-Ethienne
Beijing Woneiai Biological Pharmacy Wineai Sars-COV-2 AB Test (Woneai) RBD Всего антитела CE-IVD ELISA Милан
 
BioSpeedia COVID19SEROSpeed ​​IgM/IgG (BioS) S1 sp IKE, NUCLEOCAPSID IGM и IgG на отдельных линиях CE-IVD Анализ боковой поток Все сайты
Диасорин Liason Sars-COV-2 S1 / S2 (диасорин) S1 и S2 SPIKE IGG CE-IVD, FDA CE-IVD, FDA высокой пропускной способности CLIA Saint-Ethienne
Diesse Diangostica Enzywell Sars-Cov-2 IgG (Diesse IgG) Родные антигены из ячеек Vero E6 IGG CE-IVD ELISA Padua
Padua
Enzywell Sars-COV-2 IgM (Diesse IgM) родных антигенов из инфицированных Vero E6 IGM CE-IVD ELISA Padua
Euroummun Anti-Sars-COV-2 ELISA
(IgG) (Euroummun)
S1 Spike (включая RBD) 908 07 IgG CE-IVD, FDA CE-IVD, FDA BONN BONN

A 80388

ABBruations: CE-IVD, утвержденный Европейским сообществом для in vitro диагностика; FDA, одобренный U.С. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов; RBD, рецептор-связывающий домен шиповидного белка; ХЛИА, иммунохемилюминесцентный анализ; ИФА, иммуноферментный анализ.

Статистический анализ.

Для описательной и аналитической статистики категориальные переменные были количественно определены как частоты и проценты. Непрерывные переменные количественно оценивались с использованием средних значений ± стандартные отклонения (SD). Средние значения для непрерывных переменных сравнивались с использованием независимых групп t -тестов. Доли категориальных переменных сравнивались с использованием критерия хи-квадрат или точного критерия Фишера, когда данные были ограничены.Неопределенность оценок чувствительности и специфичности была представлена ​​с использованием данных 95% доверительного интервала (ДИ). Согласованность с другими коммерческими тестами была рассчитана с использованием общей согласованности и критерия согласованности Каппа Коэна. Все анализы проводились с использованием Stata (Stata Corp., Колледж-Стейшн, Техас, США), и значений P менее 0,05 считались статистически значимыми.

ОБСУЖДЕНИЕ

В этом исследовании экспресс-тест BioS показал клиническую специфичность 98.1% на большой панели образцов сыворотки до пандемии и клиническая чувствительность 92,5% у пациентов с COVID-19, подтвержденных ОТ-ПЦР, которые взяли образцы PSO в течение 11 дней или более. Более того, по сравнению с пятью коммерческими тестами на антитела, тест BioS продемонстрировал превосходную положительную процентную согласованность как у пациентов с тяжелым, так и с легким течением COVID-19.

Оценка новых серологических тестов, основанных на технологии LFA, и сравнение с более устоявшимися методами, нацеленными на различные классы антител (IgM, IgA и IgG), рассматривались в нескольких предыдущих исследованиях (15, 16, 18–22).Многочисленные предубеждения, влияющие на эти исследования, обсуждались и подвергались критике в недавнем метаанализе (17). Наше исследование смогло ответить на некоторые из этих критических замечаний. В частности, (i) что касается количества случаев, наше исследование включало большую группу образцов, собранных в различных европейских больницах, и, вероятно, представляет собой крупнейшую в настоящее время информацию о такого рода исследованиях; (ii) чувствительность оценивалась на образцах сыворотки, взятых исключительно у пациентов с COVID-19, подтвержденных qRT-PCR; (iii) время от начала симптомов было известно во всех симптоматических случаях; (iv) положительные данные процента совпадения сравнивались путем тестирования одних и тех же образцов с помощью коммерческих анализов с использованием разных вирусных мишеней; (v) можно было бы провести сравнение между пациентами с тяжелыми симптомами заболевания и пациентами с легкими симптомами, а также с бессимптомными субъектами; (vi) для некоторых пациентов были доступны последовательные образцы сыворотки для изучения кинетики ответа антител.Более чем в 78% исследованных образцов экспресс-тест позволил выявить антитела к SARS-CoV-2 даже в сыворотках, собранных до 11-го дня от появления симптомов, т. е. до ожидаемого времени сероконверсии. Интересно, что среди образцов, собранных до 11-го дня, 19,6% имели только ответ IgG. Как и при большинстве вирусных заболеваний, в ранних исследованиях сообщалось, что IgM появляются раньше, чем IgG (12), но в более поздних исследованиях сообщалось о сероконверсии IgG, которая происходила одновременно или даже раньше, чем сероконверсия IgM, которая во многих случаях оставалась неопределяемой (23, 24). ), как это наблюдалось в прошлом у пациентов с атипичной пневмонией (25).Наши результаты подтверждают эти выводы. В отличие от большинства доступных в настоящее время серологических тестов, BioS позволяет раздельно выявлять антитела IgM и IgG, что может повысить чувствительность диагностики COVID-19 при недавних инфекциях в отношении использования только молекулярных тестов (12, 13). . Еще одним объяснением хорошей чувствительности экспресс-теста до 11-го дня является то, что он воздействует на антитела, направленные против вирусных белков S1 и N, в то время как многие препараты сравнения направлены против одной мишени.Наилучший уровень соответствия (0,91) — с коэффициентом каппа Коэна 0,62 — наблюдался при анализе Euroimmun, который нацелен на белок S1, включая рецептор-связывающий домен (RBD) шиповидного белка, который, как ранее было показано, коррелирует с нейтрализующими антителами. (26). В собранных образцах Предыдущие исследования показали, что у пациентов с легкой формой COVID-19, как правило, наблюдается отсроченный ответ антител по сравнению с тяжелобольными госпитализированными пациентами (12, 26, 27). Наши результаты подтверждают эти наблюдения.Отсутствие гуморального ответа или наличие слабого сигнала у нескольких субъектов на поздней фазе инфекции согласуется с предыдущими сообщениями и интерпретируется как возможное следствие иммуносупрессии, вызванной вирусом. Однако его более высокая частота у пациентов с легкой инфекцией предполагает низкую иммуногенность вируса в этом контексте. Среди субъектов, включенных в наше исследование, у которых не развился ответ на протяжении всего заболевания, у 70-летнего пациента, госпитализированного по поводу тяжелого течения COVID-19, была тимома, что, вероятно, объясняет отсутствие специфических антител (см. пациент G в таблице 3).Наконец, на основании данных, полученных от 32 пациентов, которые были отобраны в течение ≥60 дней PSO, мы заметили, что уровни IgG, вероятно, начинают снижаться в течение 2–3 месяцев после заражения. Лонг и др. (27) сообщили об аналогичных результатах и ​​сослались на другой анализ динамики титров нейтрализующих антител у бессимптомных пациентов с COVID-19, где у 50% пациентов наблюдалось снижение нейтрализующих антител примерно через 6–7 недель PSO. Та же картина была недавно зарегистрирована у пациентов с симптомами (28).

Наше исследование имело некоторые ограничения.Во-первых, на всех образцах тестировался только анализ BioS, в то время как другие анализы использовались с различными подмножествами образцов в зависимости от их доступности. Во-вторых, хотя PSO является ключевым фактором в анализе результатов чувствительности, точность этой информации, сообщаемой пациентами, вероятно, ограничена, особенно при легких инфекциях. В-третьих, за исключением тестов Diesse и Wantai, которые выявляют антитела IgM и IgG на одной и той же полосе, ни один из анализов, использованных в этом исследовании, не выявлял антитела, принадлежащие к другим классам, кроме IgG, что могло бы объяснить умеренную или слабую согласованность результатов теста. Тест BioS с большинством других тестов.Наконец, наше исследование было нацелено в основном на госпитализированных пациентов с тяжелым заболеванием; количество субъектов с легкими симптомами и бессимптомных субъектов было небольшим, что ухудшает объем нашей оценки.

В заключение, экспресс-тест BioS показал свою специфичность и чувствительность для точного обнаружения антител к SARS-CoV-2 в различных клинических условиях в течение 15 минут с хорошей чувствительностью даже на самых ранних стадиях инфекции. . Кроме того, наличие IgM-независимой полосы, свидетельствующей о возможной недавней инфекции, в сочетании с молекулярным тестированием может способствовать диагностике COVID-19.Наши результаты также подтверждают недавние выводы, подчеркивающие возможность более раннего ответа IgG против SARS-CoV-2 и необходимость также тестировать пациентов с положительным результатом только на IgG с помощью анализа qRT-PCR для подтверждения их инфекционности. Наши результаты также демонстрируют необходимость надлежащего времени сбора образцов у пациентов с острым заболеванием COVID-19.

БЛАГОДАРНОСТЬ

Мы благодарим компанию Dianax Srl, Италия, за бесплатную поставку реагентов Biospeedia, которые были протестированы в различных центрах.Спонсоры не участвовали в разработке исследования или в анализе и обсуждении данных. Дополнительного финансирования не требовалось. Другие тесты, используемые в качестве компараторов, были приобретены в каждом центре.

Мы высоко ценим квалифицированную помощь техников, которые помогали проводить тесты в каждом центре. Мы в долгу перед клиницистами, которые предоставили биологический материал от своих пациентов. Образцы из Университетской больницы Брешии были частью другого проекта и были любезно предоставлены для тестирования с помощью анализа BioS.Кеннет Пфарр получил признание за исправление английского языка рукописи.

М. Плебани, М. Парчина, Б. Поццетто и М. Галли в равной степени участвовали в концептуализации и руководстве исследованием, формальном анализе и подтверждении результатов, а также в написании рукописи посредством нескольких видео-докладов и обмен рукописными версиями. I. Bechri, S. Pillet, S. Gonzalo и T. Bourlet участвовали в завершении испытаний и в анализе данных в университетской больнице Сент-Этьена.Г. Зехендер, С. Антинори, А. Лай и А. Торре участвовали в завершении испытаний и в анализе данных в Университетской больнице Милана. Б. Абдель Хафит участвовал в завершении испытаний и в анализе данных в университетской больнице Падуи. В. Теркеш, А. Хорауф и М. Морович участвовали в завершении испытаний пациентов из Университетской клиники Задара и в анализе данных, проведенных в Университетской больнице Бонна.

Все мы одобрили окончательный вариант рукописи.

Ни у кого из нас нет конфликта интересов, чтобы сообщить о предмете этого исследования.

Диагностика инфекции гепатита А

Глава 6

Инфекция гепатита А обычно диагностируется с помощью анализов крови.

Различные вирусы гепатита человека вызывают очень похожие симптомы. Поэтому ни человек, ни поставщик медицинских услуг не могут определить по симптомам или признакам, страдает ли конкретный человек гепатитом А, если не будут проведены лабораторные анализы.

К счастью, широко доступны анализы крови для точной диагностики гепатита А, включая тесты на антитела или иммунный ответ больного на белки гепатита А. Этот иммунный ответ окончательно подтверждается наличием антител иммуноглобулина M (IgM), что указывает на острое заболевание, и иммуноглобулина G (IgG), что указывает на перенесенную инфекцию или вакцинацию. Антитела IgG присутствуют пожизненно, что свидетельствует об иммунитете.

РНК ВГА присутствует в крови и фекалиях вскоре после заражения (пока у человека нет симптомов) и в течение 1–2 недель после появления симптомов.У детей и ВИЧ-инфицированных может наблюдаться более длительное выделение с калом. ВГА также выделяется со слюной и мочой, но анализов для его обнаружения не существует.

Ниже приведены некоторые рекомендации по интерпретации результатов испытаний:

  • Отрицательный IgM / отрицательный IgG: Большинство людей с такими результатами никогда не болели гепатитом А. Антитела типа IgM вырабатываются за пять-десять дней до появления симптомов.
  • IgM положительный / IgG отрицательный: этот результат указывает на острый гепатит А.
  • Положительный IgM / Положительный IgG: Этот результат указывает на то, что острый гепатит А возник в течение последних шести месяцев. К шести месяцам IgM становится отрицательным.
  • IgM отрицательный / IgG положительный: лица с таким результатом невосприимчивы к гепатиту А. Они либо были инфицированы вирусом несколько месяцев или лет назад (с симптомами или без симптомов), либо они были вакцинированы против гепатита А. Однако, если они в настоящее время больны, это вряд ли связано с гепатитом А.

Тест на антитела к IGG краснухи: цель, процедура и результаты

Краснуха, также называемая краснухой или трехдневной корью, не является проблемой для большинства людей. Он вызывает легкую лихорадку и сыпь, которые проходят через несколько дней. Большинство детей прививаются от него с помощью прививок MMR (корь-паротит-краснуха) или MMRV (включая ветряную оспу).

Но когда вы беременны, краснуха может быть очень серьезной. Если вы заразитесь им в первые 4 месяца, у вашего ребенка могут быть проблемы со зрением, слухом или сердцем, или он может родиться слишком рано.

Кто проходит этот тест?

  • Женщина, которая рожает или планирует завести ребенка
  • Новорожденный ребенок, мать которого могла болеть краснухой во время беременности
  • Ребенок с врожденными дефектами, которые могут быть вызваны краснухой
  • Любой человек с симптомами краснухи
  • Здравоохранение работники, которые не болели краснухой или вакциной
  • Студенты, поступающие в колледж

Как это делается

Техник использует иглу для взятия небольшого образца крови из вены на вашей руке или предплечье.Вы можете почувствовать небольшой укол кожи и небольшое кровотечение или синяк в месте введения иглы. Затем вашу кровь отправят в лабораторию.

Анализ крови на краснуху позволяет определить, есть ли у вас антитела к вирусу краснухи. Антитела — это белки, которые вырабатывает ваша иммунная система, чтобы помочь бороться с инфекциями и не дать вам заболеть. Они предназначены для конкретных микробов, вирусов и других захватчиков. Ваш врач может многое сказать по типу антител, которые у вас есть в крови.

IgM появляется первым после того, как вы заболели краснухой.Он держится от 7 до 10 дней у взрослых и до года у новорожденных. Вы пройдете этот тест, если ваш врач подозревает, что у вас может быть краснуха. Возможно, вам потребуется сдать анализ крови в лаборатории общественного здравоохранения в вашем штате.

IgG остается в крови на всю жизнь. Это означает, что вы перенесли болезнь или вакцину в прошлом и теперь невосприимчивы к вирусу. Вы, вероятно, пройдете этот тест, когда вам нужно будет знать, что вы не можете заболеть краснухой.

Вам потребуются оба теста, если вы беременны и ваш врач подозревает, что у вас краснуха.И вашему ребенку потребуются оба теста после рождения.

Что означают результаты

«Положительный» тест на IgM, означающий наличие IgM в крови, может быть вызван тем, что вы недавно были инфицированы. Но поскольку краснуха не является распространенным заболеванием, тест может быть «ложноположительным» — вы можете быть инфицированы другим вирусом или вместо этого тест реагирует на другие белки в вашей крови. Дополнительные тесты могут подтвердить результат.

«Отрицательный» тест на IgM обычно означает, что вы не инфицированы.Но люди со слабой иммунной системой (например, люди с ВИЧ или принимающие лекарства, подавляющие их иммунную систему) могут быть инфицированы и не способны вырабатывать достаточное количество антител, чтобы выявить их в тесте.

Вот как складываются результаты вашего теста на IgG:

  • Положительный тест равен 1,0 или выше. Это означает, что в вашей крови есть антитела к краснухе, и вы невосприимчивы к инфекции в будущем.
  • Отрицательный тест 0,7 или ниже. У вас слишком мало антител, чтобы выработать иммунитет.

Похожие записи

При гормональном сбое можно ли похудеть: как похудеть при гормональном сбое

Содержание Как похудеть после гормональных таблетокЧто такое гормональные таблеткиПочему прием гормонов ведет к избыточному весу (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({}); […]

Гипотензивные средства при гиперкалиемии: Гипотензивные средства при гиперкалиемии — Давление и всё о нём

Содержание Препараты, применяемые для лечения гипертонической болезни | Илларионова Т.С., Стуров Н.В., Чельцов В.В.Основные принципы антигипертензивной терапииКлассификация Агонисты имидазолиновых I1–рецепторов […]

Прикорм таблица детей до года: Прикорм ребенка — таблица прикорма детей до года на грудном вскармливании и искусственном

Содержание Прикорм ребенка — таблица прикорма детей до года на грудном вскармливании и искусственномКогда можно и нужно вводить прикорм грудничку?Почему […]

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *